去離子甲醯氨rna酶

㈠ RNA酶的作用場所

rna復制酶
rna
replicase
亦稱rna合成酶。是依賴於rna的聚合酶。是以「病毒rna」為模板，
4種
5′-三磷酸核苷[4種核糖核苷酸：腺嘌呤核糖核苷酸(a)，鳥嘌呤核糖核苷酸（g），胞嘧啶核糖核苷酸（c），尿嘧啶核糖核苷酸（u）]為底物的合成rna的酶。是從感染rna型噬菌體或癌病毒的細胞分離出來的。對反應來說，mg2+是必要的，而且模板的特異性高，例如大腸桿菌qβ噬菌體的酶只能以qβ或類綠的噬菌體rna為模板。反應生成物具有與模板鏈完全相同（排除偶然的環境因素）的結構。而實際上rna復制酶中缺乏校正功能，因此rna復制時錯誤率很高。

㈡ dd水是去RNA酶的嗎

如果是直接買的ddH2O那應該是去RNase的，如果是你們實驗室自己製取的，那可以用DEPC進行處理，就可以認為是RNase free的。

㈢ 異硫氰酸胍一步法分離純化rna的時候為什麼不適合富含甘油三酯的脂肪組織

異硫氰酸胍一步法分離純化rna的時候為什麼不適合富含甘油三酯的脂肪組織
通過變性劑破碎細胞或者組織，然後經過氯仿等有機溶劑抽提RNA，再經過沉澱，洗滌，晾乾，最後溶解。但是由於RNA酶無處不在，隨時可能將RNA降解，所以實驗中有很多地方需要注意，稍有疏忽就會前功盡棄。
0 T3 z( F& _, D6 c% ^" h6 Y A6 _RNA提取的一般步驟
- O: Y+ x$ p# s8 U4 M9 S 所有RNA的提取過程中都有五個關鍵點，即：樣品細胞或組織的有效破碎；有效地使核蛋白復合體變性；對內源RNA酶的有效抑制；有效地將RNA從DNA和蛋白混合物中分離；對於多糖含量高的樣品還牽涉到多糖雜質的有效除去。但其中最關鍵的是抑制RNA酶活性。RNA的提取目前階段主要可採用兩種途徑:提取總核酸，再用氯化鋰將RNA沉澱出來；直接在酸性條件下抽提，酸性下DNA與蛋白質進入有機相而RNA留在水相。第一種提取方法將導致小分子量RNA的丟失，目前該方法的使用頻率已很低。( O( g; ^+ K) f+ i& ]% P
實驗步驟：
* l& d6 s5 e( q1 F( g2 | j, ^0 s 破碎組織→分離RNA→沉澱RNA→洗滌RNA→融解RNA→保存RNA。6 D8 }. Q; Y, g* X
1、 破碎組織和滅活RNA酶可以同步進行，可以用鹽酸胍、硫氰酸胍、NP-40、SDS、蛋白酶K等破碎組織，加入β-ME可以抑制RNA酶活性。
" s% f, `0 [1 d* m! ]0 e2、 分離RNA一般用酚、氯仿等有機溶劑，加入少量異戊醇，經過此步，離心，RNA一般分布於上層，與蛋白層分開。
& X. P) i) Y; L# u/ [3、 沉澱RNA一般用乙醇、3M NaAc（pH-5.2）或異丙醇。2 @0 d& z7 ?+ i, g1 @
4、 洗滌RNA使用70％乙醇洗滌，有時，為避免RNA被洗掉，此步可以省掉，洗滌之後可以晾乾或者烤乾乙醇，但是不能過於乾燥，否則不易溶解。
3 @% V" o9 v+ I1 J2 o9 k" z5、 融解RNA一般使用TE。
; L5 f. n6 }( S1 t% Z& J6、 保存RNA應該盡量低溫。為了防止痕量RNase的污染，從富含RNase的樣品（如胰臟、肝臟）中分離到的RNA需要貯存在甲醛中以保存高質量的RNA，對於長期貯存更是如此。從大鼠肝臟中提取的RNA，在水中貯存一個星期就基本降解了，而從大鼠脾臟中提取的RNA，在水中保存3年仍保持穩定。另外，長度大於4kb的轉錄本對於痕量RNase的降解比小轉錄本更敏感。為了增加貯存RNA樣品的穩定性，可以將RNA溶解在去離子的甲醯胺中，存於-70℃。用於保存RNA的甲醯胺一定不能含有降解RNA的雜物。來源於胰臟的RNA至少可以在甲醯胺中保存一年。當准備使用RNA時，可以使用下列方法沉澱RNA：加入NaAc至0.3M，12,000×g離心5分鍾。
& P3 [7 m* ^$ U$ _" ?
: F" x u* N( ?( I氯化鋰法提取總RNA：
" u; }' I! r' ^' ^& l 本方法用高濃度尿素變性蛋白並抑制RNA酶，用氯化鋰選擇沉澱RNA，其特別適合於從大量樣品中提取少量組織RNA，具有快速簡潔的長處，但也存在少量DNA的污染及RNA得率不高,小RNA片斷丟失的缺陷。# ~* S: }9 `* r4 Z3 P
試驗試劑：
" d$ r6 Q+ _. I8 Q1、 氯化鋰/尿素溶液【氯化鋰126g(3M) 尿素、360g(6M) 加水至1L，過濾滅菌】
7 _8 w1 t" o9 a' q! i4 Z2、 懸浮液【10mM? Tris-HCL (pH7.6) ,1mM? EDTA (pH8,0) ,0.5%SDS】
! m8 Q4 R, ]& y: b# `7 d試驗步驟：7 [6 ?$ `* }; o7 _ Z' {
1、 對於大量組織或細胞，則每克組織或細胞加入5－10ml氯化鋰－尿素溶液，勻槳器高速勻槳2分鍾；對於少量細胞（107個細胞/ml），則每克組織或細胞加入0.5ml氯化鋰－尿素溶液手工勻槳，並轉移至Eppendof管中。& Y) b: E, Q" l/ ^ Q: \$ s
2、 勻槳液在0－4℃放置4小時後，12000g離心30分鍾。 x- C6 D- N/ N0 K! t2 a
3、 取沉澱，加入原勻槳液1/2體積的氯化鋰－尿素溶液，重復步驟2。
) y- x) S0 K9 y6 j, e4、 沉澱用原勻槳液1/2體積的氯化鋰－尿素溶液復溶後，加入等體積酚/氯仿/異戊醇在室溫放置15－30分鍾並不時搖動混勻，4000g離心5分鍾。
3 d2 v' i1 ~( ~* D5、 取上層水相，加1/10倍體積的3M乙酸鈉（pH5.2）及2倍體積的乙醇，－20℃放置1小時，5000g離心。
L4 a' Q4 u" l: a* K% Z$ ?( e6、 70％乙醇洗沉澱一次。真空乾燥。3 }; r0 [/ Q' G9 q
7、 RNA溶解液溶解沉澱，得RNA，分裝，於－70℃保存。
0 f. X% R( H% B7 g
! y7 j5 u$ C' |) [% ~! J3 D: Q蛋白酶－熱酚法6 |" ^0 b* [) P3 S* c4 b4 H4 l
本方法適合於病毒RNA的提取
* I( i+ b# r! K試驗試劑：
$ ?4 [7 H9 `) J1、 蛋白酶K（終濃度50ug/ml）, J5 p l6 V/ t7 [/ I
2、 2×緩沖液：1%SDS? 20mMTris-HCL (pH 7.6)? 0.2MnaCL9 h, p ] y+ \$ Z) O
試驗步驟：# W3 v8 G1 [$ ]5 y
1、 提純病毒液中加入等體積緩沖液、蛋白酶K,37℃40-50分鍾。
- K0 p/ E' G0 M# Q- z7 n, {# d2、 加入等體積65℃預熱的酚溶液，輕徭,在65℃保溫5分鍾後再輕徭。
w! `; W( ~, E: i3 ^3、 離心，取上清，氯仿抽提一次。, |( Z0 d; j2 @7 m+ d2 Q& x H
4、 取上層水相，加1/10倍體積的3M乙酸鈉（pH5.2）及2倍體積的乙醇，－20℃放置1小時，5000g離心(10000g,10min)。
7 [/ w, h2 d6 U$ k5、 70％乙醇洗沉澱一次。真空乾燥。
% A5 Y; {( w% ]3 a* y, O e) P6、 RNA溶解液溶解沉澱，得RNA，分裝，於－70℃保存。植物RNA提取過程中難點的相應對策

㈣ 請告訴我一些是RNA的酶的例子

23SRNA的實抄質是肽醯轉移酶，催化使肽鍵襲形成，不需要額外的能量在蛋白質合成過程中，它催化核糖體A位tRNA上末端氨基酸的氨基與P位肽醯-tRNA上氨基酸的羧基間形成肽鍵。其結果,使A位的氨醯-tRNA上的多肽延長了一個氨基酸,而P位的氨醯-tRNA形成脫氨醯-tRNA。

㈤ 然後如何去除DNA中的RNA酶

（一）從源頭控制污染：
（1）玻璃製品、塑料製品和電泳槽 滅菌的一次性使用的塑料製品基本上無RNA酶，可以不經預處理直接用於制備和貯存RNA。實驗室用的普通玻璃器皿和塑料製品經常有RNA酶法染，使用前必須於180 ℃干烤8小時或更長時間（玻璃器皿）或用氯仿沖洗（塑料製品）。另一種方法是用0.1 ％焦碳酸二乙酯（DEPC）的水溶液浸泡用於制備RNA的燒杯，試管和其他用品。DEPC是RNA酶的強烈抑制劑，但其作用並不是絕對的（Fedorcsak和Ehrenberg,1966）。灌滿DEPC的玻璃或塑料器皿在37℃放置2小時，然後用滅菌水淋洗數次， 並於100℃干烤15分鍾（Kumar和Lindberg,1972)。在15 lbf/in2(1.034x105Pa)高壓蒸氯滅菌15分鍾。上述處理可以除去器甲上痕量的DEPC，以防DEPC通過羧甲基化作用對RNA的嘌呤鹼基進行修飾。
用於RNA電泳的電泳槽應用去污劑洗干凈，再用水沖洗，用乙醇乾燥，然後灌滿3％的H2O2溶液，於室溫放置10分鍾，然後用0.1 ％DEPC處理過的水徹底沖洗電泳槽。最好能留出一些玻璃器皿、塑料製品和電泳槽作上特殊標記，存放在指定地點，為RNA實驗專用。
（2）研究人員造成的污染 RNA酶最主要的潛在污染源是研究人員的手。因此，在准備分離的和分析RNA的材料和溶液時，主有涉及RNA的一切操作過程中，都應戴一次性手套，接觸「胖的」玻璃器皿和其他物品以後，手套就可能沾染上RNA酶，因此進行RNA實驗時應勤換手套。
（3）污染的溶液 用高壓滅菌的水和RNA研究專用的化學試劑配製溶液，用干烤過的葯匙稱取試劑，將溶液裝入無RNA酶的玻璃器皿。可能的話溶液均應用0.1％DEPC於37℃至少處理12小時，然後於100℃加熱15分鍾或在15lbf/in2(1.034x105Pa)的高壓下蒸氣滅菌15分鍾。註：DEPC可與胺類迅速發生化學反應，因些不能用來處理含有Tris 一類的緩沖液。可存幾瓶新的未開封的Tris晶體以制備無RNA酶的溶液。
（二）已經污染，可以加入RNA酶的抑制劑
（1）RNA酶的蛋白質抑制劑是 從人胎盤分離的一種蛋白質可與多種RNA酶緊密結合（KI≈3x1010）形成非共價結合的等摩爾復合物，使RNA酶失活。此蛋白質體內可能是血管生成素的抑制劑，血管生成素是氨基酸序列和推測的三級結構與胰RNA酶類似的一種血管生成因子， 幾個廠家以不同的商品名出售這種抑制劑，該蛋白質應置於含5mmol/L二硫蘇糖醇（DTT）的50％甘油中，貯存於－20℃。抑制劑製品凍融數次後或放置在氧化條件下即應棄之不用，因為上述處理會使蛋白質變性從而釋放出所結合的RNA酶。因此，在使用變性劑裂解哺乳動物(mammal;mammalian)細胞這一提取RNA的初始步聚中不應使用這種蛋白抑制劑。然而職用更溫和的裂解方法時應使用這種抑制劑，並且在後續的所有RNA純化步驟中均應有此蛋白質存在。由於酚抽提可以除蛋白質抑制劑，故應在純化過程中補加幾次抑制劑。其最大活性的發揮要求巰基試劑，而且它並不幹擾反轉錄或mRNA在無細胞體系中的翻譯。
（2）氧釩核糖核苷復合物 這種由氧釩（1V）離子和4種核糖核苷之中的任意一種所形成的復合物，是量種過渡態類似物，它能與多種RNA酶結合並幾科能百分之百地抑制RNA酶的活性。這4種氧釩核糖核苷復合物可加入完整細胞中，在RNA提取和純化的所有過程中，其使用濃度都是10mmol/L。所得到的mRNA可直接在硅卵母細胞中進行翻譯， 並能作為某些外酶促反應（如mRNA反轉錄）的模板。然而氧釩核糖核苷復合物強烈抑制mRNA在無細胞體系中的翻譯，因此必須用含0.1 ％羥基喹淋的苯酚[ 用0. 01mol/LTris.Cl(pH7.8)平衡]多次抽提以去除之。有幾家公司出售氧釩核糖核苷復合物。
（3）Macaloid（硅藻上）Macaloid是一咱粘土，很多年前就發現它能吸附RNA酶，用緩沖液將其製成漿液，以0.015％（W/V）的終濃度溶解細胞。 這種粘土隨同它所吸附的RNA酶可在後續的RNA純化過程中（如酚抽提後）經離心去除。
（三）提取核酸時可以加入鹽酸胍或硫氰酸胍溶液。鹽酸胍或硫氰酸胍溶液能迅速溶解蛋白質，從而免受RNA酶的干擾。

㈥ RNA類酶都有哪些

種類數量比較少，而且不常見,比如端粒酶,在細胞中負責端粒的延長的一種酶，是基內本的核蛋白逆容轉錄酶，可將端粒DNA加至真核細胞染色體末端.端粒酶，核酶，RNA聚合酶，逆轉錄酶。

核酶,主要指一類具有催化功能的RNA,亦稱RNA催化劑.自然界中已發現多種核酶，目前主要有四種核酶能用於反式切割靶RNA：四膜蟲自身剪接內含子、大腸桿菌RNase P，錘頭狀核酶和發夾狀核酶。
rRNA，是核糖體上的酶。

拓展資料：

核酸分解的第一步是水解核苷酸之間的磷酸二酯鍵，在高等動植物中都有作用於磷酸二酯鍵的核酸酶。不同來源的核酸酶，其專一性、作用方式都有所不同。有些核酸酶只能作用於RNA，稱為核糖核酸酶（RNase）。

㈦ rnase a酶能與sds結合么

如何去除提取過程中的蛋白質污染提取RNA時如何去除DNA的污染的方法：注意實驗室的標准化問題，注意污染的存在，同時嚴格按照說明書上的操作應該沒有問題。發現DNA污染，用DNAseI消化1小時，37度離心取上清的時候，一定要小心不要取到中間的膜和下面的液體。直接加NaOH溶液與提取液混合攪拌,然後離心就可以了.因為RNA可溶於NaOH溶液,而DNA不可溶,離心後的上清液就不含有DNA了。RNA提取步驟：1.勻漿處理：①組織將組織在液氮中磨碎，每50-100mg組織加入1mlTRIzol，用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10%。②單層培養細胞直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定，不取決於細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。③細胞懸液離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1mlTRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。2.將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鍾，使核酸蛋白復合物完全分離。3.可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可於2-8℃10000×g離心10分鍾，取上清。離心得到的沉澱中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。4.每使用1mlTRIzol加入0.2ml氯仿，劇烈振盪15秒，室溫放置3分鍾。5.2-8℃10000×g離心15分鍾。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60%。6.把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見後。用異丙醇沉澱水相中的RNA。每使用1mlTRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鍾。7.2-8℃10000×g離心10分鍾，離心前看不出RNA沉澱，離心後在管側和管底出現膠狀沉澱。移去上清。8.用75%乙醇洗滌RNA沉澱。每使用1mlTRIzol至少加1ml75%乙醇。2-8℃不超過7500×g離心5分鍾，棄上清。9.室溫放置乾燥或真空抽干RNA沉澱，大約晾5-10分鍾即可。不要真空離心乾燥，過於乾燥會導致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl無RNase的水或0.5%SDS，用槍頭吸打幾次，55-60℃放置10分鍾使RNA溶解。如RNA用於酶切反應，勿使用SDS溶液。RNA也可用100%的去離子甲醯胺溶解，-70℃保存。注意事項：從少量樣品（1-10mg組織或102-104細胞）中提取RNA時可加入少許糖原以促進RNA沉澱。例如加800mlTRIzol勻漿樣品，沉澱RNA前加5-10μgRNase-free糖原。糖原會與RNA一同沉澱出來，糖原濃度不高於4mg/ml是不影響第一鏈的合成，也不影響PCR反應。勻漿後加氯仿之前樣品可以在-60至-70℃保存至少一個月。RNA沉澱可以保存於75%酒精中2-8℃一星期以上或-5至-20℃一年以上。分層和RNA沉澱時也可使用台式離心機，2600×g離心30-60分鍾。預期產量：1mg組織或1×106細胞提取RNA分別為：肝和脾6-10μg，腎3-4μg，骨骼肌和腦組織1-1.5μg，胎盤1-4μg，上皮細胞8-15μg，成纖維細胞5-7μg。

㈧ DNA聚合酶,解旋酶,RNA聚合酶各自的作用對象和作用時期（詳細）

DNA聚合酶以脫氧核苷酸三磷酸（dATP、dCTP、dGTP、或dTTP，四者統稱dNTPs）為作用對象，作用時期為DNA復制時期。

解旋酶以DNA雙鏈的氫鍵為作用對象，作用時期為DNA或RNA復制時期。

RNA聚合酶以四種核糖核苷酸三磷酸（NTP：ATP、GTP、CTP、UTP）為作用對象，作用時期為轉錄時期。

(8)去離子甲醯氨rna酶擴展閱讀

1、DNA聚合酶特性

聚合作用：在引物RNA-OH末端，以dNTP為底物，按模板DNA上的指令，即A與T，C與G的配對原則，逐步逐個、連續地將dNTP加到延伸中的DNA分子3'-OH末端，逐步合成延長中的子鏈DNA。這是DNA聚合酶的主要作用；

3』→5』'外切酶活性（校對作用）：這種酶活性的主要功能是從3』→5』方向識別和切除不配對的DNA生長鏈末端的核苷酸，3』→5』外切酶活性的主要功能是校對作用，當加入的核苷酸與模板不互補而游離時則被3』→5』外切酶切除，

以便重新在這個位置上聚合對應的核苷酸，可見，3』→5』外切酶活性對DNA復制真實性的維持是十分重要的。以保證復制過程的保真性和准確性；

5』→3』外切酶活性（切除修復作用）：該活性是從5』→3』方向水解DNA延長鏈前方的DNA鏈（即只對DNA上雙鏈處的磷酸二酯鍵有切割作用），主要產生5'—脫氧核苷酸。這種酶活性在DNA損傷的修復中可能起著重要作用。

2、DNA解旋酶（DNA helicase）

通常為流體蛋白環，通過ATP水解產生的能量由解旋酶裝載器裝載到DNA單鏈上（單鏈穿過環中央），有3』→5』或5』→3』方向極性，該極性就是它結合的單鏈的極性。它像DNA聚合酶一樣具有延伸性。

與解旋酶裝載器結合，裝載到單鏈DNA上之前，DNA解旋酶是沒有活性的，只有解旋酶裝載器將它裝載到單鏈DNA上，解旋酶裝載器自動離開之後，DNA解旋酶的活性才被激活。直到雙鏈全部解開，運動到單鏈末端時，它才從單鏈上離開。

注意DNA解旋酶結合的是DNA單鏈而不是雙鏈，至於它結合的單鏈，是由起始子蛋白作用到被稱為復制器的DNA區段使該區段發生雙鏈解旋才產生的。

3、RNA聚合酶

該酶需要四種核糖核苷酸三磷酸（NTP：ATP、GTP、CTP、UTP）作為RNA聚合酶的底物，DNA為模板，二價金屬離子Mg2+、Mn2+是該酶的必需輔因子。其催化的反應表示為：（NMP）n+NTP→（NMP）n+1+PPi。RNA鏈的合成方向也是5』→3'，第一個核苷酸帶有3個磷酸基。

其後每加入一個核苷酸脫去一個焦磷酸，形成磷酸二酯鍵，焦磷酸迅速水解的能量驅動聚合反應。與DNA聚合酶不同，RNA聚合酶無須引物，它能直接在模板上合成RNA鏈；RNA聚合酶能夠局部解開DNA的兩條鏈，所以轉錄時無須將DNA雙鏈完全解開，RNA聚合酶無校對功能。

㈨ 請問什麼是RNA 酶

酶的習慣命名抄根據兩個原則：
1.根據酶所催化的底物：如水解澱粉的酶稱為澱粉酶，水解蛋白質的稱為蛋白酶；有時還加上來源，以區別不同來源的同一類酶，如胃蛋白酶、胰蛋白酶等等。
2.根據酶所催化的反應類型：催化底物分子水解的稱為水解酶，催化還原反應的稱為還原酶。
也有根據上述兩項原則綜合命名或加上酶的其它特點，如琥珀酸脫氫酶、鹼性磷酸酶等等。

因此RNA酶是指作用底物為RNA的酶，例如RNA聚合酶。

核酶一詞用於描述具有催化活性的RNA, 即化學本質是核糖核酸(RNA), 卻具有酶的催化功能。核酶的作用底物可以是不同的分子, 有些作用底物就是同一RNA分子中的某些部位。核酶的功能很多,有的能夠切割RNA, 有的能夠切割DNA, 有些還具有RNA 連接酶、磷酸酶等活性。
與蛋白質酶相比，核酶的催化效率較低，是一種較為原始的催化酶。

水解RNA,DNA的可以稱為核酸水解酶，簡稱核酸酶。

㈩ 核酸雜交液中的甲醯胺是那種呢單純的甲醯胺還是去離子甲醯胺，還是別的甲醯胺，謝謝

核酸雜交液中的甲醯胺一般用去離子甲醯胺。