離子交換層析裝柱的注意事項

⑴ 柱層析的注意事項有哪些

1 裝柱。 柱子下面的活塞一定不要塗潤滑劑，會被淋洗劑帶到產品中的，可以採用四氟節門的。 干法和濕法裝柱覺得沒什麼區別，只要能把柱子裝實就行。裝完的柱子應該要適度的緊 密（太密了淋洗劑走的太慢），一定要均勻（不然樣品就會從一側斜著下來）。書中寫 的都是不能見到氣泡，我覺得在大多數情況下有些小氣泡沒太大的影響，一加壓氣泡就 全下來了。當然假如你裝的柱子總是有氣泡就說明需要多練習了。但是柱子更忌諱的是 開裂，甭管豎的還是橫的，都會影響分離效果，甚至作廢！ 2 加樣。 用少量的溶劑溶樣品加樣，加完後將下面的活塞打開，待溶劑層下降至石英砂面時，再 加少量的低極性溶劑，然後俅蚩釗緔肆餃危話閌⑸熬突臼前咨牧恕? 加入淋洗劑，一開始不要加壓，等溶樣品的溶劑和樣品層有一段距離（2～4cm就夠了） ，再加壓，這樣避免了溶劑（如二氯甲烷等）夾帶樣品快速下行。 3 淋洗劑的選擇。 感覺上要使所需點在rf0.2～0.3左右的比較好。不要認為在板上爬高了分的比較開，過 柱子就用那種極性，假如rf在0.6，即使相差0.2也不輕易在柱子上分開，因為柱子是一 個多次爬板的狀態，可以通過公式的比較：0.6/0.8一次的分離度，肯定不如（0.2/0.3 ）的三次方或四次方大。 4 樣品的收集。 用硅膠作固定相過柱子的原理是一個吸附與解吸的平衡。所以假如樣品與硅膠的吸附比 較強的話，就不輕易流出。這樣就會發生，後面的點先出，而前面的點後出。這時可以 採用氧化鋁作固定相。 另外，收集的試管大小要以樣品量而定，非凡是小量樣品，假如用大試管，可能一根就 收到了三個樣品，wuwu。假如都用小試管那工作量又太大。 5 最後的處理。 柱分後的產品，由於使用了大量的溶劑，其中的雜質也會累積到產品中，所以假如想送 分析，最好用少量的溶劑洗滌一下，因為大部分的雜質是溶在溶劑里的，一洗基本就沒 了，必要時進行重結晶。 另外，再過柱的時候，有時會出現氣泡，一是 和使用的溶劑有關，假如是易揮發的溶劑，如乙醚、二氯甲烷等，在 室溫稍高的情況下，很輕易出現這種現象，因此，在室溫高的時候， 可以選擇沸點較高，揮發相對小的溶劑。還有，使用混合溶劑時，使用 的兩種溶劑的沸點應該相差不大，如：乙酸乙酯和石油醚(60~90),而 乙醚卻要選擇30－60的石油醚。二是：不論是用帶砂板的還是塞棉花的， 在裝柱之前，都要將空氣用加壓的方法將空氣排干，這樣就可避免柱中有 空氣！過柱子需要耐心，不要著急。

⑵ 離子交換層析的具體操作

對於離子交換纖維素要用流水洗去少量碎的不易沉澱的顆粒，以保證有較好的均勻度，對於已溶脹好的產品則不必經這一步驟。溶脹的交換劑使用前要用稀酸或稀鹼處理，使之成為帶H+或OH-的交換劑型。陰離子交換劑常用「鹼-酸-鹼」處理，使最終轉為-OH-型或鹽型交換劑；對於陽離子交換劑則用「酸-鹼-酸」處理，使最終轉為-H-型交換劑。
洗滌好的纖維素使用前必須平衡至所需的pH和離子強度。已平衡的交換劑在裝柱前還要減壓除氣泡。為了避免顆粒大小不等的交換劑在自然沉降時分層，要適當加壓裝柱，同時使柱床壓緊，減少死體積，有利於解析度的提高。
柱子裝好後再用起始緩沖液淋洗，直至達到充分平衡方可使用。 加樣：
層析所用的樣品應與起始緩沖液有相同的pH和離子強度，所選定的pH值應落在交換劑與被結合物有相反電荷的范圍，同時要注意離子強度應低，可用透析、凝膠過濾或稀釋法達此目的。樣品中的不溶物應在透析後或凝膠過濾前，以離心法除去。為了達到滿意的分離效果，上樣量要適當，不要超過柱的負荷能力。柱的負荷能力可用交換容量來推算，通常上樣量為交換劑交換總量的1%-5%。 已結合樣品的離子交換前，可通過改變溶液的pH或改變離子強度的方法將結合物洗脫，也可同時改變pH與離子強度。為了使復雜的組份分離完全，往往需要逐步改變pH或離子強度，其中最簡單的方法是階段洗脫法，即分次將不同pH與離子強度的溶液加入，使不同成分逐步洗脫。由於這種洗脫pH與離子強度的變化大，使許多洗脫體積相近的成分同時洗脫，純度較差，不適宜精細的分離。最好的洗脫方法是連續梯度洗脫，洗脫裝置見圖16-6.兩個容器放於同一水平上，第一個容器盛有一定pH的緩沖液，第二個容器含有高鹽濃度或不同pH的緩沖液，兩容器連通，第一個容器與柱相連，當溶液由第一容器流入柱時，第二容器中的溶液就會自動來補充，經攪拌與第一容器的溶液相混合，這樣流入柱中的緩沖液的洗脫能力即成梯度變化。第一容器中任何時間的濃度都可用下式進行計算：
C=C2-(C2-C1)(1-V)A2/A1
式中A1、A2分別代表兩容器的截面積：C1、C2分別表示容器中溶液的濃度；V為流出體積對總體積之比。當A1=A2時為線性梯度，當A1>A2時為凹形梯度，A1>A2時為凸形梯度。
洗脫時應滿足以下要求：
①洗脫液體積應足夠大，一般要幾十倍於床體積，從而使分離的各峰不至於太擁擠。
②梯度的上限要足夠高，使緊密吸附的物質能被洗脫下來。
③梯度不要上升太快，要恰好使移動的區帶在快到柱末端時達到解吸狀態。目的物的過早解吸，會引起區帶擴散；而目的物的過晚解吸會使峰形過寬。
洗脫餾份的分析按一定體積（5-10ml/管）收集的洗脫液可逐管進行測定，得到層析圖譜。依實驗目的的不同，可採用適宜的檢測方法（生物活性測定、免疫學測定等）確定圖譜中目的物的位置，並回收目的物。
離子交換劑的再生與保存離子交換劑可在柱上再生。如離子交換纖維素可用2mol/：NaCl淋洗柱，若有強吸附物則可用0.1mol/LNaOH洗柱；若有脂溶性物質則可用非離子型去污劑洗柱後再生，也可用乙醇洗滌，其順序為：0.5mol/LNaOH-水-乙醇-水-20%NaOH-水。保存離子交換劑時要加防腐劑。對陰離子交換劑宜用0.002%氯已定（洗必泰），陽離子交換劑可用乙基硫柳汞（0.005%）。有些產品建議用0.02%疊氮鈉。

⑶ 離子交換和凝膠層析濕法裝柱時，如出現氣泡、結節、表面凹凸不平，該如何處理

把填料倒出來 重新裝柱

⑷ 柱層析的注意事項有哪些為什麼

我個人感覺主要是裝柱的問題比較大。要均勻，不能有氣泡啊斷層什麼內的出現，否則容就得重裝。在操作過程中要盡量的輕，灌柱是要慢，要不就特容易出問題。
你用的填充物是什麼啊？我也在做這個實驗呢，有機會可以好好交流一下。我現在做的是葡聚糖凝膠的。

⑸ 離子交換層析技術的要點

In protein isolation and purification, ion exchange chromatography is a key technique compared with other techniques.

⑹ 離子交換樹脂裝柱子的詳細流程，謝謝。

離子交換樹脂的裝填.
1、離子交換器的清理與檢查
2、離子交換樹脂的裝填：先加入1m左右的水層以免樹脂直接沖擊交換器底部裝置和墊層。

⑺ 離子交換和凝膠層析裝柱時，出現氣泡，結節怎麼處理

吸附分離效果不好，考慮濕法裝柱

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⑻ 離子交換和凝膠層析裝柱時,出現氣泡,結節怎麼處理

可以用適量的有來機溶劑潤洗一下層自析柱，柱子體積較小的話就用玻璃棒攪勻排除一下氣泡。

不管是干柱和濕柱，都要加層析液，不能要求一開始就沒有氣泡的。要用洗脫劑不停的洗脫，就是用配置好的試劑一邊一邊對柱子進行洗脫，這樣不但可以消除氣泡，還可以使硅膠充分沉降，讓層析效果更好。等柱子沒有氣泡後在上樣用洗脫液進行層析。

若柱中留有氣泡或各部分松緊不勻（更不能有斷層）時，會影響滲透速度和顯色的均勻。去除就是用玻璃棒攪拌，趕走氣泡。

(8)離子交換層析裝柱的注意事項擴展閱讀：

水溶液中的一些陽離子進入反離子層，而原來在反離子層中的陽離子進入水溶液，這種發生在反離子層與正常濃度處水溶液之間的同性離子交換被稱為離子交換作用。

離子交換主要發生在擴散層與正常水溶液之間，由於黏土顆粒表面通常帶的是負電荷，故離子交換以陽離子交換為主，故又稱為陽離子交換。離子交換嚴格服從當量定律，即進入反離子層的陽離子與被置換出反離子層的陽離子的當量相等。

⑼ 柱層析實驗注意事項

我個人感覺主要是裝柱的問題比較大。要均勻，不能有氣泡啊斷層什麼的出現，否則回就得重裝。在操作過程中要答盡量的輕，灌柱是要慢，要不就特容易出問題。
你用的填充物是什麼啊？我也在做這個實驗呢，有機會可以好好交流一下。我現在做的是葡聚糖凝膠的。