免疫組化一抗用純水稀釋
A. 免疫組化一抗是單抗還是多抗好
根據你的實來驗需求來確定。自
如果你的目標蛋白豐度小,則用多抗可能抗體結合位點多,信號能強些。
如果你的實驗對免疫染色特異性要求高,需要特別注意排除假陽性,則選擇單抗能夠得到比較可靠的結果。
最後如果費用也是個大問題,就要考慮到多抗比單抗便宜。
B. 石蠟切片免疫熒光與免疫組化一抗濃度有區別嗎
免疫熒光的一抗濃度一般高於免疫組化的一抗濃度,但是也要看具體情況:
因此免疫熒光一般採取二步法,而免疫組化中有biotin放大這一步。所以建議免疫熒光的時候重新摸索濃度,要是採用三步法可能不需要摸索了。另我們免疫熒光抗體一般用推薦濃度。
免疫熒光抗體濃度要根據免疫組化結果的強弱調整,如果較強,用相同濃度即可;如果組化陽性較弱,那麼做熒光時要加大抗體濃度。至於免疫組化的抗體是否能做免疫熒光,其實是由組織類型及標本的固定方式決定的。一般組化為石蠟切片,熒光為冰凍切片或細胞爬片。如果組化和熒光用的是相同的標本,那麼抗體就能通用,畢竟組化和熒光的區別在於一抗的呈現方式,而非抗原抗體的結合。
C. 免疫組化的一抗和二抗濃度和孵育時間有什麼要求啊
一抗孵來育溫度有幾種:源4度、室溫、37度,其中4度效果最佳;孵育時間與溫度、抗體濃度有關,一般37度1-2h,4度過夜(從冰箱拿出後37度復溫45min)。具體條件還要摸索。二抗一般室溫或37度30min-1h,濃度一般有工作液,若是濃縮液還要摸索濃度。可以找下愛必信
D. 免疫組化為什麼要用一抗又要用二抗啊
一抗特異性結合組織中你要檢測的物質,而二抗則能和一抗結合,並帶有放射性、生物素或者地高辛標記,使得你可以觀察到。
E. 免疫組化一抗用什麼稀釋PBS可以嗎
建議用血清稀釋,最理想的方法是用二抗同種屬的血清,如二抗是山羊的,用山羊血清,或者是用2%BSA,前提是一抗不是牛的。也就是說,一抗是羊的,小鼠的,兔子的,都可以用BSA。
F. 免疫組化一抗怎麼制備
最方便的辦法是直接購買商品化的,尤其是對於一些常見抗原的檢查。因為免疫組專化實驗步驟繁多,非常復雜,如屬果自己制備抗體,還需要大量的時間來免疫動物(幾個月),獲得抗體後還要篩選,優化。因為很多抗體公司的IHC抗體都是經過很多實驗驗證的,直接購買使用,效果也有保障。
以前很多醫院做免疫組化買的是lab
vision的抗體。或者是通過biocompare查有哪些公司提供你要的抗體。
如果已經有抗體了,基本上就是用封閉緩沖液,稀釋到建議的濃度,孵片就行了。
G. 免疫組化中一抗與二抗有什麼要求謝謝!
比如一抗是鼠抗人,二抗必須是×抗鼠的。×表示可以是羊,兔,馬等。一抗是單抗,二抗是多抗,是抗一類同種異型的Ig,帶有特殊的可產生發光現象的標記。
條件允許盡量選擇進口,一抗abcam,Santa,CST等值得信賴,二抗的話國產的就行了。
源性一抗如果需要做共定位,那麼就需要不同源性的且要能夠用於人組織的,可以做組化的,二抗建議選擇驢抗,這樣用處多;如果說是做組織化學,那麼一抗源性就無所謂了只要能用於人的組織,二抗相應配套就行。
(7)免疫組化一抗用純水稀釋擴展閱讀:
抗體選擇沒問題,關於二抗你直接購買國產的二抗試劑盒就可以了,如中杉金橋或者博士德的都沒問題,裡面封閉用的過氧化氫和山羊血清都有的。按照試劑盒說明,一步一步做即可。
免疫熒光,ABC,western blotting一抗應該可以通用,
某些抗體的說明書上會給推薦效價,有時會同時給出western blotting 和免疫組化的效價。
一點更正:
免疫熒光就是一種免疫組化方法!免疫熒光使用的是熒光抗體(熒光一抗為直接法,普通一抗加熒光二抗為間接法)。
免疫組化的二抗必須是抗一抗物種的抗原,比如說:做A動物的B蛋白所用的一抗為動物C抗動物A的B蛋白抗體,二抗就應該是動物D抗動物C抗體。
如:豚鼠抗大鼠cofilin1一抗,羊抗豚鼠二抗。二抗遠比一抗便宜。
H. 免疫組化為什麼要用一抗又要用二抗啊
一抗,特異性識別靶標分子;
二抗,起到信號放大的作用
I. 免疫組化為什麼要用一抗又要用二抗啊求解
一抗,是免疫組化中特非同步驟,決定著你的檢查目標。
二抗,是特異性結合一抗,通常是Fc,具有放大檢測信號,提高檢測靈敏度。