離子交換色譜柱與反向色譜柱區別

① 離子交換色譜法的原理、裝置及應用是什麼

一、原理：離子交換色譜（ion exchange chromatography，IEC）以離子交換樹脂作為固定相，樹脂上具有固定離子基團及可交換的離子基團。當流動相帶著組分電離生成的離子通過固定相時，組分離子與樹脂上可交換的離子基團進行可逆變換。根據組分離子對樹脂親合力不同而得到分離。

二、裝置：

1、分離柱：裝有離子交換樹脂，如陽離子交換樹脂、陰離子交換樹脂或螯合離子交換樹脂。

2、抑制柱和柱後衍生作用：常用的檢測器不僅能檢測樣品離子，而且也對移動相中的離子有響應，所以必須消除移動相離子的干擾。

3、檢測器：分為通用型和專用型。通用型檢測器對存在於檢測池中的所有離子都有響應。離子色譜中最常用的電導檢測器就是通用型的一種。

三、應用：

離子色譜主要用於測定各種離子的含量，特別適於測定水溶液中低濃度的陰離子，例如飲用水水質分析，高純水的離子分析，礦泉水、雨水、各種廢水和電廠水的分析，紙漿和漂白液的分析，食品分析，生物體液(尿和血等)中的離子測定，以及鋼鐵工業、環境保護等方面的應用。

② 如何反向沖洗液相色譜柱

轉載」《分析測試網路網》實用資料！色譜柱沖洗一點意見！！

主要針對的反向色譜柱而講！

1.色譜柱簡介

最常用的色譜柱填充劑為化學鍵合硅膠。反相色譜系統使用非極性添充劑，以十八烷基硅烷鍵合硅膠最為常用，辛基硅烷鍵合硅膠和其他類型的硅烷鍵合硅膠(如氰基硅烷鍵合相和氨基硅烷鍵合相等)也有使用,正相色譜系統使用極性填充劑，常用的填充劑有硅膠等。離子交換填充劑用於離子交換色譜;凝膠或高分子多孔微球等填充劑用於分子排阻色譜;手性鍵合填充劑用於對映異構體的拆分分析。

填充劑的性能(如載體的形狀、粒徑、孔徑、表面積、鍵合基團的表面覆蓋度、含炭量和鍵合類型等)以及色譜柱的填充，直接影響待測物的保留行為和分離效果。孔徑在15nm(1nm=10埃)以下的填料適合於分析分子量小於 2000的化合物，分子量大於2000的化合物則應選擇孔徑在30nm以上的填料。以硅膠為載體的一般鍵合固定相填充劑適用PH2~8的流動相。當PH大於8時，可使載體硅膠溶解;當PH小於2時，與硅膠相連的化學鍵合相易水解脫落。當色譜系統中需使用PH大於8的流動相時，應選用耐鹼的填充劑，如採用高純硅膠為載體並具有高表面覆蓋度的鍵合硅膠、包裹聚合物填充劑、有機-無機雜化填充劑或非硅膠填充劑等;當需使用PH小於2的流動相時，應選用耐酸的填充劑，如具有大體積側鏈能產生空間位阻保護作用的二異丙基或二異丁基取代十八烷基硅烷鍵合硅膠、有機-無機雜化填充劑等。

2.色譜柱的沖洗體積確定

一般情況都是沖洗色譜柱10-20倍柱體積，具體可以這樣計算，根據柱內徑和柱長算出色譜柱內體積。短柱一般時間就是30分鍾、長柱一般沖洗60分鍾就可以了。舉例：內經為4.6mm、長250mm，其柱內體積=3.14*4.6*4.6/4*250=4.153毫升，流速是1.0毫升每分鍾，折中取15被柱內體積，則沖洗時間就出來了。

3.色譜柱沖洗

沖洗色譜柱最好在分析結束後，用流動相沖洗到基線平穩，然後用10%左右的有機溶劑沖洗色譜柱，主要是沖洗干凈流動相中的緩沖鹽。然後用100有機溶劑沖洗。最好是梯度變化沖洗。分析物可能為一些能溶解在水中，有些需要用純溶劑才能完全去除。如果分析時間緊迫一定要把鹽分沖洗干凈，一般情況不要用純水沖洗色譜柱，特別是反向柱的填料的鍵合集團容易折斷，對色譜柱造成損傷。色譜柱被使用在某種程度上就是開始被污染了，所以色譜柱的壽命和我們使用的情況有很大的關系。雖然被污染但是對我們分析目標物沒有造成影響我們也就是認為還能用。

4.色譜柱維護沖洗

常見故障篩板阻塞，解決辦法是：a、過濾流動相;b、過濾樣品;c、運用在線過濾或保護柱。

柱頭塌陷解決方法是：：a、避免使用PH>8的流動相(針對大部分硅膠的柱子);b、使用保護柱 ;c、使用預柱(飽和色譜柱)。

前面談到的不管用什麼溶劑一定要加入一定比例的用機溶劑，主要是考慮到一些疏水基團在有機溶劑裡面容易伸展利於沖洗其包藏的雜質等。當我們的色譜柱在壓力和柱效下降時，我可以拆開泵近端柱頭的螺絲取出篩板，清洗篩板以及觀察裡面的填料，如填料污染嚴重，就要進行挖取一部分被污染的填料然後用其他廢棄的柱子相同填料來填補，用新的篩板或清洗好的篩板擰好螺絲。然後沖洗觀察柱壓變化和測試柱效等。

5.特殊沖洗
強保留物質和大分子化合物在色譜柱中累積，對樣品中的化合物產生額外的保留行為，不僅引起峰形變寬、拖尾，使柱效下降，同時也會引起保留時間的變化，累積到一定程度時還會導致柱壓升高。由於強保留物質和大分子化合物對色譜分離的影響是一個累積效應，需要一定的時間才會體現出來，但對許多樣品特別是復雜樣品而言，很難判斷其是否含有強保留物質，因此要防止強保留物質的累積，需要在每天的日常維護中用純甲醇或乙腈清洗色譜柱。

清洗方法：

1.未使用緩沖鹽：每天分析完成後，用純甲醇或純乙腈反向沖洗色譜柱60min。

2. 使用過緩沖鹽：分析完成後，先用上述方法除去緩沖鹽，然後再用純甲醇或乙腈反向沖洗色譜柱 60min。

3.補救方法：

水——乙腈——氯仿(或異丙醇)——乙腈——水

每一步以 1.0ml/min 流速反向沖洗色譜柱 60min。

希望大家提出更好的建議和辦法。

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③ 從分析原理簡述hplc中，離子交換色譜，離子對色譜及離子色譜有何異同

離子交換色譜法是利用離子交換原理和液相色譜技術的結合來測定溶液中陽離子回和陰離子的一種答分離分析方法。凡在溶液中能夠電離的物質通常都可以用離子交換色譜法進行分離。現在它不僅適用於無機離子混合物的分離，亦可用於有機物的分離，例如氨基酸、核酸、蛋白質等生物大分子，因此應用范圍較廣。

④ 離子交換色譜柱和離子排阻色譜柱分離物質原理的區別

色譜過程的本質是待分離物質分子在固定相和流動相之間分配平衡的過程，不同的物質在兩相之間的分配會不同，這使其隨流動相運動速度各不相同，隨著流動相的運動，混合物中的不同組分在固定相上相互分離。根據物質的分離機制，又可以分為吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜、凝膠色譜、親和色譜等類別。 吸附色譜利用固定相吸附中心對物質分子吸附能力的差異實現對混合物的分離，吸附色譜的色譜過程是流動相分子與物質分子競爭固定相吸附中心的過程

⑤ 正相色譜柱與反向色譜柱是如何界定的各適合哪類物質的分離

這個也沒有特別嚴格的界定，一般而言，C18、C8、C4、C1等色譜柱是反相色譜柱。剩餘的極性的叫做正相色譜柱。「色譜世界」網站的產品中心，對這些都進行了分類，你自己去看看吧。

⑥ 離子交換色譜法的分離原理

離子交換色譜（ion exchange chromatography，IEC）以離子交換樹脂作為固定相，樹脂上具有固回定離子基團及可交換的離答子基團。當流動相帶著組分電離生成的離子通過固定相時，組分離子與樹脂上可交換的離子基團進行可逆變換。根據組分離子對樹脂親合力不同而得到分離。
陽離子交換:
陰離子交換:
式中"－－"表示在固定相上，Kxy和Kzm是交換反應的平衡常數，Z+和X-代表被分析的組分離子。M+和Y-表示樹脂上可交換的離子團。
離子交換反應的平衡常數分別為：
陽離子交換：
陰離子交換：
平衡常數K值越大，表示組分的離子與離子交換樹脂的相互作用越強。由於不同的物質在溶劑中離解後，對離子交換中心具有不同的親合力，因此具有不同的平衡常數。親合力大的，在柱中的停留時間長，具有高的保留值。

⑦ 正相色譜柱與反相色譜柱的區別

色譜柱的安裝：
1、首先應確認柱和儀器的接頭以及管路是否匹配.為減少死體積,進樣閥、柱子、檢測器之間的連接管路內徑盡可能使用內徑較小的管線,同時控制進樣器、色譜柱和檢測器之間連接管線的長度.安裝色譜柱之前,確認流路系統中的溶劑是否正常.對分析較復雜的樣品建議安裝保護柱.
2、為了使色譜柱與儀器系統達最佳的連接效果,應盡量使用與色譜柱介面相匹配的螺帽和錐形接頭,如原來的接頭長期匹配其他類型的色譜柱,建議在連接新色譜柱前應檢查匹配情況,避免造成色譜柱的損壞或因色譜柱不匹配造成的漏液.
3、使用PEEK 材料的通用接頭,只需用手擰緊不需要特定扳手,使用壓力為5000psi；使用溫度不得超過100℃.
流動相平衡：
1、在進行樣品檢測前,至少使用20倍柱體積流動相使色譜柱充分平衡.流動相一定要使用色譜級別的溶劑.如使用水相的緩沖液應當天配製以保持新鮮避免細菌產生.
2、流動相使用前需用微孔濾膜過濾,消除流動相中顆粒對色譜系統和色譜柱的損壞.緩沖液與其他流動相混合後應重新過濾避免溶解度變化造成產生新的沉澱.不應使用純水作為流動相沖洗C18色譜柱,以免柱性能損壞（添加5％的有機溶劑沖洗色譜柱,同時可以達到對緩沖鹽清洗的作用.還可以使色譜柱更容易平衡）.
3、流動相需脫氣後使用,可避免因氣泡導致的泵和檢測器的工作不正常.如果測試時使用的流動相與色譜柱保存使用的流動相有較大區別,應該使用過度分布的形式進行平衡.避免由於流動相的突然變化造成柱壓增加過大或流動相緩沖鹽結晶造成對色譜柱和儀器系統的損壞.正相色譜柱比反相色譜柱需要更長的平衡時間.
樣品制備與操作：
1、樣品應當盡可能溶解在能與流動相相互溶的溶劑中.除特殊指明外,如使用強溶劑溶解樣品柱子的解析度將可能降低.
2、樣品溶液在進樣前應使用針頭式過濾器對樣品預先過濾.頻繁改變流動相組成,會加速降低柱效.
3、色譜柱由高壓勻漿法裝填,能承受較高壓力.為獲得最佳分離效果,使用時請不要超過200kgf,而且避免壓力突然上升或變化,否則會造成硅膠填料的破壞,減少色譜柱的使用壽命.除特殊要求外最高操作溫度不要超過60℃.
保存色譜柱：
1、如果流動相含有酸或無機鹽,應當先用去離子水（20倍柱體積）沖洗干凈.然後用用100％乙腈或甲醇保存色譜柱.最後用柱子的接頭密封,並放在穩定的環境中存放.
2、應避免色譜柱受到直接的機械沖擊或摔落,避免造成色譜柱性能的降低.
色譜柱的再生：
1、用相當於20倍柱體積的溶劑按下列順序沖洗柱子,建議按柱子的箭頭方向沖洗,盡可能不反沖：沖洗時使用的的參考溶劑順序是水、甲醇、氯仿、異丙醇、甲醇.

⑧ 離子交換色譜法,離子色譜法,離子對色譜法三者的區別

離子色譜是高效液相色譜的一種，故又稱高效離子色譜（HPIC）或現代離子色內譜，其有別於傳統離容子交換色譜柱色譜的主要是樹脂具有很高的交聯度和較低的交換容量，進樣體積很小，用柱塞泵輸送淋洗液通常對淋出液進行在線自動連續電導檢測。
離子對色譜法：不懂

⑨ 分配色譜，吸附色譜和離子交換色譜各是什麼它們的區別

吸附色譜

吸附色譜利用固定相吸附中對物質分子吸附能力的差異實現對混合物的分離，吸附色譜的色譜過程是流動相分子與物質分子競爭固定相吸附中心的過程

吸附色譜的分配系數表達式如下：