EDI分子篩色譜排阻極限
1. 凝膠色譜法是分離蛋白質的一種常用方法。但並非所有蛋白質都可用此方法進行分離.能分離的蛋白質分子間必須
首先:蛋來白質本身是大源分子物質,但是不同的蛋白質分子量又不同,差異還是比較大的。
其次:凝膠顆粒內部的孔道並是都一樣大,路徑並不都相同。
所以如果分子量較大的分子,其分子量都超過凝膠顆粒內部的孔徑,那麼它們都只能從外面過,路徑差不多,分不開;而分子量較小的蛋白質則可進入不同大小的孔道,通過不同路徑將其分開;其他比蛋白質小的分子,由於都能進入凝膠的全部空隙,也不會有好地分離效果。
所以答案為C是說的過去的。
2. 分子篩色譜的原理是什麼
分子篩色譜,是20世紀60年代發展起來的一種快速簡便的生物化學分離分析方法。基本原理是指混合擠質的分子按其分子量的大小不同,分別先後流出色譜柱而被分離。
特性
色譜分離巾的固定相(凝膠)是一種不帶電荷的、具有二維空阿、多孔網狀結構的物質,凝膠的每個顆粒的細微結構就如一個篩子,小的分子可以進人凝膠網孔,而大的分子則排阻於凝膠顆粒之外囚而具分子篩的性質,因整個色譜過程一般不變換洗脫液,好像過濾一樣,故也稱凝膠過濾色譜,又因使用的固定相為凝膠,故義稱為凝膠色譜
分子篩色譜 molecular sieve chromatography 是20世紀60年代發展起來的一種快速簡便的生物化學分離分析方法.基本原理是指混合溶質的分子按其分子量的大小不同,分別先後流出色譜柱而被分離.色譜分離中的固定相(凝膠)...
1932年,McBain提出了「分子篩」的概念.分子篩是指具有均勻的微孔,其孔徑與一般分子大小相當的一類物質.分子篩的應用非常廣泛,可以作高效干海燥劑、選擇恆性吸附業劑、催化劑、離子工交換劑等,但有用化學原限廣泛料公合成分子篩司使成本很用高.常用分子篩為結晶態的硅酸鹽或硅鋁酸鹽,是由硅氧四面體或鋁氧四面體通過氧橋鍵相連而形成分子尺寸大小(通常為0.2 nm)的孔道和空腔體系,因吸附分子大小和形狀不同而具有篩分大小不同的流體分子的能力.
原理 吸附功能:分子篩對物質的吸附來源於物理吸附(范德華力),其晶體孔穴內部有很強的極性和庫侖場,對極性分子(如水)和不飽和分子表現出強烈的吸附能力.
篩分功能:分子篩的孔徑分布非常均一,只有分子直徑小於孔穴直徑的物質才可能進入分子篩的晶穴內部.
通過吸附的優先順序和尺寸大小來區分不同物質的分子,所以被形象的稱為「分子篩」.
3. 四大色譜原理是什麼
色譜法分類
按兩相的物理狀態可分為:氣相色譜法(GC)和液相色譜法(LC)。氣相色譜法適用於分離揮發性化合物。GC根據固定相不同又可分為氣固色譜法(GSC)和氣液色譜法(GLC),其中以GLC應用最廣。液相色譜法適用於分離低揮發性或非揮發性、熱穩定性差的物質。LC同樣可分為液固色譜法(LSC)和液液色譜法(LLC)。此外還有超臨界流體色譜法(SFC),它以超臨界流體(界於氣體和液體之間的一種物相)為流動相(常用CO2),因其擴散系數大,能很快達到平衡,故分析時間短,特別適用於手性化合物的拆分。
按原理分為吸附色譜法(AC)、分配色譜法(DC)、離子交換色譜法(IEC)、排阻色譜法(EC,又稱分子篩、凝膠過濾(GFC)、凝膠滲透色譜法(GPC)和親和色譜法,此外還有電泳。按操作形式可分為紙色譜法(PC)、薄層色譜法(TLC)、柱色譜法。四、色譜分離原理
高效液相色譜法按分離機制的不同分為液固吸附色譜法、液液分配色譜法(正相與反相)、離子交換色譜法、離子對色譜法及分子排阻色譜法。
1.液固色譜法
使用固體吸附劑,被分離組分在色譜柱上分離原理是根據固定相對組分吸附力大小不同而分離。分離過程是一個吸附-解吸附的平衡過程。常用的吸附劑為硅膠或氧化鋁,粒度5~10μm。適用於分離分子量200~1000的組分,大多數用於非離子型化合物,離子型化合物易產生拖尾。常用於分離同分異構體。
2.液液色譜法
使用將特定的液態物質塗於擔體表面,或化學鍵合於擔體表面而形成的固定相,分離原理是根據被分離的組分在流動相和固定相中溶解度不同而分離。分離過程是一個分配平衡過程。
塗布式固定相應具有良好的惰性;流動相必須預先用固定相飽和,以減少固定相從擔體表面流失;溫度的變化和不同批號流動相的區別常引起柱子的變化;另外在流動相中存在的固定相也使樣品的分離和收集復雜化。由於塗布式固定相很難避免固定液流失,現在已很少採用。現在多採用的是化學鍵合固定相,如C18、C8、氨基柱、氰基柱和苯基柱。
液液色譜法按固定相和流動相的極性不同可分為正相色譜法(NPC)和反相色譜法(RPC)。
正相色譜法
採用極性固定相(如聚乙二醇、氨基與腈基鍵合相);流動相為相對非極性的疏水性溶劑(烷烴類如正已烷、環已烷),常加入乙醇、異丙醇、四氫呋喃、三氯甲烷等以調節組分的保留時間。常用於分離中等極性和極性較強的化合物(如酚類、胺類、羰基類及氨基酸類等)。
反相色譜法
一般用非極性固定相(如C18、C8);流動相為水或緩沖液,常加入甲醇、乙腈、異丙醇、丙酮、四氫呋喃等與水互溶的有機溶劑以調節保留時間。適用於分離非極性和極性較弱的化合物。RPC在現代液相色譜中應用最為廣泛,據統計,它占整個HPLC應用的80%左右。
隨著柱填料的快速發展,反相色譜法的應用范圍逐漸擴大,現已應用於某些無機樣品或易解離樣品的分析。為控制樣品在分析過程的解離,常用緩沖液控制流動相的pH值。但需要注意的是,C18和C8使用的pH值通常為2.5~7.5(2~8),太高的pH值會使硅膠溶解,太低的pH值會使鍵合的烷基脫落。有報告新商品柱可在pH1.5~10范圍操作。
正相色譜法與反相色譜法比較表
正相色譜法 反相色譜法
固定相極性 高~中 中~低
流動相極性 低~中 中~高
組分洗脫次序 極性小先洗出 極性大先洗出
從上表可看出,當極性為中等時正相色譜法與反相色譜法沒有明顯的界線(如氨基鍵合固定相)。
3.離子交換色譜法
固定相是離子交換樹脂,常用苯乙烯與二乙烯交聯形成的聚合物骨架,在表面未端芳環上接上羧基、磺酸基(稱陽離子交換樹脂)或季氨基(陰離子交換樹脂)。被分離組分在色譜柱上分離原理是樹脂上可電離離子與流動相中具有相同電荷的離子及被測組分的離子進行可逆交換,根據各離子與離子交換基團具有不同的電荷吸引力而分離。
緩沖液常用作離子交換色譜的流動相。被分離組分在離子交換柱中的保留時間除跟組分離子與樹脂上的離子交換基團作用強弱有關外,它還受流動相的pH值和離子強度影響。pH值可改變化合物的解離程度,進而影響其與固定相的作用。流動相的鹽濃度大,則離子強度高,不利於樣品的解離,導致樣品較快流出。
離子交換色譜法主要用於分析有機酸、氨基酸、多肽及核酸。
4.離子對色譜法
又稱偶離子色譜法,是液液色譜法的分支。它是根據被測組分離子與離子對試劑離子形成中性的離子對化合物後,在非極性固定相中溶解度增大,從而使其分離效果改善。主要用於分析離子強度大的酸鹼物質。
分析鹼性物質常用的離子對試劑為烷基磺酸鹽,如戊烷磺酸鈉、辛烷磺酸鈉等。另外高氯酸、三氟乙酸也可與多種鹼性樣品形成很強的離子對。
分析酸性物質常用四丁基季銨鹽,如四丁基溴化銨、四丁基銨磷酸鹽。
離子對色譜法常用ODS柱(即C18),流動相為甲醇-水或乙腈-水,水中加入3~10
mmol/L的離子對試劑,在一定的pH值范圍內進行分離。被測組分保時間與離子對性質、濃度、流動相組成及其pH值、離子強度有關。
5.排阻色譜法
固定相是有一定孔徑的多孔性填料,流動相是可以溶解樣品的溶劑。小分子量的化合物可以進入孔中,滯留時間長;大分子量的化合物不能進入孔中,直接隨流動相流出。它利用分子篩對分子量大小不同的各組分排阻能力的差異而完成分離。常用於分離高分子化合物,如組織提取物、多肽、蛋白質、核酸等。
4. 什麼是分子篩色譜
en
我來說下
分子篩色譜 molecular sieve chromatography 是20世紀60年代發展起來的一種快速簡便的生物化學分離分析方法。基本原理是指混合溶質的分子按其分子量的大小不同,分別先後流出色譜柱而被分離。色譜分離中的固定相(凝膠)是一種不帶電荷的、具有三維空間、多孔網狀結構的物質,凝膠的每個顆粒的細微結構就如一個篩子,小的分子可以進入凝膠網孔,而大的分子則排阻於凝膠顆粒之外,因而具分子篩的性質,因整個色譜過程一般不變換洗脫液,好像過濾一樣,故也稱凝膠過濾色譜。
就是樓下2位說的 。就是很正確的。
5. 分子篩色譜
分子篩色譜 molecular sieve chromatography 是20世紀60年代發展起來的一種快速簡便的生物化學分離分回析方法。基本原理是指答混合溶質的分子按其分子量的大小不同,分別先後流出色譜柱而被分離。色譜分離中的固定相(凝膠)是一種不帶電荷的、具有三維空間、多孔網狀結構的物質,凝膠的每個顆粒的細微結構就如一個篩子,小的分子可以進入凝膠網孔,而大的分子則排阻於凝膠顆粒之外,因而具分子篩的性質,因整個色譜過程一般不變換洗脫液,好像過濾一樣,故也稱凝膠過濾色譜,又因使用的固定相為凝膠,故又稱為凝膠色譜(gel chromatography;gel filtration chromatography; GFC)。
6. 空間排阻色譜最適宜分離的物質是什麼
正相色譜,吸附機理分離親酯性物質;反相色譜,分配機理分離有一定親水性的有機分子;離子色譜,分子篩機理分離陰離子有機化合物或陽離子。
7. 凝膠過濾(分子篩,排阻層析)純化蛋白,膠的前處理,裝柱等問題求助
買的哪家的膠 你問哪家啊。你買的東西不會連個使用說明都沒有吧。那還作什麼試驗阿。
8. 分子排阻色譜法的分離機理
樣品分子與固定相之間不存在相互作用,色譜固定相是多孔性凝膠,僅允許直徑小於孔徑的組分進入,這些孔對於溶劑分子來說是相當大的,以致溶劑分子可以自由的擴散出入。
樣品中的大分子不能進入凝膠孔洞而完全被排阻,只能沿多孔凝膠粒子之間的空隙通過色譜柱,首先從柱中被流動相洗脫出來;中等大小的分子能進入凝膠中一些適當的孔洞中,但不能進入更小的微孔,在柱中受到滯留,較慢地從色譜柱洗脫出來;
小分子可進入凝膠中絕大部分孔洞,在柱中受到更強的滯留,會更慢的被洗脫出;溶解樣品的溶劑分子,其分子量最小,可進入凝膠的所有孔洞,最後從柱中流出,從而實現具有不同分子大小樣品的完全分離。
(8)EDI分子篩色譜排阻極限擴展閱讀
分子排阻色譜法的適用范圍:
適用於對未知樣品的探索分離,它能很快提供樣品按分子大小組成的全面情況,並迅速判斷樣品是簡單的還是復雜的混合合物,並提供樣品中各組分的近似分子量。
這種分離方法不宜用於分子大小組成相似或分子大小僅差10%的組分分析,如同分異構體的分離不宜用分子排阻色譜法。
如當使用親水性有機凝膠作為固定相時,為消除體積排阻色譜法中不希望存在的吸附作用與基體的疏水作用,通常在流動相中加入少量的無機鹽,以維持流動相的離子強度在0.1—0.5,減少副作用。
9. 色譜法的分離原理是什麼
各組分流經固定相時,與之發生作用,其大小,強弱不同,滯留時間不同即保留時間不同,從固定相中流出有先有後,故而達到分離效果