蛋白質離子交換分離的基本步驟

『壹』 求離子交換色譜法分離蛋白質試驗步驟

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『貳』 蛋白質分離純化的四種方法

1、鹽析法：

鹽析法的根據是蛋白質在稀鹽溶液中，溶解度會隨鹽濃度的增高而上升，但當鹽濃度增高到一定數值時，使水活度降低，進而導致蛋白質分子表面電荷逐漸被中和，水化膜逐漸被破壞，最終引起蛋白質分子間互相凝聚並從溶液中析出。

2、有機溶劑沉澱法：

有機溶劑能降低蛋白質溶解度的原因有二：其一、與鹽溶液一樣具有脫水作用；其二、有機溶劑的介電常數比水小，導致溶劑的極性減小。

3、蛋白質沉澱劑：

蛋白質沉澱劑僅對一類或一種蛋白質沉澱起作用，常見的有鹼性蛋白質、凝集素和重金屬等。

4、聚乙二醇沉澱作用：

聚乙二醇和右旋糖酐硫酸鈉等水溶性非離子型聚合物可使蛋白質發生沉澱作用。

(2)蛋白質離子交換分離的基本步驟擴展閱讀：

蛋白質是生命的物質基礎，是有機大分子，是構成細胞的基本有機物，是生命活動的主要承擔者。沒有蛋白質就沒有生命。氨基酸是蛋白質的基本組成單位。它是與生命及與各種形式的生命活動緊密聯系在一起的物質。

機體中的每一個細胞和所有重要組成部分都有蛋白質參與。蛋白質占人體重量的16%~20% ，即一個60kg重的成年人其體內約有蛋白質9.6~12kg。

人體內蛋白質的種類很多，性質、功能各異，但都是由20多種氨基酸（Amino acid）按不同比例組合而成的，並在體內不斷進行代謝與更新。

『叄』 怎麼用離子交換層析分離等電點分別為4，6，7， 9 的蛋白質

6．洗脫：用含NaCL(0.2-0.6M)的0.02M
Tris-HCL
緩沖液
pH7.4(內含0.
等電聚焦電泳
（IEF）分離蛋白及測定
蛋白質等電點
一、原理
等電點聚焦
（IEF）

『肆』 蛋白質分離方法有哪些它們的特點各是什麼

據蛋白質分子大小不同進行分離的方法主要有透析、超濾、離心和凝膠過濾等專。

透析和超屬濾是分離蛋白質時常用的方法。

透析是將待分離的混合物放入半透膜製成的透析袋中,再浸入透析液進行分離。超濾是利用離心力或壓力強行使水和其它小分子通過半透膜,而蛋白質被截留在半透膜上的過程。

這兩種方法都可以將蛋白質大分子與以無機鹽為主的小分子分開。

它們經常和鹽析、鹽溶方法聯合使用,在進行鹽析或鹽溶後可以利用這兩種方法除去引入的無機鹽。

由於超濾過程中,濾膜表面容易被吸附的蛋白質堵塞,以致超濾速度減慢,截流物質的分子量也越來越小。所以在使用超濾方法時要選擇合適的濾膜,也可以選擇切向流過濾得到更理想的效果。

『伍』 蛋白質分離純化的5種方法主要有什麼

蛋白質分離純化復常用方製法有：
1、沉澱，
2、電泳：蛋白質在高於或低於其等電點的溶液中是帶電的，在電場中能向電場的正極或負極移動。根據支撐物不同，有薄膜電泳、凝膠電泳等。
3、透析：利用透析袋把大分子蛋白質與小分子化合物分開的方法。
4、層析：
a.離子交換層析，利用蛋白質的兩性游離性質，在某一特定PH時，各蛋白質的電荷量及性質不同，故可以通過離子交換層析得以分離。如陰離子交換層析，含負電量小的蛋白質首先被洗脫下來。
b.分子篩，又稱凝膠過濾。小分子蛋白質進入孔內，滯留時間長，大分子蛋白質不能時入孔內而徑直流出。
5、超速離心：既可以用來分離純化蛋白質也可以用作測定蛋白質的分子量。不同蛋白質其密度與形態各不相同而分開。

『陸』 蛋白質分離純化常用的方法

1、沉澱
2、電襲泳：蛋白質在高於或低於其等電點的溶液中是帶電的，在電場中能向電場的正極或負極移動。根據支撐物不同，有薄膜電泳、凝膠電泳等。
3、透析：利用透析袋把大分子蛋白質與小分子化合物分開的方法。
4、層析： a.離子交換層析，利用蛋白質的兩性游離性質，在某一特定PH時，各蛋白質的電荷量及性質不同，故可以通過離子交換層析得以分離。如陰離子交換層析，含負電量小的蛋白質首先被洗脫下來。 b.分子篩，又稱凝膠過濾。小分子蛋白質進入孔內，滯留時間長，大分子蛋白質不能同時入孔內而徑直流出。
5、超速離心：既可以用來分離純化蛋白質也可以用作測定蛋白質的分子量。不同蛋白質其密度與形態各不相同而分開。

『柒』 蛋白質的分離和提取個是什麼步驟

一、基本原理
分離純化蛋白質，首先要從原材料中提取目的蛋白，然後通過粗分離的方法除去大量雜質，最後進行精細分離，得到目的蛋白。本實驗以新型基因重組人TNF為例闡明重組蛋白TNF的提取及初步分離。
TNF的提取是將發酵菌體裂解，在一定的條件和溶液中，使被提取的TNF充分釋放出來，經離心收集混合液中提取的TNF成份的過程。含有TNF的提取溶液中，含有大量的雜蛋白，由於蛋白質在水溶液中的溶解度主要取決於蛋白質分子表面的水分子數目，即蛋白質表面親水基團與水分子形成水化膜的程度和帶電荷的情況，當中性鹽如硫酸銨等加入蛋白質溶液時，由於中性鹽對水分子的親和力大於蛋白質，使蛋白質分子周圍的水化膜減弱或消失，蛋白質溶解度降低，同時由於中性鹽的加入，蛋白質溶液的離子強度發生了改變，蛋白質表面電荷被大量中和，更加導致蛋白質溶解度降低，使蛋白質分子之間互相聚集而發生沉澱。不同的蛋白質由於其帶電性，親水性等性質的不同，會在不同濃度的鹽中形成沉澱。依此原理可對混合蛋白質進行粗分離。該實驗中利用硫酸銨鹽析除去大部分雜蛋白從而使TNF得到初步純化。
二、試劑配製
1、STE（25%蔗糖 10mmol/L Tris-HCl pH 8.5 1mmol/L EDTA）。
方法：取蔗糖250g，1mol/LTris.HCl10ml，0.5mol/L EDTA2ml，加水至1000ml115℃，20min高壓滅菌。
2、1mol/L MgCl2。
方法：取MgCl2 203.30g，加水至1000ml。
3、Tris-HCl pH8.5。
方法：取Tris 121.14g，用HCL調pH至8.5，加水至1000ml（12mol/L HCl 約30ml）。
4、0．5mol/L EDTA pH8.5。
方法：取乙二氨四乙酸二鈉186.12g，NaOH20g，加水至1000ml，在121℃下，進行20min高壓滅菌。
三、
操作步驟
1、稱取菌體重量，按5~10ml/g菌體加入STE溶液，攪拌至菌體完全懸浮。
2、按0.5~1mg/g菌體加入用STE溶液新鮮配製的溶菌酶溶液，用玻璃棒用力攪勻後於4℃環境中放置20min。此時菌液呈粘稠狀。
3、按10mg/g菌體加入用STE溶液新鮮配製的脫氧膽酸鈉（DOC）溶液，用力攪勻。
4、加入5~10ml 1mol/L MgCl2溶液，攪勻後加入約40μl Dnase I（25mg/ml）充分攪拌至菌液變稀。
5、15000rpm，4℃離心30min。
6、 取離心上清，精確量取其體積，測定蛋白質濃度，倒入置於冰浴的燒杯中，邊攪拌邊緩慢加入固體硫酸銨使其達到50%飽和度。待固體硫酸銨安全溶解後，靜置於0℃環境中30min。
7、離心，15000rpm，4℃，30min。取離心上清，量其體積，測定蛋白濃度。
8、將離心上清裝入透析袋，4℃攪拌在pH8.5 20mmol/L Tris-HCl ,1mmol/L EDTA溶液中透析。
四、注意事項
1、加入硫酸銨不論是固體硫酸銨，還是加入飽和硫酸銨溶液，加入時應邊加入邊攪拌。
2、加入硫酸銨要慢，因為太快會引起蛋白質發生共沉澱，加入固體硫酸銨時事先要將硫酸銨研磨成粉末，加入飽和硫酸銨溶液時要一滴一滴地加入。
3、攪拌要慢，攪拌劇烈，蛋白質溶液容易起泡沫，由於表面張力效應會引起蛋白質變性。

『捌』 蛋白質分離純化的5種方法主要有什麼

蛋白質分離純化常用方法有：
1、沉澱,
2、電泳：蛋白質在高於或低於其等電點的溶液中是帶電內的,在電場中能向電容場的正極或負極移動.根據支撐物不同,有薄膜電泳、凝膠電泳等.
3、透析：利用透析袋把大分子蛋白質與小分子化合物分開的方法.
4、層析：
a.離子交換層析,利用蛋白質的兩性游離性質,在某一特定PH時,各蛋白質的電荷量及性質不同,故可以通過離子交換層析得以分離.如陰離子交換層析,含負電量小的蛋白質首先被洗脫下來.
b.分子篩,又稱凝膠過濾.小分子蛋白質進入孔內,滯留時間長,大分子蛋白質不能時入孔內而徑直流出.
5、超速離心：既可以用來分離純化蛋白質也可以用作測定蛋白質的分子量.不同蛋白質其密度與形態各不相同而分開.

『玖』 蛋白質分離純化的常用技術

1、沉澱，
2、電泳：蛋白質在高於或低於其等電點的溶液中是帶電的，在版電場中能向電場的正極權或負極移動。根據支撐物不同，有薄膜電泳、凝膠電泳等。
3、透析：利用透析袋把大分子蛋白質與小分子化合物分開的方法。
4、層析：利用蛋白質在固定相與流動相之間不同的分配比例，達到分離目的的技術。
a.離子交換層析，利用蛋白質的兩性游離性質，在某一特定PH時，各蛋白質的電荷量及性質不同，故可以通過離子交換層析得以分離。如陰離子交換層析，含負電量小的蛋白質首先被洗脫下來。
b.分子篩，又稱凝膠過濾。小分子蛋白質進入孔內，滯留時間長，大分子蛋白質不能同時入孔內而徑直流出。
5、超速離心：既可以用來分離純化蛋白質也可以用作測定蛋白質的分子量。不同蛋白質其密度與形態各不相同而分開。

『拾』 蛋白質的分離純化的主要方法有哪些特點

蛋白質的分離純化的主要方法有哪些特點
蛋白質分離純化常用方法有：專
1、沉澱，
2、電泳：蛋白屬質在高於或低於其等電點的溶液中是帶電的，在電場中能向電場的正極或負極移動。根據支撐物不同，有薄膜電泳、凝膠電泳等。
3、透析：利用透析袋把大分子蛋白質與小分子化合物分開的方法。
4、層析：
a.離子交換層析，利用蛋白質的兩性游離性質，在某一特定PH時，各蛋白質的電荷量及性質不同，故可以通過離子交換層析得以分離。如陰離子交換層析，含負電量小的蛋白質首先被洗脫下來。
b.分子篩，又稱凝膠過濾。小分子蛋白質進入孔內，滯留時間長，大分子蛋白質不能時入孔內而徑直流出。
5、超速離心：既可以用來分離純化蛋白質也可以用作測定蛋白質的分子量。不同蛋白質其密度與形態各不相同而分開。