離子交換分離的柱上操作分
1. 離子交換色譜柱分離極弱酸陰離子時 怎麼加快出峰
裝填有固定相用以分離混合組分的柱管。
多為金屬或玻璃製作。有直管形、回盤管形、U形管答等形狀。
色譜柱可分為填充柱和開管柱兩大類。液相色譜通常均採用填充柱。
色譜柱的分離效果取決於所選擇的固定相,以及色譜柱的制備和操作條件。
2. 離子交換柱從實驗室到生產如何放大
首先應該選用高通量抄的介質襲 比如Sepharose Fast Flow 線性流速可達300cm/h
當實驗室探索完成後,應考慮優化洗脫方案,將線性梯度洗脫優化為一步式洗脫,減少分離時間和緩沖液消耗。
為了保持實驗室探索時的峰型和出峰位置,可保持柱床的高度不變,加大柱床的橫截面積,這樣可以增加填料加大吸附量,加快速度,而且洗脫後峰型和出峰位置幾乎保持不變。
放大生產的核心在於保證高流速,高容量,高回收率。需要在實驗室探索階段更多的考慮到這些因素,而非追求其他的結果。
3. 離子交換色譜法的分離原理
離子交換色譜(ion exchange chromatography,IEC)以離子交換樹脂作為固定相,樹脂上具有固回定離子基團及可交換的離答子基團。當流動相帶著組分電離生成的離子通過固定相時,組分離子與樹脂上可交換的離子基團進行可逆變換。根據組分離子對樹脂親合力不同而得到分離。
陽離子交換:
陰離子交換:
式中"--"表示在固定相上,Kxy和Kzm是交換反應的平衡常數,Z+和X-代表被分析的組分離子。M+和Y-表示樹脂上可交換的離子團。
離子交換反應的平衡常數分別為:
陽離子交換:
陰離子交換:
平衡常數K值越大,表示組分的離子與離子交換樹脂的相互作用越強。由於不同的物質在溶劑中離解後,對離子交換中心具有不同的親合力,因此具有不同的平衡常數。親合力大的,在柱中的停留時間長,具有高的保留值。
4. 離子交換柱層析能分離純化蔗糖酶的主要依據是什麼
DEAE-纖維素抄為二乙氨乙基纖維素,是陰離子交換劑。
其原理基於離子交換層析:離子交換層析中,基質是由帶有電荷的樹脂或纖維素組成。
由於蛋白質也有等電點,當蛋白質處於不同的pH條件下,其帶電狀況也不同。陰離子交換基質結合帶有負電荷的蛋白質,所以這類蛋白質被留在柱子上,然後通過提高洗脫液中的鹽濃度等措施,將吸附在柱子上的蛋白質洗脫下來。結合較弱的蛋白質首先被洗脫下來。反之陽離子交換基質結合帶有正電荷的蛋白質,結合的蛋白可以通過逐步增加洗脫液中的鹽濃度或是提高洗脫液的pH值洗脫下來。
5. 酶分離純化離子交換柱預裝柱怎麼使用
如果不限定純化方法,可以考慮親和層析或離子交換,但根據你版問題的意思,是選定權離子交換。
此時就要考慮你蛋白的等電點了,如果等電點在你穩定pH之上,就用陽離子交換柱:
設計陽離子交換層析:將你的樣品置換到你所指的穩定pH的running buffer。同時裝柱,平衡,然後上樣,平衡,洗脫(因為你的pH不穩定,建議鹽洗脫),收峰。得你的蛋白;
如果你的等電點在穩定pH之下,就用陰離子交換柱,其步驟如上,只是改變柱子類型。
6. 用陽離子交換柱子分離蛋白,怎麼調緩沖液ph
不知你將什麼"緩沖液"調節到一定PH濃度?把問題講明了一點…
7. 離子交換色譜柱分離極弱酸陰離子時為什麼要使用鹼性淋洗液
就得知道其原理:
離子色譜是利用相反電荷之間的相互作用來分離的,當檢測物內質帶負電荷時,要選容擇陰離子色譜柱,陰離子色譜柱帶正電荷的配基,進行陰離子-陽離子交換,結合帶負電荷的分子
我們的瑞伊締洗液也是弱鹼性
8. 製作混合床離子交換樹脂柱時在操作上要注意哪些問題
在混床樹脂使用的過程中,陽樹脂會釋放出H+離子,而陰樹脂釋放出OH-離子,這兩種兩種會結合回成答為水,陽樹脂失去一些陽離子之後,會呈負電性,而陰樹脂失去陰離子,呈正電性,這兩種樹脂就會相互吸引,導致兩種樹脂成為團狀物,並且不易分離,而且一些碎樹脂末和懸浮物也會增加樹脂的「抱團」作用,這就是樹脂出現「抱團」的原因,樹脂如果被油脂污染也會造成樹脂的「抱團」現象。
應該如何解決?
1.當混床樹脂出現「抱團」的現象時,就會導致樹脂再生時不能很好的分層,所以一般在樹脂分層時,會加入一定量的電解質,比如鹼等物質,陽樹脂就會與陽離子結合成為中性,而陰樹脂則會與陰離子結合,也呈中性,「抱團」的樹脂也會隨之分離,所以一般混床樹脂在分層時都會使用一定的鹼,能夠有效的改善陰、陽樹脂的分層效果。
2.被油脂污染的樹脂,可以使用非離子型表面活性劑為主的鹼性清洗劑進行處理,對樹脂進行清洗,能夠有效的去除樹脂上的油脂。
詳情點擊:網頁鏈接
9. 利用陽離子交換層析分離下列每一對氨基酸,哪一種氨基酸首先被PH7緩沖液從離子交換柱上洗脫出來。
氨基酸與粒子交復換樹脂的制吸附力大小取決於它們之間的電荷引力和疏水作用。第一組中甘氨酸和亮氨酸均為非極性氨基酸,但是相比之下甘氨酸的極性要更強,也就是疏水性更弱,它會先被洗脫。第二組中,絲氨酸是中性條件下不帶電荷的極性氨基酸,丙氨酸是非極性氨基酸,所以絲氨酸疏水性差,先被洗脫。