離子交換血紅蛋白

A. 血紅蛋白能夠與二氧化碳結合嗎

血紅蛋白的氨基可以與CO2 結合
NbNH2 + CO2 == NbNHCOOH == NbNHCOO- + H+
結合能力與血紅蛋白是否被氧合有關版，組織中易結合，肺泡中易解離權
這種運輸方式只佔CO2 量的 7%

其他大部分結合成碳酸氫鹽。細節是 CO2 進入紅細胞，在碳坩酶作用下結合成碳酸氫鹽，再與細胞外氯離子交換進入血漿，而不是直接再血漿中反應

B. 糖化血紅蛋白的檢測方法

1、陽離子交換色譜法
原理：糖化導致血紅蛋白分子表面陽離子丟失。在弱的陽離子交換劑中，例如Biorex70，伴有增加的離子濃度和（或）pH下降，糖化血紅蛋白在非糖化血紅蛋白前先洗脫。這現象產生了糖化血紅蛋白最初的術語「快速血紅蛋白」。陽離子交換色譜法可用於小型、微型或大型柱層析方法或部分或全自動的PHLC/FPLC方法。因為，其他翻譯後修飾血紅蛋白，例如醛亞胺型、甲醯化、乙醯化、乙醛加合物、降解物、老化人工物品和異常血紅蛋白電荷交換也不同於正常的HbA0，所以已經列出了許多陽離子交換層析法的干擾因素。使用常規HPLC的方法。分離糖化血紅蛋白亞組分是能達到滿足需求的臨床精密度。然而，已知HbA1c的峰不是均一的而是包含一重要的非糖化血紅蛋白部分。少數糖化血紅蛋白也整合到HbA0主峰中。通過使用特殊的柱原料（poly-CATA）和30～40 min分離時間可以改善分離效果。這些方法可以作為參考步驟但不適合常規使用。所有的陽離子交換色譜法對pH和溫度的變化敏感，因此要控制pH和溫度。
說明：根據紅細胞代謝動力學推測初始HbA1c值大約每日破壞1/120（≈0.83%）。因為糖化在合適的治療下甚至健康人也產生，故這個理論值在體外不能達到。控制不理想的糖尿病患者通過加強治療而達到血糖量正常，可以發現HbA1c值最大下降率以大約每10 d下降正常血糖的1%（絕對的）。由於測定糖化血紅蛋白方法的精確性，兩次測定值HbA1c的差異大約1%就可認為具有臨床相關性。因為這些原因，在HbA1c兩次測定間至少有2周的時間，推薦4～6周的間隔。
因為升高的糖化血紅蛋白值是長期高糖血症的糖尿病患者相當可靠的指示劑，因而是可能診斷糖尿病的。在未治療的個體，正常的糖化血紅蛋白值臨床上可以排除明顯的糖尿病。但由於它不能檢測糖耐量受損，所以作為診斷和（或）篩選目的唯一的參數，使用糖化血紅蛋白是存在問題的。
2、電泳法
原理：相比於非糖化血紅蛋白，因糖化而變化的總電荷和糖化血紅蛋白的等電點變化是瓊脂糖凝膠或者pH梯度5.0～6.5的凝膠等電聚焦電泳分離的基礎。瓊脂糖凝膠電泳的血紅蛋白亞組分解析度很小，而等電聚焦可以更好地使亞組分分離。可能由於試驗的自動化程度不足，重要性已經下降。
3、親和層析法
原理：硼酸結合順式-羥基。商品化的m-氨基苯硼酸瓊脂糖共價結合的親和柱已可用於微柱分析檢測。將血樣本中的血紅蛋白加到層析柱後，所有的糖化血紅蛋白（HbA1和旁鏈糖化的血紅蛋白；總糖化血紅蛋白）與硼酸結合而非糖化血紅蛋白通過層析柱可被測量。在加入高濃度也包含順式-羥基的多羥基復合物，例如山梨醇後，糖化血紅蛋白與硼酸的結合被替換而從柱子上洗脫下來。親和層析法對經翻譯以後修飾的血紅蛋白和病理血紅蛋白的影響相對不敏感。利用親和層析法，僅能測定總糖化血紅蛋白。廣泛使用的親和層析方法，允許用經驗演算法從總糖化血紅蛋白值計算出「標準的HbA1c」。
4、免疫分析法
在纈氨酸β-N-末端糖化的血紅蛋白提供了一個容易被抗體識別的抗原表位。可以用單克隆抗體或多克隆抗體進行放射免疫分析和免疫酶學分析測定，抗體特異識別β鏈N-末端糖化的血紅蛋白最後4～8個氨基酸組成的抗原表位。異常的血紅蛋白或翻譯後經修飾的血紅蛋白無干擾。
目前的免疫化學試驗不僅檢測HbA1c，通常也同時檢測HbA2c，因為血紅蛋白A2糖化δ鏈的表位是相同的。抗體直接抗β-鏈的最後四個氨基酸的糖化表位的免疫化學試驗也可用進行檢測，例如HbS1c。在大多數情況下HbA2c意義不大，雖然鐮刀細胞病時可以准確地測定纈氨酸β-N-氨基末端糖化程度，但它仍不能100%代表HbA1c。
5、離子層析法
離子層析法精密度高、重復性好且操作簡單, 被臨床廣泛採用。檢測原理由於血紅蛋白β-鏈N 末端纈氨酸糖化後所帶電荷不同, 在偏酸溶液中總糖化血紅蛋白( GH b) 及H bA 均具有陽離子的特性, 因此經過陽離子交換層析柱時可被偏酸的緩沖液平衡過的樹脂來吸附, 但二者吸附率不同, GH b正電荷較少吸附率較低, H bA 正電荷較多吸附率較高。用不同pH 的磷酸鹽緩沖液可以分次洗脫出GH b 和H bA, 用KCN 可將H b轉化為高鐵氰化血紅蛋白, 用分光光度計測定。或者得到相應的H b層析譜, 其橫坐標是時間, 縱坐標是百分比。HbA1c值以百分率來表示。現在大部分都用全自動測定儀測定。
6、等電點聚集法
是測定GH b的新技術, 它是在聚丙烯酞凝膠中加人載體兩性介質的薄板上形成一個由陽極到陰極逐漸增加的pH 梯度, 溶血液中各個組份將移動到各自的等電點的pH 位置上, 這樣就得到比一般電泳法更好的分劃效果和比較集中的色帶, 通過解析度高的微量光密度儀掃描, 可以准確地測定出各自組份的含量。由於它能夠分辨出一級結構不同的HbA、HbAc、HbF、HbS 及HbC等, 可完全避開各種物質的干擾。
7、化學發光法
採用離子捕捉免疫分析法, 應用抗原抗體反應原理, 聯以熒游標記物, 通過連接帶負電的多陰離子復合物, 吸附到帶正電的纖維表面, 經過一系列徹底清洗等步驟後, 測定熒光強度變化率, 計算濃度。採用專用試劑包和免疫發光分析儀,其檢測系統易於規范和重復, 可減少操作技術誤差, 檢測的靈敏度和特異性高, 批內、批間變異系數小, 回收率高, 准確度高, 交叉污染率小, 影響因素少。
8、酶法
原理為用特殊蛋白酶分解Hb, 3~ 5 min內果糖基氨基酸從H b分離, 果糖基氨基酸氧化酶( FAOD )從果糖基氨基酸產生H2O2, H2O2經POD與DA- 64反應, 選擇751 nm 測吸光度改變求得GHb濃度。

C. 糖化血紅蛋白儀器，哪個品牌的好用些，操作簡單，耗材低，價位適中，知道的給介紹一下，謝謝

奧迪康糖化血蛋白分析儀，操作簡單，價格適中。具體可電話聯系0511-88880053

AC6600詳細參數

●准確的方法學原理

採用經典准確的方法學原理--離子交換液相層析法，HbA1C分析的金標准，現有測試方法中唯一真正直接分離出HbA1C並通過在線連續測出逐點吸光度，通過積分得出准確面積百分比的分析方法。

●精準分離的4梯度洗脫法

獨創的HbA1C四梯度洗脫法，不採用常規的高低濃度混和產生梯度的洗脫方法，而是針對HbA1C採用四種對應濃度試劑梯度洗脫，精準分離糖化血紅蛋白。

●高分離度液相層析柱

高分離度液相層析柱，體積為Φ 9mm x 45mm重達2.5克進口樹脂，是普通微型層析柱的15-20倍，高達300個測試的高柱效確保測試結果准確。

●高靈敏度415nmLED一體化光度計

高靈敏度415nm LED一體化光度計，波長准確，光源穩定，全鋁合金結構，抗干擾能力強，多鏡片聚焦，微量比色池，靈敏度高，精確記錄分析曲線。

●配套原廠校準品

採用國際規范的量值溯源方法，採用權威的標准質控物質進行數值傳遞，每套試劑均配2組校準品，可適時校準確保測試結果准確可靠，徹底避免僅靠因數校準帶來的儀器個體誤差。

●精密的層析柱恆溫裝置

精準的層析柱及試劑恆溫控制裝置，確保層析柱及試劑不受環境溫度變化的影響，有效保證測試結果的重復性、准確性。

●實時層析圖譜，智能化過程監測

先進的嵌入式微處理系統+智能化控制軟體，可以實時顯示測試曲線，測試過程真實再現，可對測試結果、吸
光度、信號電位、峰值時間和試劑消耗進行監測報警，操作得心應手。
●全自動25位進樣盤，批量急診自由選擇

全自動25位盤式進樣，無需復雜的條架式進樣裝置，無需復雜的機內溶血裝置，批量自動檢測，急診隨時插入。

●全開放結構，合理的流路，低故障，易維護

全開放式結構，全電磁閥流路，無需復雜的樣品機械六通旋轉分配控制閥，可靠耐用方便維護。

●5μl全血，三步測試，實驗室及臨床門診均可使用

5μl 全血，前處理極其簡單，只需取血加入溶血劑三步簡單操作即可上機測試，靜脈全血和手指末梢血均可使用,可適用實驗室批量測試，亦可適應臨床門診即時提供檢測結果。

●採用氣體溶解及氣泡排除技術. 全面消除誤差

採用獨創的試劑溶解性氣體消除裝置和比色池氣泡自動檢測排除技術，無需復雜的脫氣裝置，將氣泡對檢測結果的影響全面消除。

●糖化濃度、面積百分比、平均血糖同時報告

測試報告同時輸出IFCC濃度值、NGSP面積百分比、ADAG平均血糖，滿足全球標准化要求，內存1 000個含測試曲線報告，配有RS232通迅介面，可與HIS/LIS系統連接。

D. 血紅蛋白凝膠過濾層析所需儀器、用具、物品和實驗的具體方案

一、實驗目的

1.了解凝膠柱層析的原理及應用；

2.掌握凝膠柱層析的基本操作技術，為進一步掌握離子交換柱層析、親和層析及吸附層析等其它分離方法打下良好的基礎。

二、實驗原理

凝膠層析：原理與應用

凝膠層析又稱凝凝膠過濾，是一種按分子量大小分離物質的層析方法。該方法是把樣品加到充滿著凝膠顆粒的層析柱中，然後用緩沖液洗脫。大分子無法進入凝膠顆粒中的靜止相中，只能存在於凝膠顆粒之間的流動相中，因而以較快的速度首先流出層析柱，而小分子則能自由出入凝膠顆粒中，並很快在流動相和靜止相之間形成動態平衡，因此就要花費較長的時間流經柱床，從而使不同大小的分子得以分離。

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凝膠過濾柱層析所用的基質是具有立體網狀結構、篩孔直徑一致，且呈珠狀顆粒的物質。這種物質可以完全或部分排阻某些大分子化合物於篩孔之外，而對某些小分子化合物則不能排阻，但可讓其在篩孔中自由擴散、滲透。任何一種被分離的化合物被凝膠篩孔排阻的程度可用分配系數Kav（被分離化合物在內水和外水體積中的比例關系）表示。Kav值的大小與凝膠床的總體積（Vt）、外水體積（Vo）及分離物本身的洗脫體積（Ve）有關，即：

Kav= (Ve-Vo)/(Vt-Vo)

在限定的層析條件下，Vt和Vo都是恆定值，而Ve值卻是隨著分離物分子量的變化而變化的。分離物分子量大，Kav值小；反之，則Kav值增大。因此，在同一凝膠柱上分離分子量不同的物質時，由於流動相的作用，這些分離物質將發生排阻和擴散效應。若緩沖液連續地傾入柱中，柱中物質的排阻和擴散效應也將連續地發生，其最終結果是分子量大的物質先從柱中流出，分子量小的物質則後從柱中流出。流出物用部分收集器分管等量或等時地收集起來，檢測後分段合並相同組分的各管流出物，即等於把分子量不同的物質相互分離開了。其分離效果受操作條件（如基質的顆粒大小、均勻度、篩孔直徑和床體積的大小、洗脫液的流速以及樣品的種類等）的影響，而最直接的影響是Kav值的差異性，Kav值差異性大，分離效果好；Kav值差異性小，則分離效果很差，或根本不能分開。

分配系數Kav既是判斷分離效果的一個參數，又是測定蛋白質分子量的一個依據。從公式Kav= (Ve-Vo)/(Vt-Vo)可知，只要測出床體積Vt 和外水體積Vo 以及洗脫體積Ve，即可計算出Kav值。而凝膠床總體積Vt可用測量法得到：

由凝膠床的組成可知，床體積Vt等於外水體積Vo、內水體積Vi與凝膠顆粒實際佔有體積Vg之和。即

Vt = Vo+Vi+Vg = Vo+Vi

而Vo和Vi可通過實驗測得：當把分子量不同的混合溶液鋪在凝膠床上時，其在內水體積和外水體積中的分布是不一樣的。溶液中的分子大於凝膠孔徑上限者不能進入凝膠網孔內，而被排阻在外水體積的溶液中。凝膠床的洗脫體積Ve剛好等於外水體積。即Ve=Vo (Kav=0)。然而，溶液中的分子小於凝膠孔徑下限者能自由進入凝膠網孔內，凝膠床的洗脫體積Ve應等於凝膠床總體積，即Ve= Vt= Vo+Vi (Kav=1)。而溶液中的分子大小介於凝膠孔徑上限和下限之間者，則能進入部分凝膠網孔中，故其洗脫體積Ve是在Vo和Vt之間（Kav在0－1之間）。

以床體積Vt（等於pr2h）和測得值Vo來計算分配系數的值為Kav，若以床體積Vt（等於Vo+Vi）和測得值Vo來計算分配系數的值為Kd。在同一層析條件下，對同一物質計算出來的Kav和Kd值盡管有一定的差異性，但都是有效的。只因Kav計算方便，所以目前多使用Kav。分離物在凝膠過濾層析時的行為，除用Kav和Kd表示外，還可用Ve/Vo或Vo/Ve（R值）表示。

反應原理

凝膠過濾不僅常用做物質的分離，還可以根據需要用某種試劑非常方便地處理某種物質，當該物質流經試劑區時，因為可連續接觸新鮮試劑，因而可以充分發生反應，最後經過洗脫，再與過量的試劑分開。本實驗就是通過凝膠過濾，用還原劑FeSO4處理血紅蛋白。即首先在層析柱中加入含有還原劑的溶液，使形成一個還原區帶，當血紅蛋白樣品（血紅蛋白與鐵氰化鉀的混合液）流經還原區帶時，褐色的高鐵血紅蛋白立即生成紫色的還原型血紅蛋白，隨著還原型血紅蛋白繼續下移，與緩沖液中的氧分子結合又形成了鮮紅的血紅蛋白。鐵氰化鉀則因分子量小，在層析柱中呈現其本來的黃色帶而遠遠地落在血紅蛋白的後邊。本實驗操作簡便，直觀性強，趣味性濃，通過肉眼觀察即可檢驗分離效果。

三、實驗材料

1.器材：層析柱，?10×200

2.試劑：

(1) 20mM磷酸二氫鈉

(2) 20mM磷酸氫二鈉

(3) 40mM FeSO4(用時現配)

(4) 0.2M Na2HPO4，80mM Na2H2EDTA

(5) 抗凝血（哺乳動物血樣，以1：X的比例加入%檸檬酸鈉，置於4℃冰箱中保存。貯存期以不超過3個月為宜）

(6) Sephadex G-25

(7) 固體鐵氰化鉀

四、儀器設備

鐵架台、恆流泵

五、實驗步驟

1．凝膠的處理 取3克葡聚糖凝膠（Sephadex-25）乾粉，浸泡於蒸餾水中充分溶脹（室溫，6小時），然後傾斜法除去表面懸浮的小顆粒，最後加入等體積pH7磷酸緩沖液繼續浸泡（磷酸緩沖液用試劑1、2以39:51的比例混合，並用pH計校對）。

2．裝柱 將層析柱下端的止水螺絲旋緊，向柱中加入約5-7cm高的緩沖液，把溶脹好的糊狀凝膠邊攪拌邊到入柱中，同時開啟止水螺絲，控制一定的流速，使柱中的凝膠一直處在溶液中。最好一次連續裝完，若分次裝入，需用玻璃棒輕輕攪動柱床上層凝膠，以免出現界面。裝柱長度至少8cm。最後放入略小於層析柱內徑的濾紙片，以防將來加樣時凝膠被沖起。

3．平衡 用磷酸緩沖液洗脫，平衡20分鍾。注意液面不要低於凝膠表面，否則可能有氣泡混入，影響液體在柱內的流動與最終生物大分子物質的分離效果。

4．血紅蛋白樣品的制備 取1ml抗凝血於燒杯中，加入10ml pH7 20mM磷酸緩沖液，再加入固體鐵氰化鉀，使濃度達到5mg/ml。

5．層析柱還原層的形成 取1ml 40mMFeSO4於小燒杯中，加入1ml 0.2M Na2HPO4,80mM Na2H2EDTA混合液攪拌均勻。待層析柱上緩沖液幾乎全部進入凝膠時，速取該混合液0.4ml加入層析柱中，待混合液完全進入柱床後加入0.7ml緩沖液。（注意還原劑的混合液要新鮮配製，盡可能縮短在空氣中暴露的時間）。

6．上樣 將柱中多餘的液體從底部流出後關閉止水螺絲,取前面制備好的血紅蛋白樣品0.5ml，將樣品溶液小心加到凝膠柱上，打開止水螺絲，使樣品溶液流入柱內。

7．洗脫 用緩沖液進行洗脫，控制緩沖液在約每5秒一滴的流速，觀察並記錄實驗現象。

8．清洗 待所有色帶流出層析柱後，加快流速，繼續清洗層析柱5min

E. 糖化血紅蛋白測定儀 那個牌子比較好，價格比較實惠（攜帶型的 巡診用）

糖化血紅蛋白檢測方法很多，常用的有微柱法離子交換層析、親和層析、高壓液相、內免疫凝集、離子捕獲法、容電泳法等。
主要生產廠家包括美國Bio-Rad、Primus、日本TOSOH、英國DREWSCIENTIFIC、德國SIEMENS公司，挪威小旋風Nycocard Reader II等等
市場主流:高端HPLC方法學是日本TOSOH的G7,美國伯樂的DS5,價格在20萬上下，
中檔為西門子拜耳的DCA Vantage,價格約在10萬以下，低端和普及型的是挪威小旋風糖化，價格更低。

F. 為什麼血紅蛋白常用凝膠過濾層析分離純化,而一些免疫細胞的蛋白質常用離子交

怎麼血紅蛋白吃你白茶用凝膠過著分析之後還要免疫力細胞蛋白質常用離職呢免疫力低

G. 糖化血紅蛋白正常值是多少沒有糖尿病史檢查血紅蛋白6.2正常嗎

血糖達標的三個標準是空腹血糖、餐後2小時血糖及糖化血紅蛋白 均達標。很多糖尿病患者只重視空腹和餐後2小時血糖，而忽視了糖化血紅蛋白的檢測。事實上，如果僅空腹和餐後血糖達標，而沒有控制好糖化血紅蛋白，就證明血糖控制仍未達標。 臨床研究一般以糖化血紅蛋白正常值:6.1-7.9為標准，也就是說凡檢查的人正常值只要維持在這樣的范圍之內，就可以定論其正常值標准了。 糖化血紅蛋白是紅細胞內的血紅蛋白與葡萄糖結合的產物，能反映采血前三個月的年個斤微億 血糖水平，是目前反映血糖控制好壞最有效、最可靠的指標。糖尿病患者應將糖化血紅蛋白≤7.0%作為治療達標的標准之一，老年人可略放寬標准(7.0%-7.5%)，中青年人應將糖化血紅蛋白控制在≤6.5%或更低。糖化血紅蛋白每下降1%，糖尿病相關並發症可減少20%。 只有空腹血糖控制在3.9--6.1毫摩爾/升之間，餐後2小時血糖控制在7.0毫摩爾/升之間，糖化血紅蛋白控制在6.5%以下，才能達到理想的控制目標，即不僅要控制基礎狀態下的空腹高血糖，還要控制負荷狀態的餐後高血糖，這兩個血糖都控制好了，糖化血紅蛋白才能降到理想水平，進而延緩和防止多種並發症的發生。 糖化血紅蛋白檢測方法很多，常用的有微柱法離子交換層析、親和層析、高壓液相、免疫凝集、離子捕獲法、電泳法等。主要生產廠家包括美國Bio-Rad的SD10、Primus、日本TOSOH的G7、英國DREWSCIENTIFIC、德國SIEMENS公司的DCA Vantage，挪威小旋風糖化Nycocard Reader II等等。 准確率最好的是高壓液相法(HPLC),最適於普及的是挪威小旋風糖化Nycocard Reader II。 糖化血紅蛋白的正常值: 糖化血紅蛋白正常范圍及評價標准 糖化血紅蛋白正常范圍:4.06.0% 糖化血紅蛋白的正常值對照表: 糖化血紅蛋白描述4%--6%正常值＜6.0%控制偏低，患者容易出現低血糖6%--7%控制理想(正常值)7%--8%可以接受8%--9%控制不好＞9%控制很差，慢性並發症發生發展的危險因素