單抗超濾
㈠ 純化的單克隆抗體，超濾濃縮的時候會把磷酸鹽離心掉導致抗體的緩沖環境變成水嗎
不會來的。。。
超濾濃縮對於自緩沖液成分不會有任何改變的，因為PBS中的磷酸根離子也好，氯離子也好，鈉離子也好都是很小的離子，可以在溶液中自由擴散，不會因為超濾離心就被甩到下層濾液中去。
你可以做個簡單的實驗，取一定體積PBS溶液測一下pH值和電導率值，之後用超濾管去離心。取出上層未被濾完的溶液再測一下pH值和電導率值，會發現pH值和電導率值和之前測的是一樣的。即可證明未被濾完的溶液還是PBS溶液，而不是水。
㈡ 求教對於單抗糖型分析的具體純化和分析方法
單抗糖型分析方法步驟主要是
PNGase F酶切，收集寡糖，2-AB熒游標記，除去多餘標記，最後內過HILIC分析。
酶切可以按買到容的試劑說明書進行操作
酶切後的純化，有兩種方法：一種是萃取柱；還有一種是加熱使蛋白析出，再離心去除蛋白。也可以採取有機溶劑沉澱蛋白的方法來除去蛋白
收集寡糖，可以用HILIC SPE萃取收集
2-AB熒游標記可以按買到的試劑說明書進行操作
除去多餘標記可以用超濾管去除
㈢ 過表達某種蛋白後會負反饋調節嗎
蛋白表達純化已經是非常經典簡單的實驗了，沒有說的那麼嚇人。
說說我的蛋白表達純化以及下面的單抗製作工作總體設計概要吧：
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首先要知道你要純化蛋白的編碼DNA序列，查閱相關文獻，看目的基因在那些細胞或者組織中高表達，進而設計該基因的引物，擴增出目的DNA片段的ARF。這一布叫目的基因片段的獲取
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構建表達載體：根據你獲得的基因本身的特性確定原核或者真核載體中表達，這一步的主要問題就是構建帶有目的基因的質粒，導入表達系統中。一般原核表達時間短，成本低，表達量大，常優先考慮；但是有些基因在E
coli中就是表達不出，可能是密碼子優化等出現問題，也或者是由於想純化得到更好的活性蛋白的考慮（原核的蛋白折疊系統顯然沒有真核的好），有很多研究者選擇在畢赤酵母中表達。（我手裡就有相關資料，因為以前做過表達純化及後來的單抗制備），這一步再強調一下，優化密碼子對於蛋白的成功表達很重要
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載體構建好了，下面就是重組蛋白的表達了。這一過程涉及到用多少的誘導劑，誘導多少時間才能得到最多的蛋白的問題，即優化表達條件。就是在上述不同量誘導劑誘導條件下，取菌體上清（分泌型）或者破碎細胞（胞內表達的蛋白）電泳，看是否得到目的分子量大小的蛋白
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蛋白表達成功，下面是根據蛋白質本身親水/疏水，電荷帶電特性等確定蛋白純化的方法。一般步驟：離心，取蛋白所在的相
如果是分泌表達的蛋白，則取上清，超濾，沒有超濾儀器可以用透析袋等代替，用離子交換柱層析。基本上這一步能得到純化的95％的蛋白，電泳鑒定基本不會看到有雜帶出現。如果還是純度不符合要求，可以在表達蛋白最初在構建表達載體質粒的時候在蛋白的ORF後面加上HIS－標簽，這樣得到的蛋白不但可以用於HIS柱的進一步純化，在不確定自己的融合蛋白是否有表達的時候，也可以單單用抗HIS的抗體做一WB，分析確認目的蛋白是否表達，這是蛋白表達的常用手段。
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經過純化後的蛋白仍然含有一部分無機鹽，如果需要的話可以將蛋白經真空凍干機凍干，得到純蛋白。
我們實驗室做出來的一個蛋白，編碼序列GC含量高75達％，但是功夫不負有心人，只要你想做那件事情，積極的尋找解決問題的手段，總會搞定的，沒有跨不過的坎。如果坎太寬，搭橋解決總行。
㈣ 合成單克隆抗體需要哪些實驗材料及試劑
1. 將蛋白A-Sepharose置於Tris緩沖液中（超過50倍的量，v/v）充分溶脹。在室溫下將其灌入直徑為2.5 cm 玻璃層析柱中，用Tris緩沖液使其平衡。
2. 腹水濃稀釋於3倍體積的Tris緩沖液，以1~5 ml/min 的速度上樣於蛋白A-Sepharose柱，用Tris緩沖液洗柱子直至所有的未結合的蛋白都被洗脫，採用A280監測。
3. 依次用2~3倍柱床體積的檸檬酸緩沖液、乙酸緩沖液液以及甘氨酸·Cl緩沖液連續洗脫結合蛋白，洗脫下的蛋白直接接入裝有中和緩沖液的管中，中和緩沖液的體積應為所收集蛋白體積的1/4。
4. 採用ELISA法檢測抗原特異性MAb。
5. 在超濾器中濃縮所分離的單克隆抗體到1~5 mg/ml，所用超濾膜為XM50，將單克隆抗體存於-20℃。
㈤ 求重組蛋白表達純化服務質量好些的公司國內或者國外進口皆可！懂的來！
你想知道重組蛋白表達純化服務質量好些的公司?首先就要確定自己的需求！
國內內或者國外進口容皆可！？看來你不缺錢啊！
這個問題問的過於籠統！
首先，蛋白表達與純化包括很多種類型，比如原核蛋白表達，哺乳動物蛋白表達，酵母蛋白表達以及昆蟲蛋白表達等等，而現在生物實驗中常說的蛋白表達純化通常是指利用大腸桿菌表達系統的原核蛋白表達，這種表達方式比較簡單，普遍都可以做。但是如果是指很多種蛋白表達系統的話，可以做的單位就比較少了。
另外，蛋白的表達成功與否還需要取決於蛋白的性質，所以前期一定要問清楚！