純水中DNA
Ⅰ DNA保存在純水中和在鹽溶液中有何區別
保存在純水中沒有在鹽溶液中穩定,保存的時間不夠長,易降解;但保存在鹽溶液中對於後續的有些實驗會有影響.短期用一般保存在純水中.…………………
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詳細資料請參考:
Ⅱ 雙鏈DNA在純水中會自動變性解鏈 這句話對不對
不會,解鏈需要在高溫進行。所謂解鏈就是使雙鏈分離成單鏈,比如PCR中常用的94或者95℃就是高溫解鏈。
Ⅲ 核酸的保存,小為什麼RNA可以放在純水裡DNA卻不能
你問反了吧,做質粒DNA純化,用試劑盒最後一步洗脫就可以用熱的純水,然後冷凍就專OK了
而對於大多數RNA,由於是單鏈屬,而且環境中有菌,存在大量的 RNA酶 ,一般不容易保存,有些RNA酶熱滅菌都不能失活
Ⅳ 水煮法提取DNA 的詳細過程
提法:
利用核酸溶解於水的性質,將組織細胞破碎後,用低鹽溶液除去RNA,然後將沉澱溶於水中,使DNA充分溶解於水中,離心後收集上清液.在上清中加入固體氯化鈉調節至2.6M.加入2倍體積95%乙醇,立即用攪拌法攪出.然後分別用66% ٠80%和95%乙醇以及丙銅洗滌,最後在空氣中乾燥,既得DNA樣品.此法提取的DNA中蛋白質含量較高,故一般不用.為除蛋白可將此法加以改良,在提取過程中加入SDS.
一.DNA的提取方法簡介
為了研究DNA分子在生命代謝中的作用,常常需要從不同的生物材料中提取DNA.由於DNA分子在生物體內的分布及含量不同,要選擇適當的材料提取DNA。
動植物中,小牛胸腺۰動物肝臟۰魚類精子,植物種子的胚中都含有豐富的DNA。
微生物中,谷氨酸菌體含7%~10%,麵包酵母含4%,啤酒酵母含6%,大腸肝菌含9%~10%。
從各種材料中提取DNA方法不同,分離提取的難易程度也不同。
對於低等生物。如從病毒中提取DNA 比較容易,多數病毒DNA 分子量較小,提取時易保持其結構完整性。
從細菌及高等動植物中提取DNA難度大一些。細菌DNA 分子量較大,一般達2×10 道爾頓。因此易被機械張力剪斷。細菌DNA,除核DNA 外,還有質粒DNA 等。
1、核酸的理化性質
RNA和核苷酸的純品都呈白色粉末或結晶,DNA則為白色類似石棉樣的纖維狀物。除肌苷酸、鳥苷酸具有鮮味外,核酸和核苷酸大都呈酸味。
DNA、RNA和核苷酸都是極性化合物,一般都溶於水,不溶於乙醇、氯仿等有機溶劑,它們的鈉鹽比游離酸易溶於水,RNA鈉鹽在水中溶解度可達40g/L。DNA在水中為10g/L,呈黏性膠體溶液。在酸性溶液中,DNA、RNA易水解,在中性或弱鹼性溶液中較穩定。
天然狀態的DNA 是以脫氧核糖核蛋白(DNP)形式存在於細胞核中。要從細胞中提取DNA 時,先把DNP抽提出來,再把P除去,再除去細胞中的糖,RNA 及無機離子等,從中分離DNA 。
DNP和RNP在鹽溶液中的溶解度受鹽濃度的影響而不同。DNP在低濃度鹽溶液中,幾乎不溶解,如在0.14 mol/L的氯化鈉溶解度最低,僅為在水中溶解度的1%,隨著鹽濃度的增加溶解度也增加,至1mol/L氯化鈉中的溶解度很大,比純水高2倍。
RNP在鹽溶液中的溶解度受鹽濃度的影響較小,在0.14mol/L氯化鈉中溶解度較大。因此,在提取時,常用此法分離這兩種核蛋白。
2.細胞的破碎
細菌有堅硬的細胞壁,首先要破碎經胞。方
法有三種:①機械方法:超聲波處理法、研磨法、勻漿法;②化學試劑法:用SDS處理細胞; ③酶解法:加入溶菌酶或蝸牛酶,都可使細胞壁破碎。
由於高等動物DNA 主要存在於細胞核與線粒體中,所以提取時有兩個困難(高等植物與此類似):
①破碎細胞難;從處死動物٠分離組織器宮到破碎細胞費時長。在此時期間DNA 可能會被DN ase降解,而動物組織:特別是肌肉組織很難破碎,即使是較易破碎的肝٠腎等組織也往往使用組織勻漿器,易造成DNA 斷裂。
②分子量大,一般比細菌的大2—3個數量級,比病毒的大4—5個數量。對不同生物材料,要根據具體情況選擇適當的分離提取方法。
3.DNA提取的幾種方法
(1).濃鹽法
利用RNP和DNP在電解溶液中溶解度不同,將二者分離,常用的方法是用1M 氯 納提取化鈉抽提,得到的DNP粘液與含有少量辛醇的 氯仿一起搖盪,使乳化,再離心除去蛋白質,此時蛋白質凝膠停留在水相及氯仿相中間,而DNA位於上層水相中,用2倍體積95%乙醇可將DNA 鈉鹽沉澱出來.
也可用0.15 MNaCL液反復洗滌細胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脫氧核糖蛋白,再按氯仿---異醇法除去蛋白.
兩種方法比較,後種方法使核酸降解可能少一些.
以稀鹽酸溶液提取DNA 時,加入適量去污劑,如SDS可有助於蛋白質與DNA 的分離。在提取過程中為抑制組織中的DNase對DNA 的降解作用,在氯化鈉溶液中加入檸檬酸鈉作為金屬離子的烙合劑.通常用.15MNaCL,0.015M檸檬鈉,並稱SSC溶液,提取DNA.
(2).陰離子去污劑法:
用SDS或二甲苯酸鈉等去污劑使蛋白質變性,可以直接從生物材料中提取DNA .由於細胞中DNA與蛋白質之間常借靜電引力或配位鍵結合,因為陰離子去污劑能夠破壞這種價鍵,所以常用陰離子去污劑提取DNA.
(3).苯酚抽提法:
苯酚作為蛋白變性劑,同時抑制了DNase的降解作用.用苯酚處理勻漿液時,由於蛋白與DNA 聯結鍵已斷,蛋白分子表面又含有很多極性基團與苯酚相似相溶。蛋白分子溶於酚相,而DNA溶於水相。離心分層後取出水層,多次重復操作,再合並含DNA 的水相,利用核酸不溶於醇的性質,用乙醇沉澱DNA 。此時DNA是十分粘稠的物質,可用玻璃漫漫繞成一團,取出。此法的特點是使提取的DNA保持天然狀態 .
Ⅳ DNA保存在純水中和在鹽溶液中有何區別
保存在純水中沒有在鹽溶液中穩定,保存的時間不夠長,易降解;但保存在鹽溶液中對於專後續的有些實驗屬會有影響。短期用一般保存在純水中。 …………………
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詳細資料請參考:
鹽溶液: http://proct.bio1000.com/100030/
Ⅵ 雙鏈DNA在純水中,會自動變性解鏈嗎為什麼
會
看你放置的環境,都會慢慢降解,低溫解鏈緩慢
Ⅶ DNA在純水中為何易變性
DNA的骨架磷酸根帶負電,在純水中沒有陽離子來中和它的電性,所以無法維持雙螺旋結構,易變性。
Ⅷ 為什麼DNA在純水中易變性
DNA在純水中易變性原因:每一個核苷酸的磷酸基上都帶有一個負電荷。版如果這些負電荷權沒有被中和,雙鏈之間的這種強有力的靜電排斥作用將驅使兩條鏈分開(在同一條鏈內雖然也存在著這種靜電斥力,但由於鏈內的共價鍵,這種靜電斥力並不重要)。但是當有鹽類加入時,這些帶負電荷的磷酸基團可以被正離子(如Na+)所中和,也就是正離子圍繞在磷酸基周圍形成了"離子雲",有效地屏蔽了磷酸基之間的靜電斥力。這就是Debye-Hvckel 離子屏蔽理論。
Ⅸ DNA保存在純水中和保存在鹽溶液中有什麼不同
保存在純水中沒有在鹽溶液中穩定,保存的時間不夠長,易降解;但保存在鹽溶液中對於後續的有些實驗會有影響。短期用一般保存在純水中。
Ⅹ DNA在水相中的分配與pH的關系求解。。
您問的是DNA在水溶液分子解離情況與pH的關系嗎,只有在互不相溶的兩相中才談分配問內題
DNA的等電點為4~容4.5,因為其分子中的磷酸基團解離質子的傾向略大於其含氮鹼基N原子捕獲質子的傾向。故在DNA處於pI值時,二者解離度相同,分子靜電量趨於0;在低於pI值的pH范圍內,磷酸基團的解離受抑制,鹼基N俘獲質子趨勢增高,DNA分子在不分解情況下逐漸顯正電性;在高於pI的pH范圍內原理相同,解離情況相反,分子漸顯負電性。後兩者在純水溶液中的溶解度會有增加