pcr實驗室純水要達到幾級

1. PCR實驗室有潔凈度要求么哪個規范寫了

現在為止，沒有哪個標准寫明了PCR要潔凈度等級或者要求，只強調了要盡量滿足潔凈度要求，盡可能的而已。SICOLAB一般設計PCR實驗室都是萬級，至少也得10萬級，當然也有沒等級的，看具體要求叭。

2. 純水的分級標准

實驗室純水可分為個常規等級：純水、去離子水、實驗室Ⅱ級純水和超純水。純水：純化水平最低，通常電導率在它可經由單一弱鹼性陰離子交換樹脂、反滲透或單次蒸餾製成。典型的應用包括玻璃器皿的清洗、高壓滅菌器、恆溫恆濕實驗箱和清洗機用水。去離子水：電導率通常在用含強陰離子交換樹脂的混床離子交換製成，但它有相對較高的有機物和細菌污染水平，能滿足多種需求，如清洗、制備分析標准樣、制備試劑和稀釋樣品等。 實驗室Ⅱ級純水：電導率總有機碳含量以及細菌含量有相關規定。其水質可適用於多種需求，從試劑制備和溶液稀釋，到為細胞培養配備營養液和微生物研究。這種純水可雙蒸而成，或整合和離子交換多種技術製成，也可以再結合吸附介質和燈。 超純水：這種級別的純水在電阻率、有機物含量、顆粒和細菌含量方面接近理論上的純度極限，通過離子交換、膜或蒸餾手段預純化，再經過核子級離子交換精純化得到超純水。通常超純水的電阻率可達18.2M，濾除甚至更小的顆粒。超純水適合多種精密分析實驗的需求，如高效液相色譜，離子色譜和離子捕獲－質譜。少熱源超純水適用於像真核細胞培養等生物應用，超濾技術通常用於去除大分子生物活性物質，如熱源以及無法檢測到的核酸酶和蛋
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3. 基因測序，pcr對純水有什麼要求

PCR產物直接測序技術現已成為分子生物學和基因組學研究中的一個重要技術,廣泛用於基因突變檢測、遺傳性疾病診斷、單核苷酸多態性研究、基因組重疊序列群等.與傳統克隆測序技術相比較,直接對PCR擴增的DNA進行測序,省去了耗時的克隆步驟,避免了傳統的細菌培養,模板提取等重復性操作,可以從少量的原始樣品中得到正確的DNA序列信息.PCR產物直接測序技術具有快速、簡便、穩定經濟的優點. 試驗試劑 PCR擴增的雙鏈DNA模板長約20個核苷酸的DNA引物 DNA聚合酶測序膠 0.1mol/L DDT α-32P-dATP dNTP/ddNTP混合物(80μmol/L/8μmol/L) dNTP(dCTP、dGTP 、dTTP 各0.75μmol/L) 測序反應緩沖液：40mmol/L Tris-HCl(pH7.5),20mmol/L MgCl2,50mmol/L NaCl 終止緩沖液：95% 甲醯胺,20mmol/L EDTA,0.05% 溴酚藍,0.05% 二甲苯腈試驗步驟： 1、 4個微量離心管中各加入dNTP/ddNTP混合物2.5μl,混合物37OC溫浴5min,備用. 2、 在一個空的微量離心管中加入1pmol的PCR擴增雙鏈DNA,10pmol測序引物,2μl 5×測序緩沖液,加雙蒸水至總體積10μl,96OC加熱8min,冰浴泠卻1min,4OC 10000g離心10s. 3、 加入2μl預冷的標記混合物(dCTP、dGTP 、dTTP 各0.75μmol/L),α-32P-dATP 5μCi,1μl 0.1mol/L DDT,測序酶2U,加水至15μl,混勻後置冰上2min,標記新合成的DNA鏈. 4、 在第1步驟的4個管中各加入3.5μl標記反應混合物,37OC溫浴5min.每管各加入4μl終止液. 5、 樣品在80OC的水浴中熱變性5min,每一泳道加2μl 加到測序膠上,電泳分離這些片段. 注意事項： 1.?PCR產物要有一定的長度(>200bp),因為測序結果兩端20-30bp的電泳峰圖的准確性較低. 2.?純化PCR產物可通過離子交換層析使擴增的DNA段與反應剩餘的dNTP及引物分離；也可通過瓊脂糖凝膠電泳,將PCR產物與非特異性擴增產物和引物分離開來；如果擴增的特異性較高時,可直接通過酚：氯仿抽提,乙醇沉澱的方法來純化. 3.?測序引物設計原則類似於PCR引物設計,可在DNA合成儀上合成20個左右的核苷酸作為引物,經過高壓液相層析或聚丙烯醯胺凝膠電泳純化後,即可用作測序引物. PCR循環測序法 PCR循環測序法是將PCR擴增和核酸序列分析技術相結合,從而形成的一種測定核苷酸序列的研究方法,也稱作線性擴增測序.該方法採用PCR儀加熱使DNA模板變性,在TaqDNA聚合酶作用下,以溫度循環模式在模板上進行多輪的雙脫氧核苷酸測序反應,線性擴增標記的DNA分子. PCR循環測序法與以往的測序方法相比,其優點在於：大大減少所需的模板量；能提高測序反應產生的信號,降低了操作的復雜性,且聚合酶的用量減少；可在小量制備的模板上進行篩選反應；高溫下進行的測序反應使DNA聚合酶催化的聚合反應能夠通過模板二級結構的區域；雙鏈閉環DNA可以直接作為反應模板應用,不用作預先鹼變性處理.由於PCR循環測序法能夠簡單、快速地檢測特定序列,因此, PCR循環測序法在核酸序列分析研究中受到廣泛的重視. 試驗試劑： DNA測序試劑盒 dNTP ddNTP 丙烯醯胺雙丙烯醯胺尿素 TEMED(N,N,N『,N』-四甲基乙二胺) 過硫酸銨 6%測序膠：6%丙烯醯胺,7mmol/L 尿素,1×TBE. 10×測序緩沖液：100mmol/L Tris-HCl(pH8.8),500mmol/L KCl,40mmol/L MgCl2,0.01%明膠,20μmol/L dATP,50μmol/L dCTP,50μmol/L dGTP,50μmol/L dTTP 終止混合液：ddATP (600μmol/L),ddCTP (600μmol/L),ddGTP (100μmol/L),ddTTP(1000μmol/L) 終止緩沖液：95%甲醯胺,20mmol/L EDTA,0.05%溴酚藍,0.05%二甲苯腈試驗步驟 1、 4個小離心管,每個小管加入3μl的終止混合液,將管子放在冰上. 2、 在DNA模板中加入引物(4pmol), 4μl 10×測序緩沖液, 10μlα-32P-dATP, 2U TaqDNA聚合酶,加雙蒸水到30μl徹底混勻,每管7μl加入上面4個小管中. 3、 反應液上加30μl的石蠟油. 4、 95OC 30S,50OC 30S,72OC 60S共30個循環,可根據具體的情況進行適當的調整循環條件及循環次數. 5、 反應結束後在油層下加入5μl的終止緩沖液並用加樣槍混勻. 6、 上樣前將樣品在大於80OC的水浴中熱變性5min,每一道加2μl加到測序膠上,電泳分離這些片段. 注意事項： 1、 制備測序模板：PCR 擴增的產物可以經過低熔點的瓊脂糖凝膠電泳純化回收後,用於序列分析；可經過柱層析純化,去除PCR 反應後剩餘的dNTP和引物後,用於序列分析.PCR 產物也可不經純化直接用於測序,但是這種測序產生的結果較差,建議測序之前應進行PCR產物的純化.各種標準的質粒制備方法所純化出的質粒均可作為測序模板使用.用標准方法制備的M13噬菌體、粘粒、λDNA都適合用作測序模板用.但要注意的是反應體系中不應有與引物互補的非目的基因序列,否則將會導致測序實驗的失敗. 2、 測序引物：測序引物是指合成的與測序模板鏈特異性互補的寡核苷酸序列.可用α-32P-dATP和T4多聚核苷酸激酶對引物的5『端進行標記,反應體系中引物、激酶和α-32P-dATP要保持在最佳的比例,以得到高比活性的標記引物；也可用α-32P-dATP標記新合成的DNA鏈.引物的濃度不宜高,否則容易形成引物二聚體,或產生非特異性的擴增引物. 3、 酶：各種缺乏3『—5『端外切活性的耐熱DNA聚合酶都可以用於循環測序,其中TaqDNA聚合酶在DNA測序中最為常用.雖然應用PCR循環測序法能夠簡單、快速的進行基因序列的測定,但仍未能適應大規模DNA序列測定的需要,而PCR循環測序法、熒游標記和自動測序儀的聯合使用成為大規模基因組測序的主要技術.該技術是採用熒游標記引物或雙脫氧核苷三磷酸,反應產物經聚丙烯醯胺凝膠電泳後,經特定的DNA序列分析儀和分析系統處理待測的DNA序列.它的應用減輕了DNA序列測定的工作量,提高了測序的效率.

4. 實驗室純水系統有哪些要求

一般要求電導率小於10微西門子每秒、
PH為中性。
通常要求純水中的雜質元素和回化合物的濃度在答ppb級甚至更低。用於痕跡量分析的高效液相色譜（HPLC）要求極低有機污染物含量的超純水作為流動相成分。通常，痕量分析要求純水中不得含有能被檢測到的物質，而且任何潛在的干擾物都要從水中分離出去。
我們實驗室有做氣相色譜液相色譜重金屬檢測，所以純化水也會定期檢測甲醇乙醇等有機溶劑和被檢物質。
希望可以幫到你。

5. 實驗室純水分為幾級嗎

實驗室純水分四個等級：

1、蒸餾水：

實驗室最常用的一種純水，雖設備便宜，但極其耗能和費水且速度慢，應用會逐漸減少。蒸餾水能去除自來水內大部分的污染物。

2、去離子水：

應用離子交換樹脂去除水中的陰離子和陽離子，但水中仍然存在可溶性的有機物，可以污染離子交換柱從而降低其功效，去離子水存放後也容易引起細菌的繁殖。

3、反滲水：

反滲水克服了蒸餾水和去離子水的許多缺點，利用反滲透技術可以有效的去除水中的溶解鹽、膠體，細菌、病毒、細菌內毒素和大部分有機物等雜質。

4、超純水：

超純水在TOC、細菌、內毒素等指標方面並不相同，要根據實驗的要求來確定，如細胞培養則對細菌和內毒素有要求，而HPLC則要求TOC低。

6. 純水分幾種級別 普通化學實驗是否應該使用一級水

實驗室純水可分為個常規等級：純水、去離子水、實驗室Ⅱ級純水和超純水。純水：純化水平最低，通常電導率在它可經由單一弱鹼性陰離子交換樹脂、反滲透或單次蒸餾製成。典型的應用包括玻璃器皿的清洗、高壓滅菌器、恆溫恆濕實驗箱和清洗機用水。去離子水：電導率通常在用含強陰離子交換樹脂的混床離子交換製成，但它有相對較高的有機物和細菌污染水平，能滿足多種需求，如清洗、制備分析標准樣、制備試劑和稀釋樣品等。 實驗室Ⅱ級純水：電導率總有機碳含量以及細菌含量有相關規定。其水質可適用於多種需求，從試劑制備和溶液稀釋，到為細胞培養配備營養液和微生物研究。這種純水可雙蒸而成，或整合和離子交換多種技術製成，也可以再結合吸附介質和燈。 超純水：這種級別的純水在電阻率、有機物含量、顆粒和細菌含量方面接近理論上的純度極限，通過離子交換、膜或蒸餾手段預純化，再經過核子級離子交換精純化得到超純水。通常超純水的電阻率可達18.2M，濾除甚至更小的顆粒。超純水適合多種精密分析實驗的需求，如高效液相色譜，離子色譜和離子捕獲－質譜。少熱源超純水適用於像真核細胞培養等生物應用，超濾技術通常用於去除大分子生物活性物質，如熱源以及無法檢測到的核酸酶和蛋白質

7. 關於實驗室用水標准

實驗室用水的標准
實驗中的用水，由於實驗目的不同對水質各有一定的要求,如儀器的洗滌、溶液的配製，以及大量的化學反應和分析及生物組織培養，對水質的要求都有所不同。天然水中常常溶有鈉、鈣、鎂的碳酸鹽、硫酸鹽、沙土、氯化物、某些氣體以及有機物等雜質和一些微生物，這樣的水不符合實驗要求。因此需要把水提純，純水常用蒸餾法、離子交換法、反滲透法、電滲析法等方法獲得。用蒸餾方製得的純水叫做蒸餾水；用離子交換法等製得的純水叫去離子水。
(一)蒸餾法制備純水 蒸餾法製取純水的原理是把水加熱至沸，殺死微生物，並使水化成蒸汽，水中的不揮性物質，如大多數無機鹽類不隨水蒸發，而達到水與雜質分離的效果，然後把水蒸汽冷凝並收集起來。水中溶有的氣體雜質可隨水一起蒸發而逸出。將最初收集的冷凝水棄去，就可得到比較純的水，這種水叫蒸餾水。欲想得到更純凈的水可在蒸餾水中加入少量高錳酸鉀溶液再蒸餾一次，可以又除去殘留水中的有機物雜質，但不宜作痕量分析用水。經過再次蒸餾的水稱為重蒸餾水。對於要求較高的實驗還可進行第三次蒸餾，有時用亞沸蒸餾法。
(二)離子交換法制備純水 用離子交換法制備的純水通常稱作「去離子水」或「無離子水」。由於離子交換法製取純水具有出水純度高。操作簡單。已為實驗室廣泛採用：有條件的實驗室均應設立離子交換設備。

8. 實驗室純凈水什麼標准

多數=7 水是實驗室內一個常常被忽視但至關重要的試劑。實驗室用水有那些種類？能達到什麼級別？不同實驗對水的要求有那些？這些問題以前對我來說具有一些模糊的概念，前幾天參加學校的純水裝置的招標，閱讀有關的一些資料，初步了解了相關的知識，現在拿來和大家分享，絕大多數都是本人從外文資料翻譯過來的，不當之處還望各位批評。這些資料也包括freecell戰友在該版塊的精華貼，在此也表示感謝！ 實驗室常見的水的種類： 1、蒸餾水（Distilled Water ）： 實驗室最常用的一種純水，雖設備便宜，但極其耗能和費水且速度慢，應用會逐漸減少。蒸餾水能去除自來水內大部分的污染物，但揮發性的雜質無法去除，如二氧化碳、氨、二氧化硅以及一些有機物。新鮮的蒸餾水是無菌的，但儲存後細菌易繁殖；此外，儲存的容器也很講究，若是非惰性的物質，離子和容器的塑形物質會析出造成二次污染。 2、去離子水（Deionized Water ）： 應用離子交換樹脂去除水中的陰離子和陽離子，但水中仍然存在可溶性的有機物，可以污染離子交換柱從而降低其功效，去離子水存放後也容易引起細菌的繁殖。 3、反滲水（Reverse osmosis Water）： 其生成的原理是水分子在壓力的作用下，通過反滲透膜成為純水，水中的雜質被反滲透膜截留排出。反滲水克服了蒸餾水和去離子水的許多缺點，利用反滲透技術可以有效的去除水中的溶解鹽、膠體，細菌、病毒、細菌內毒素和大部分有機物等雜質，但不同廠家生產的反滲透膜對反滲水的質量影響很大。 4、超純水（Ultra-pure grade water）： 其標準是水電阻率為18.2MΩ-cm。但超純水在TOC、細菌、內毒素等指標方面並不相同，要根據實驗的要求來確定，如細胞培養則對細菌和內毒素有要求，而HPLC則要求TOC低。

9. PCR實驗室有潔凈度要求嗎

我明白你在擔心PCR的高靈敏度. 但是引物是特異性的, 而且你的目的片段的濃度要大大大於環境里隨機片段的濃度. 所以環境是不要求的. 樓主還是擔心一下引物二聚體和非特異擴增吧.

10. PCR實驗室的條件

1、必須擁有標準的的PCR熒光實驗室;
實時熒光定量PCR技術於1996年由美國Applied Biosystems公司推出
由於該技內術不僅實現了PCR從定性容到定量的飛躍，而且與常規PCR相比，它
有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前已得到廣
泛應用。本文試就其定量原理、方法及參照問題作一介紹
2、檢測設備必須符合標准PCR熒光實驗室設置要求;
熒光定量PCR儀+實時熒光定量試劑+通用電腦+自動分析軟體，構成PCR-DNA/RNA實時熒光定量檢測系統。
3、必須通過國家臨床檢驗中心的驗收和認證;4、檢測人員必須通過國家臨檢中心業務培訓並取得合格證書;
PCR實驗室內工作人員必須參加由國家衛生部或各省臨床檢驗中心舉辦的臨床基因擴增培訓班，並持證上崗。PCR實驗室通過驗收，實驗室至少必須應有兩個以上持有「臨床基因檢測上崗證」。PCR實驗室必須建立嚴格的實驗室管理制度、建立標准化操作程序（SOP）、建立系列質量管理文件等，確保實驗室日常運行符合國家衛生部的要求，確保檢測結果准確、確保實驗室衛生安全，確保實驗室長期穩定運行
5、必須在無菌無塵環境下進行操作