C18柱子跑了純水

⑴ 高效液相色譜純化蛋白質一般都用什麼柱子

色譜柱在HPLC中是非常關鍵的部件.一台色譜儀如果沒有色譜柱幾乎什麼工作也做不了.色譜柱是消耗品,有一定壽命,使用中也非常容易出問題.普通的正相反相色譜柱使用得當可用一、兩年.使用不得當用兩、三個月就可能損壞.所以使用中應該非常注意.
1.
在使用一根新的色譜柱之前,一定要看柱說明書,將柱子的使用壓力、pH值、溫度范圍和所用流動相種類都要弄清楚.接觸最多的是C18色譜柱,它對試劑應用的范圍非常廣,甲醇、水、乙腈、四氫呋喃、三氯甲烷、正乙烷、各種緩沖鹽都適用.但其他的色譜柱所使用的試劑就有一定的要求,有的色譜柱只能使用水,不能使用有機試劑,有的色譜柱只能使用有機試劑,而且使用指定是某一種,象GPC色譜柱.這些事情一定搞清楚,如果流動相使用不對,柱子很快會損壞.另外在更換柱子時不能讓不能使用的流動相進入柱子.
2.
柱子是有方向的,柱子上箭頭的方向就是流動相流動的方向.當換新柱子時,不要馬上就接到檢測器上使用.將柱子入口處接在進樣器的出口,柱子出口處（即箭頭的一端）先不接檢測器,按箭頭方向垂直朝上,用流動相（甲醇）以1ml/min的流速沖洗1min左右.將柱子里的小氣泡全部趕走以後再接到檢測器上,否則小氣泡跑到檢測池裡,就很難趕走,檢測器產生雜訊信號,基線也就走不好.
3.
關於壓力對色譜柱的影響：常用的正反兩相色譜柱一般耐壓在12～20MPa之間,生產廠家不同,耐壓也不同,從理論上講耐壓高的色譜柱柱效就高,但柱效高低不僅與耐壓的高低有關,還有其他因素.從使用中看,在保證柱效的同時,耐壓不要太高,儀器所顯示的壓力是流路、混合器、自動進樣器、柱壓、流通池總體的壓力,檢查柱壓力應分段檢查.壓力過高不僅柱子受不了,其他的部件也會出問題,例如自動進樣器.
4.
色譜柱對pH值是有一定的使用范圍.以硅膠為擔體的柱子一般使用范圍在2～7pH.
耐鹼性能不太好,流動相的pH大於8會使硅膠溶解.有些分析條件須用鹼性流動相,這時一定要選耐鹼性好的色譜柱,流動相的PH值過高或過低,流動相使用純水,使用高濃度磷酸鹽緩沖溶液,使用離子對試劑等,均可能造成色譜柱填料被化學破壞,這種對色譜柱固定相及鍵合相的破壞通常是不可修復的.
5.
色譜柱的使用溫度不要超過說明書上規定的溫度.一般使用溫度在60℃以下,典型硅膠基質色譜柱的使用溫度在5℃與60℃之間,高溫使用會縮短柱壽命.
6.
色譜柱使用過程中壓力的驟然波動,溫度的驟然變化或機械撞擊都會對色譜柱床產生影響.進樣過程中,進樣閥轉動太慢引起壓力波動；流速的突然增大都應在日常分析中盡量避免.一般說來,在低柱壓下操作可大大減少由壓力波動造成的柱效損失.這種問題是不可修復的
7.
色譜柱內存在緩沖鹽時,如果用高濃度甲醇或其他有機溶劑沖洗色譜柱,會導致柱內緩沖鹽結晶析出,造成柱壓明顯升高.出現該問題時,反相色譜柱首先應使用20%左右有機溶劑的水溶液低流速沖洗色譜柱,使柱內的鹽全部溶解沖出,再換成高濃度甲醇或其他有機溶劑的流動相.
8.
樣品的預處理,許多樣品,特別是生物樣品與中葯材,其組分復雜,樣品預處理是影響色譜柱壽命的關鍵.樣品經過常規的前處理後,進樣前還需進行以下步驟：a.用微孔過濾膜出除去樣品中的不溶顆粒,以免賭塞柱頭篩板及柱內填充床,使柱壓升高.b.將樣品用流動相溶解或用與流動相互溶的溶劑溶解.
9.
為了保護色譜柱,在色譜柱前接了一個保護柱.保護柱通常是比較短的分析柱,通過吸附可能污染分析柱的強保留雜質,達到保護色譜柱的目的.保護柱的篩板與在線過濾器一樣可以阻擋微粒雜質.為了達到最好的保護效果同時避免導致色譜結果的改變,最好選用與分析柱相同或相似的填料填充保護柱.
10.
色譜柱用合適的溶劑保存,若為C18柱推薦用甲醇保存.在日常分析中,流動相含有的不純物質和樣品中的某些組分會吸附在色譜柱中,隨著分析時間的延長,吸附量會越多,所以柱子要經常清洗,一般柱子使用一兩個星期洗一次,柱子不同清洗的流動相就不同,C18柱子常用甲醇清洗,不要用水清洗這對柱子不好,一般清洗3～4小時,另外色譜柱長時間不用,存放時要將柱子洗干凈,臟柱子放置時間越長,柱效會大大降低.存放時,柱內應充滿溶劑（甲醇或乙腈）,兩端封死.
近幾年化驗室用的液相色譜儀是越來越多,所用色譜柱的種類也越來越多,問題出的也較多,值得注意的是,不論怎樣對色譜柱進行處理,一般都很難恢復到原有水平,因此,大家再使用色譜柱之前一定要看說明書,把以上幾項問題搞清楚後再使用,盡量避免發生如上問題.

⑵ C18反相柱怎樣才能沖得夠干凈

相C18色譜柱（即來憎水柱子）如果自用純水沖洗後，如果立即停泵則由於其憎水（疏水）的緣故使得柱子內的水因而流失掉，長時間停泵使得柱子幹掉（變干），會造成柱子內固定相填料表面鍵合的硅烷基結構塌陷（也說成是失去支撐倒下），柱子就這樣報廢了。

⑶ 怎樣判斷柱子進氣泡了我用C18 4.6x250mm 5um 的柱子走樣品，發現第二天甲醇跑幹了，柱子會不會進氣泡

我們用的HPLC是Agilent1100,1200,1220,如果流動相低於0.2L，泵會自動停，你的甲醇跑幹了，柱子應該是進了回氣泡的。判斷答柱子進氣泡的方法，你可以通過看柱壓，如果只用流動相沖柱子，但是柱壓很不穩定，那柱子就是進氣泡了

⑷ 為什麼普通C18色譜柱不能用純水沖洗

容易引起疏水坍塌，把強保留物質沖出來，會毀了柱子的，所以水相不能超過95%，最開始的梯度淋洗也是高有機相到高水相，但是不是純水相。

⑸ 在沖洗高效液相C18反相柱的時候，為什麼不能用純水

相C18色譜柱（即憎水柱子）如果用純水沖洗後，如果立即停泵則由於其憎水（疏水）專的緣故使得柱子內屬的水因而流失掉，長時間停泵使得柱子幹掉（變干），會造成柱子內固定相填料表面鍵合的硅烷基結構塌陷（也說成是失去支撐倒下），柱子就這樣報廢了。那麼一旦沖洗柱子用了純水相怎麼辦呢？誒！不要驚慌，只要你不停泵，上述情況不會立即發生，我們只要保證最後用有機相沖洗柱子，停泵後使柱子內留存的是有機相，就無大礙，

⑹ 老師，我做液相的，昨晚Agilent XDB C18的柱子被我用水沖了40分鍾，有什麼解救方法

你好，咱們C18的柱子一般是不能走純水的，40min水應該還不是很嚴重，你用純甲回醇低流速答沖色譜柱2小時，進樣一個以前走過的物質，看看柱效情況。如果不理想了，進一針二氯甲烷，再用甲醇沖。沖完後，在進樣看看。

⑺ waters x bridge c18 能耐純水嗎

一般說來，衡量色譜柱的柱壓高低主要以甲醇為流動相時的柱壓為准。內不同的液相儀容柱壓也略有差異。
你所提供的色譜柱，一般情況下，以甲醇為流動相，流速為1ml/min時，柱壓在700-900psi，壓差在50psi以下均為正常。
10%乙腈我沒用過，30%乙腈的一般在1500psi左右，10%乙腈應該比它低。
純水可能損壞色譜柱，純乙腈可能堵塞單向閥，不建議使用上述流動相。

⑻ 我的液相C18反相柱，用純乙腈沖洗的壓力由開始的3、4MPa上升到現在的20幾MPa，怎麼回事急需解救！

如果你接其他的柱子沒有問題的話，肯定是你的柱子之前的鹽沒有沖洗干版凈導致鹽結晶了權。鹽用有機相是沖不掉的，只能用水沖，但是像這種反相柱不能用純水沖，純水會溶解硅膠，導致相坍塌。

你可以視情況改變有機相與水的比例來沖。一般可用5%的甲醇溶液小流速沖洗。 不行就反沖吧。

希望對你有幫助，望採納！！

⑼ 液相色譜C18柱堵塞後如何沖洗柱子，能用純水 沖柱子嗎

C18柱子抄不能用純水沖洗，再說本來就堵了，壓力很高應該選擇壓力低的溶劑。
如果你確定是堵塞了，就用純乙腈反沖，先用低一點的流速，比如01ml/min，看壓力情況，不要超過200bar，再慢慢提高流速，但不要超過1.的流速，如果是真的堵了，可能會壓力慢慢降下來的。
如果上面方法不行，那還有可能是鹽析堵的，那就用乙腈：水=90：10反沖。

⑽ 求助求助，waters的柱子不小心用純水沖了

你問的應該是反相色譜柱，因為凝膠過濾用純水相是司空見慣的。
Agilent的專Bonus系列，Aichorm的Aqua系列，都是可以做純屬水相的。
但你如果只是考慮梯度起點的高水相比例，那就不必了，普通的C18、C8都可以用純水相短時間沖洗，不超過10個柱體積，是沒什麼問題的。