茚三酮試劑純水合茚三酮析還原態茚三酮
❶ 水合茚三酮試液與茚三酮試液一樣嗎
一水抄茚三酮為試劑。近似為白色結晶,或淺黃色結晶粉末,微溶於乙醚及三氯甲烷,100℃以上變為紅色。
茚三酮試液是用茚三酮配製的溶液,可以有不同濃度。比如可以把2g茚三酮溶解於100mL乙醇中。水合茚三酮試液是用一水合茚三酮配製的試液。
配製相同濃度的試液兩者所加的量不一樣,其他的是一樣的。
❷ 茚三酮顯色機理是什麼
茚三酮是一種用於檢測氨或者一級胺和二級胺的試劑。當與這些游離胺反應時,能夠產生深藍色或者紫色的物質,叫做Ruhemann紫。
茚三酮常用來檢測指紋,這是由於指紋表面所蛻落的蛋白質和肽中含有的賴氨酸殘基,其上的一級胺被茚三酮檢測。在室溫條件下,它是一種白色的固體物質,溶於乙醇和丙酮。茚三酮可以看作是是二氫茚-1,2,3-三酮的水合物。
(2)茚三酮試劑純水合茚三酮析還原態茚三酮擴展閱讀:
應用領域
茚三酮可以用來監測固相肽合成中的脫保護作用(Kaiser測試)。肽鏈通過C端與固相基質連接,利用N端擴展肽鏈,當N脫保護後,茚三酮測試呈藍色。
氨基酸殘基是在N端被保護的情況下接入肽鏈的,因此如果下一個氨基酸殘基成功的連接到肽鏈上,茚三酮測試會給出無色或者黃色的結果。
茚三酮也可以用於蛋白質的氨基酸分析。除去脯氨酸之外的大多數氨基酸,水解之後可與茚三酮反應。水解中某些氨基酸的側鏈也會被降解。因此對於那些與茚三酮不反應或者發生其他反應的氨基酸需要另作分析。
其餘的氨基酸經過色譜分離後可以比色定量。在分析化學反應的薄層色譜(TLC)中,它可以用於檢測所有的胺類,氨基甲酸酯類,在經過充分熱處理後可以檢測醯胺類物質。
當茚三酮與氨基酸反應時可以釋放CO2。二氧化碳中的碳原子來源於氨基酸的羧基碳。在考古研究中,這個反應用於釋放古老骨骼中羧基碳用於穩定同位素分析,以幫助重現古代生物的食物結構。
❸ 茚三酮顯色問題
我覺得樓上的解答有個不妥之處:樓主說明了過程,無論是反應前試樣的處理還是反應後的測定,都是冷卻了的。所以,溫度這方面應該不會影響測定了。而樓主擔心的氨基酸濃度過低這種假設可能也不會很大,因為茚三酮的顯色反應檢出下限很低,只要有幾微克的氨基酸都能檢測出來。
所以我分析可能有兩個原因:
1,pH值的影響。樓主在實驗中兩次用到緩沖液調節pH=5.5,但是在最後顯色的一步是在加熱的狀況下進行的。沒有在反應過程中檢測pH值的變化,導致顏色不是Ruhemann紫。而茚三酮與氨基酸作用得到的藍紫色物質是一種銨鹽。從結構上看,季銨和還原的酮的氧連在一起,這本來就是個亞穩定結構。季銨鹽容易把H+給O得到一個羥基,所以很依賴pH的變化。那麼你的溶液不停變化吸光度就能解釋了,是由於Ruhemann紫因pH不適不斷釋放NH3或NH4+的結果。這個情況一般是由於pH值過大引起的。
2,沒有反應完全。在進行樣品沉降時其實很有可能殘留了許多蛋白質和多肽。多肽和蛋白質也能形成這個反應,但是肽越大反應就越不靈敏。所以有可能是第三產物,中間得到的醛可能會影響了這個反應,可能會生成其他帶有顏色的副產物干擾紫色的呈現。但是在逐漸反應後,醛由於大基團逐漸分解對反應的影響越來越小,這個干擾也就變小了,實際的紫色濃度自然比原來要弱許多。
以上只是個人推測,沒有依據。建議你用其它方法測定,比如用茚三酮作顯色劑的紙層析色譜,不僅可以計算總量,還可以初步估計氨基酸種數。
❹ 為什麼氨基酸與茚三酮反應要在酸性的條件下,還得要沸水浴加熱 謝謝咯
因為這個反應鑒定氨基酸的實質是,還原性的茚三酮與氨還有一分子水合茚三酮反應,縮合內成藍紫色物質,這容個反應需要弱酸性的條件,因此需要酸。
這裡面,氨從氨基酸里來。但氨基酸常溫下相對穩定,試驗需要還原性的茚三酮,而一般溶劑中都是水合茚三酮,這都需要加熱,使它們活化。
主要反應分為兩步 :
第一步 氨基酸 + 弱酸→ 水合茚三酮 + 二氧化碳 + 醛類 + 氨氣
第二步 兩個水合茚三酮 + 氨→ 還原性茚三酮 (藍紫色)
(4)茚三酮試劑純水合茚三酮析還原態茚三酮擴展閱讀:
應用:
此反應十分靈敏,根據反應所生成的藍紫色的深淺,用分光光度計在570nm波長下進行比色就可測定樣品中氨基酸的含量(在一定濃度范圍內,顯色溶液的吸光率與氨基酸的含量成正比)。
也可以在分離氨基酸時作為顯色劑對氨基酸進行定性或定量分析。在法醫學上,使用茚三酮反應可採集嫌疑犯在犯罪現場留下來的指紋。因為手汗中含有多種氨基酸,遇茚三酮後起顯色反應。
❺ 茚三酮與甘氨酸反應,然後烘乾顏色變化的原因
氨基酸的α-NH2所引起的反應。α-氨基酸與水合茚三酮一起在水溶液中加熱,可發生反應生成藍紫色物質。首先是氨基酸被氧化分解,放出氨和二氧化碳,氨基酸生成醛,水合茚三酮則生成還原型茚三酮。在弱酸性溶液中,還原型茚三酮、氨和另一分子茚三酮反應,縮合生成藍紫色物質。
所有氨基酸及具有游離α-氨基的肽都產生藍紫色,但脯氨酸和羥脯氨酸與茚三酮反應產生黃色物質,因其α-氨基被取代,所以產生不同的衍生物。
此反應十分靈敏,根據反應所生成的藍紫色的深淺,在570nm波長下進行比色就可測定樣品中氨基酸的含量。也可在分離氨基酸時作為顯色劑定性、定量地測定氨基酸。
(5)茚三酮試劑純水合茚三酮析還原態茚三酮擴展閱讀:
除脯氨酸、羥脯氨酸和茚三酮反應生成黃色物質外,所有的α-氨基酸及一切蛋白質都能和茚三酮反應生成藍紫色物質。該反應分兩步進行,首先是氨基酸被氧化,產生 CO2 、NH3和醛,而水合茚三酮被還原成還原型茚三酮。
第二步是所生成之還原型茚三酮與另一個水合茚三酮分子和氨縮合生成有色物質。此反應的適宜pH為5~7,同一濃度的蛋白質或氨基酸在不同pH條件下的顏色深淺不同,酸度過大時甚至不顯色。
該反應十分靈敏,1:1 500 000濃度的氨基酸水溶液即能顯示反應,因此是一種常用的氨基酸定量方法。但也有些物質對茚三酮也呈類似的陽性反應,如β-丙氨酸、氨和許多一級胺化合物等。所以定性或定量測定中,應嚴防干擾物存在。
主要反應分為兩步 :
第一步 氨基酸 + 弱酸→ 水合茚三酮 + 二氧化碳 + 醛類 + 氨氣。
第二步 兩個水合茚三酮 + 氨→ 還原性茚三酮 (藍紫色)。
❻ 氨基酸和茚三酮的顯色反應 會有三種不同顏色的原因
茚三酮反應分為兩步,第一步是氨基酸被氧化形成 CO2、NH3 和醛,水合茚三酮被回還原成還原型茚三酮;第二步是答所形成的還原型茚三酮同另一個水合茚三酮分子和氨縮合生成有色物質。
大多數氨基酸反應形成藍紫色產物,
谷氨醯胺和天冬醯胺與茚三酮反應則形成棕色產物。
而脯氨酸則與茚三酮反應則形成黃色產物
大多數氨基酸的α-氨基與茚三酮反應生成藍紫色產物
而谷氨醯胺和天冬醯胺則因為另外含一個醯胺基可與茚三酮反應,生成棕色產物
最後脯氨酸則是因為脯氨酸與一般α-氨基酸不同,沒有自由的α-氨基.,其α-氨基是亞氨基
❼ 茚三酮是否可用於氨基酸和蛋白質的定性鑒定
可以的,茚三酮也可以用於蛋白質的氨基酸分析。除去脯氨酸之外的大多數氨基酸,水解之後可與茚三酮反應。水解中某些氨基酸的側鏈也會被降解。因此對於那些與茚三酮不反應或者發生其他反應的氨基酸需要另作分析。
其餘的氨基酸經過色譜分離後可以比色定量。在分析化學反應的薄層色譜(TLC)中,它可以用於檢測所有的胺類,氨基甲酸酯類,在經過充分熱處理後可以檢測醯胺類物質。
當茚三酮與氨基酸反應時可以釋放CO2。二氧化碳中的碳原子來源於氨基酸的羧基碳。在考古研究中,這個反應用於釋放古老骨骼中羧基碳用於穩定同位素分析,以幫助重現古代生物的食物結構。
用一種標記底物處理的土壤,隨後利用茚三酮與氨基酸的反應釋放羧基胺,可以證明這種底物是否被吸收進微生物蛋白質。這種方法成功的發現了一些氨氧化細菌(也叫做硝化細菌)利用土壤中的尿素作為碳源。
法醫常用茚三酮溶液分析諸如紙張等多孔表面上的潛指紋。手指所分泌的細微汗液聚集於獨特的手指紋路表面,也即含有氨基酸的指紋,經過茚三酮處理可以將氨基酸指尖紋路變為可見的紫色。
(7)茚三酮試劑純水合茚三酮析還原態茚三酮擴展閱讀
反應機理
除脯氨酸、羥脯氨酸和茚三酮反應生成黃色物質外,所有的α-氨基酸及一切蛋白質都能和茚三酮反應生成藍紫色物質。
該反應分兩步進行,首先是氨基酸被氧化,產生 CO2 、NH3和醛,而水合茚三酮被還原成還原型茚三酮;第二步是所生成之還原型茚三酮與另一個水合茚三酮分子和氨縮合生成有色物質。此反應的適宜pH為5~7,同一濃度的蛋白質或氨基酸在不同pH條件下的顏色深淺不同,酸度過大時甚至不顯色。
該反應十分靈敏,1:1 500 000濃度的氨基酸水溶液即能顯示反應,因此是一種常用的氨基酸定量方法。但也有些物質對茚三酮也呈類似的陽性反應,如β-丙氨酸、氨和許多一級胺化合物等。所以定性或定量測定中,應嚴防干擾物存在。
主要反應過程:
首先茚三酮水合物和氨基反應,失去二分子水,然後失羧,生成亞胺,水解後得到氨基茚二酮,再和一分子茚三酮水合物失水,然後互變異構,即得到紫色的化合物。
參考資料來源:網路-茚三酮反應
參考資料來源:網路-茚三酮
❽ 茚三酮反應在溶液中為何是先粉紅色再紫紅色最後變藍色
反應機理顯色反應方法反應應用茚三酮顯色反應的影響因素分析
茚三酮反應
氨基酸的α-NH2所引起的反應。α-氨基酸與水合茚三酮一起在水溶液中加熱,可發生反應生成藍紫色物質。首先是氨基酸被氧化分解,放出氨和二氧化碳,氨基酸生成醛,水合茚三酮則生成還原型茚三酮。在弱酸性溶液中,還原型茚三酮、氨和另一分子茚三酮反應,縮合生成藍紫色物質。 所有氨基酸及具有游離α-氨基的肽都產生藍紫色,但脯氨酸和羥脯氨酸與茚三酮反應產生黃色物質,因其α-氨基被取代,所以產生不同的衍生物。此反應十分靈敏,根據反應所生成的藍紫色的深淺,在570nm波長下進行比色就可測定樣品中氨基酸的含量。也可在分離氨基酸時作為顯色劑定性、定量地測定氨基酸。
此反應十分靈敏,根據反應所生成的藍紫色的深淺,用分光光度計在570nm波長下進行比色就可測定樣品中氨基酸的含量(在一定濃度范圍內,顯色溶液的吸光率與氨基酸的含量成正比),也可以在分離氨基酸時作為顯色劑對氨基酸進行定性或定量分析。在法醫學上,使用茚三酮反應可採集嫌疑犯在犯罪現場留下來的指紋。因為手汗中含有多種氨基酸,遇茚三酮後起顯色反應。
除脯氨酸、羥脯氨酸和茚三酮反應生成黃色物質外,所有的α-氨基酸及一切蛋白質都能和茚三酮反應生成藍紫色物質。該反應分兩步進行,首先是氨基酸被氧化,產生 CO2 、NH3和醛,而水合茚三酮被還原成還原型茚三酮;第二步是所生成之還原型茚三酮與另一個水合茚三酮分子和氨縮合生成有色物質。此反應的適宜pH為5~7,同一濃度的蛋白質或氨基酸在不同pH條件下的顏色深淺不同,酸度過大時甚至不顯色。該反應十分靈敏,1:1 500 000濃度的氨基酸水溶液即能顯示反應,因此是一種常用的氨基酸定量方法。
❾ 茚三酮乙醇溶液和茚三酮丙酮溶液的區別是什麼啊,有什麼使用范圍
茚三酮丙酮溶液:茚三酮1—5克,丙酮100毫升。
茚三酮乙醇溶液:茚三酮1—5克,乙醇100毫升。
使用范圍:
茚三酮可以用來監測固相肽合成中的脫保護作用(Kaiser測試)。肽鏈通過C端與固相基質連接,利用N端擴展肽鏈,當N脫保護後,茚三酮測試呈藍色。氨基酸殘基是在N端被保護的情況下接入肽鏈的,因此如果下一個氨基酸殘基成功的連接到肽鏈上,茚三酮測試會給出無色或者黃色的結果。
茚三酮也可以用於蛋白質的氨基酸分析。除去脯氨酸之外的大多數氨基酸,水解之後可與茚三酮反應。水解中某些氨基酸的側鏈也會被降解。因此對於那些與茚三酮不反應或者發生其他反應的氨基酸需要另作分析。其餘的氨基酸經過色譜分離後可以比色定量。在分析化學反應的薄層色譜(TLC)中,它可以用於檢測所有的胺類,氨基甲酸酯類,在經過充分熱處理後可以檢測醯胺類物質。
當茚三酮與氨基酸反應時可以釋放CO2。二氧化碳中的碳原子來源於氨基酸的羧基碳。在考古研究中,這個反應用於釋放古老骨骼中羧基碳用於穩定同位素分析,以幫助重現古代生物的食物結構。用一種標記底物處理的土壤,隨後利用茚三酮與氨基酸的反應釋放羧基胺,可以證明這種底物是否被吸收進微生物蛋白質。這種方法成功的發現了一些氨氧化細菌(也叫做硝化細菌)利用土壤中的尿素作為碳源[4]。法醫常用茚三酮溶液分析諸如紙張等多孔表面上的潛指紋。手指所分泌的細微汗液聚集於獨特的手指紋路表面,也即含有氨基酸的指紋,經過茚三酮處理可以將氨基酸指尖紋路變為可見的紫色
❿ 水合茚三酮與茚三酮有什麼不同
茚三酮(ninhydrin)各種氨基酸和多肽和它在弱酸性溶液中加熱,發生氨基酸氧化,版脫氨,和權脫羧反映,然後茚三酮與反映產物——氨和還原性茚三酮反映,最終生成藍紫色化合物
還原性茚三酮就是連2個羥基的那個碳上其中一個羥基變成氫