三聚氰胺陽離子交換固相萃取柱

1. 王教授你好，我想問一下關於三聚氰胺的檢測方法，都有哪些謝謝你的幫助。

三聚氰胺(melamine)簡稱三胺, 學名三氨三嗪, 別名蜜胺、氰尿醯胺、三聚醯胺，分子式：、 C3N3(NH2)3 。分子量：126.12，是一種重要的氮雜環有機化工原料〔2〕。三聚氰胺顯弱鹼性，能夠與各種酸反應生成三聚氰胺鹽。在強酸或強鹼液中，三聚氰胺發生水解，胺基逐步被羥基取代，生成三聚氰酸二醯胺、三聚氰酸一醯胺和三聚氰酸。三聚氰胺與醛類反應生成加成化合物。三聚氰胺與醛反應製成樹脂，三聚氰胺樹脂是一種多種用途的材料，防火耐熱且有很高的穩定性，用於生產塑料、廚房用具、防火纖維、商業濾膜、膠水和阻燃劑，部分亞洲國家，也被用來製造化肥。
2 材料與試劑
2.1 儀器與條件
Agilent 1100高效液相色譜儀（美國，Agilent公司）；二極體陣列檢測器（DAD），檢測波長240nm，柱溫：40℃。
（1）Agela VenusilTM ASB C18（ 4.6×250mm）；緩沖液：10mM檸檬酸, 10mM庚烷磺酸鈉； 流動相：緩沖溶液:乙腈=85:15；流速：1.0mL/min。
（2）Agela VenusilTM ASB C8（ 4.6×250mm）；流動相：緩沖液：乙腈=85：15；緩沖液：10mM檸檬酸，10mM辛烷磺酸鈉，調pH為3.0；流速：1.0mL/min；
離子交換固相萃取柱Agela ClearnertTM PCX(北京艾傑爾科技有限公司)
2.2 試劑與樣品
寵物飼料樣品（農業部飼料供應中心提供）；甲醇、乙腈為北京艾傑爾科技有限公司提供；氨水、乙酸鉛、三氯乙酸、均購於北京化學試劑公司；三聚氰胺標准品、檸檬酸、辛烷磺酸鈉（Sigma公司）；甲醇為色譜純，其他均為化學純。
3 實驗方法
3.1樣品前處理方法
(1) 標准樣品配製：
取50mg三聚氰胺標准品，以20%甲醇溶解定容至50mL得到1000ppm的標准溶液，使用時，以提取液(0.1%三氯乙酸)稀釋至所要的濃度。

(2) 提取：
稱取飼料樣品5g，加入50ml 0.1%三氯乙酸提取液，充分混勻，加入2mL 2%乙酸鉛溶液，超聲20min。然後取部分溶液轉移至10mL離心管中，8000rpm/min離心10min，取上清液3mL過混合型陽離子交換小柱(PCX)。

(3) 凈化(PCX小柱，60mg/3mL) ：
a) 活化及平衡：3mL甲醇，3mL水
b) 上樣：加入提取液3mL
c) 淋洗：3mL水；3mL 甲醇；棄去淋洗液並將小柱抽干。
d) 洗脫：5mL 5%氨化甲醇(v/v)洗脫。(5%氨化甲醇的配製：5mL氨水+95mL甲醇)。
e) 濃縮：50℃，氮氣吹乾，20%甲醇/水定容至2mL，HPLC分析或衍生後GC/MS分析。

3.2 HPLC檢測方法

3.2.1 三聚氰胺HPLC-UV檢測方法

三聚氰胺是強極性化合物，在傳統的反相C18柱上保留很差，需要用離子對試劑色譜方法才能有良好的保留與分離，按照美國食品葯品監督管理局（FDA）的三聚氰胺檢測方法和中國農業部公布的三聚氰胺檢測方法，採用艾傑爾(Agela) ASB系列親水色譜柱，可以得到良好的分離效果，分析色譜圖如下：

圖2 Venusil ASB 色譜柱分離三聚氰胺的譜圖

(a) 色譜柱：Venusil ASB C8 4.6×250mm；標准：FDA方法；流動相：緩沖液：乙腈=85：15；緩沖液：10mM檸檬酸，10mM辛烷磺酸鈉，調pH為3.0；流速：1.0mL/min；柱溫：40 oC；波長：240nm
(b) 色譜柱：Venusil ASB-C18 4.6×250mm；標准：中國農業部頒標准方法；緩沖液：10mM檸檬酸, 10mM庚烷磺酸鈉； 流動相：緩沖溶液:乙腈=85:15；流速：1.0mL/min;柱溫：40℃；波長：240nm
空白加水平（mg/L） 回收率
0.01 116%
0.1 108%
0.5 92%
2 96%

由上表1可以看出：用PCX柱凈化樣品，可以得到滿意的回收率，此方法處理樣品，比FDA公布的前處理方法更加准確、可靠。

3.2.2 三聚氰胺LC-MS檢測方法

由於FDA公布的HPLC-UV方法中，流動相添加了離子對試劑，因此限制了液質聯用方法的使用；但不用離子對試劑色譜方法，三聚氰胺在傳統的C18柱上保留很差，不能得到較好的分離定量〔3〕。
基於此問題，艾傑爾科技公司自主開發了新的方法，採用艾傑爾(Agela) ASB系列親水色譜柱，不用離子對試劑也能得到有效的保留與分離。因此方法中流動相不含離子對試劑，可以用於質譜檢測。
與FDA 2007年4月公布的《Updated FCC Developmental Melamine Quantitation (HPLC-UV)》相比較，該方法大大降低了最低檢測限（MSD：0.5ppm；UV：2ppm），提高了檢測靈敏度。
以該方法分別在ASB-C8 4.6×250mm ASB-C18 4.6×250mm 得到的譜圖如下：

圖3 LC-MS方法檢測三聚氰胺的譜圖

緩沖液：10mM的NH4AC；流動相：Buffer:：ACN=95：5；流速：1.0mL/min；進樣量：樣品先用70%ACN溶解成約1mg/mL，用ACN稀釋成0.1mg/mL，進10uL；柱溫：40℃；波長：240nm
4 結果與討論

4.1陽離子交換柱(PCX)

三聚氰胺呈弱鹼性(弱陽離子化合物)，凈化過程一般應選擇陽離子交換柱。混合型的陽離子交換柱(PCX)通過將磺酸基團(-SO3H)鍵合在極性高聚物聚苯乙烯/二乙烯苯（PEP）吸附劑上，具有陽離子交換和反相吸附兩種機理，並具有以下優點：
a) 可通過兩種不同溶液的洗滌(水/一定pH值的緩沖溶液和有機溶劑)，使樣品更干凈，提高檢測的靈敏度。
b) 批次重復性好。
c) 回收率高，重現性好，即使小柱跑干也可以得到較高回收率。

4.2 LC-MS方法優點：

（1）檢測過程簡便：無須添加離子對試劑，三聚氰胺就可得到良好的保留與分離，避免了配製離子對流動相的復雜過程。
（2）提高了檢測的靈敏度：無離子對試劑，可以用於質譜檢測器，大大降低了最低檢測限（MSD：0.5ppm；UV：2ppm）。
（3）降低了檢測成本：不用離子對試劑，就不再需要買價格較貴的離子對試劑了，從而降低了檢測成本。
（4）延長了色譜柱的使用壽命：避免了使用離子對試劑減少色譜柱壽命的影響。
（5）該方法所使用的色譜柱具有通用性：無論是用FDA方法、中國農業部部頒標准方法和本公司開發的LC-MS方法，使用艾傑爾(Agela) ASB系列親水色譜柱均能得到一個很好的檢測結果，從而給客戶提供了多種選擇空間。

2. HPLC用反相C8柱，做飼料中的三聚氰胺含量，但回收率低於60%，且目標峰與雜質峰分離不好，請問如何解決啊，

用國標檢測，回收率一般在75~85%之間，你的那麼低考慮換個廠家的SPE小柱試試，目標峰和雜質峰分離不好，可能是基體干擾，可以考慮改變流動相的比例，最後定容樣品也用流動相試試。

3. 混合型陽離子交換固相萃取柱用英文怎麼說

Mixed mode cation exchange solid phase extraction column

4. simon公司的PCX SPE柱和waters公司的MCX SPE柱有什麼具體的差別

waters的MCX設計用於克服傳統硅膠基質混合型固相萃取吸附劑的局限性，Oasis MCX提供了版雙重保留模式：離子交換權和反相，而且保留作用發生在一種潔凈，穩定，高表面積，在pH 0-14范圍內穩定的有機共聚物上。常用於牛奶和食品飼料中三聚氰胺的檢測。
Simon PCX是以陽離子交換混合機理的水可浸潤型聚合物為基質的萃取柱。提供雙重保留模式：即離子交互與反相保留。填料在PH 0-14范圍內都很穩定，且具有很大的結合容量。常用於提取凈化需要高吸附量的提取生物基質（如血漿，尿液，膽汁及組織勻漿）中的鹼性化合物

5. 三聚氰胺的計算方法有幾種

(1) 檢測液體奶中是否含有三聚氰胺
三聚氰胺微溶於水，常溫下，在水中的溶解度僅為0.33%，也就是說100克奶中僅可以加入0.33克三聚氰胺。而100克牛奶中蛋白質的含量為3克左右，也就是說100克奶中加入三聚氰胺後，如造假加水，只能加入10克水。這對於造假來說，利潤太小，風險又大。此外，最重要的是，三聚氰胺的水溶液呈鹼性，如果在牛奶中加入三聚氰胺，其PH值會接近8，通過PH計很容易就能測出來。
而三聚氰胺在奶粉製造過程中，要加入就容易多了。這是因為三聚氰胺的溶解度隨溫度的升高而快速增加，在100℃時，三聚氰胺在水中的溶解度達到5.14%。而奶粉製造過程中，要殺菌和噴霧造粒，溫度都在100℃左右。
還有更簡單的方法就可以證明三聚氰胺是誰加入的，那就是測一下不同批次和生產日期奶粉中三聚氰胺的含量，如果不同批次和生產日期奶粉中三聚氰胺的含量差別很小，那就可以證明是奶粉生產過程中加的三聚氰胺，因為如果是奶農加入的，這么多奶農，有的加的多，有的加的少，有良心的還可能沒有加，那麼不同批次的奶粉中三聚氰胺含量波動很大，而如果是奶粉生產過程中加入的，由於有標準的工藝和自動化設備，不同批次的奶粉中三聚氰胺含量波動很小。
教你測試奶粉中是否含三聚氰胺(詳細步驟)
由於奶粉安全影響到孩子的健康，這對家長是頭等大事。想了一個簡易方法給大家，僅供參考。
(2)測試奶粉中是否含三聚氰胺：
1。按比平常濃的分量用熱水沖奶粉，充分攪拌到不見固塊，然後放入冰箱，待牛奶靜置降溫。
2。准備黑布一塊和空杯一個。把黑布蒙在空杯口上作為過濾器。
3。將冷卻的牛奶倒在黑布上過濾。
4。如果有白色固體濾出，則用清水沖洗幾次，排除其它可溶物。
5。如果沖洗後發現有白色晶體，可以將晶體放入清水中，該晶體如果沉入水底。那就很可能是三聚氰胺，這種奶粉不能用了。
這種方法可能無法發現微量的三聚氰胺，但微量的三聚氰胺使孩子得結石的可能性也低得多，至少可以把把關。
以上方法僅供參考。
編輯本段專業的化學檢測法測試三聚氰胺
GC-MS法測定動物食品中的三聚氰胺
Spectra-Quad實現三聚氰胺含量在線檢測
超高效液相色譜_電噴霧串聯質譜法測定飼料中殘留的三聚氰胺
反相高效液相色譜法測定飼料中三聚氰胺的含量
高效液相色譜-二極體陣列法測定高蛋白食品中的三聚氰胺
高效液相色譜法(HPLC)測定飼料中三聚氰胺的含量
高效液相色譜-四極桿質譜聯用測定飼料中三聚氰胺含量
固相萃取與高效液相色譜聯用測定寵物食品中三聚氰胺
液相色譜串聯質譜法(LC-MSMS)分析寵物食品中三聚氰胺
液相色譜-串聯質譜法測定飼料中三聚氰胺殘留
GC-MS法測定動物食品中的三聚氰胺
2.1儀器與條件
Agilent1100高效液相色譜儀(美國，Agilent公司);二極體陣列檢測器(DAD)，檢測波長240nm，柱溫：40℃。
(1)AgelaVenusilTMASBC18(4.6×250mm);緩沖液：10mM檸檬酸,10mM庚烷磺酸鈉;流動相：緩沖溶液:乙腈=85:15;流速：1.0mL/min。
(2)AgelaVenusilTMASBC8(4.6×250mm);流動相：緩沖液：乙腈=85：15;緩沖液：10mM檸檬酸，10mM辛烷磺酸鈉，調pH為3.0;流速：1.0mL/min;
離子交換固相萃取柱AgelaClearnertTMPCX(北京艾傑爾科技有限公司)
2.2試劑與樣品
寵物飼料樣品(農業部飼料供應中心提供);甲醇、乙腈為北京艾傑爾科技有限公司提供;氨水、乙酸鉛、三氯乙酸、均購於北京化學試劑公司;三聚氰胺標准品、檸檬酸、辛烷磺酸鈉(Sigma公司);甲醇為色譜純，其他均為化學純。
3實驗方法
3.1樣品前處理方法
(1)標准樣品配製：
取50mg三聚氰胺標准品，以20%甲醇溶解定容至50mL得到1000ppm的標准溶液，使用時，以提取液(0.1%三氯乙酸)稀釋至所要的濃度。
(2)提取：
稱取飼料樣品5g，加入50ml0.1%三氯乙酸提取液，充分混勻，加入2mL2%乙酸鉛溶液，超聲20min。
然後取部分溶液轉移至10mL離心管中，8000rpm/min離心10min，取上清液3mL過混合型陽離子交換小柱(PCX)。
(3)凈化(PCX小柱，60mg/3mL)：
a)活化及平衡：3mL甲醇，3mL水
b)上樣：加入提取液3mL
c)淋洗：3mL水;3mL甲醇;棄去淋洗液並將小柱抽干。
d)洗脫：5mL5%氨化甲醇(v/v)洗脫。(5%氨化甲醇的配製：5mL氨水+95mL甲醇)。
e)濃縮：50℃，氮氣吹乾，20%甲醇/水定容至2mL，HPLC分析或衍生後GC/MS分析。
3.2HPLC檢測方法
3.2.1三聚氰胺HPLC-UV檢測方法
三聚氰胺是強極性化合物，在傳統的反相C18柱上保留很差，需要用離子對試劑色譜方法才能有良好的保留與分離，按照美國食品葯品監督管理局(FDA)的三聚氰胺檢測方法和中國農業部公布的三聚氰胺檢測方法，採用艾傑爾(Agela)ASB系列親水色譜柱，可以得到良好的分離效果，分析色譜圖如下：
圖2VenusilASB色譜柱分離三聚氰胺的譜圖
(a)色譜柱：VenusilASBC84.6×250mm;標准：FDA方法;流動相：緩沖液：乙腈=85：15;緩沖液：10mM檸檬酸，10mM辛烷磺酸鈉，調pH為3.0;流速：1.0mL/min;柱溫：40oC;波長：240nm
(b)色譜柱：VenusilASB-C184.6×250mm;標准：中國農業部頒標准方法;緩沖液：10mM檸檬酸,10mM庚烷磺酸鈉;流動相：緩沖溶液:乙腈=85:15;流速：1.0mL/min;柱溫：40℃;波長：240nm
3.2.2三聚氰胺LC-MS檢測方法
由於FDA公布的HPLC-UV方法中，流動相添加了離子對試劑，因此限制了液質聯用方法的使用;但不用離子對試劑色譜方法，三聚氰胺在傳統的C18柱上保留很差，不能得到較好的分離定量〔3〕。
基於此問題，艾傑爾科技公司自主開發了新的方法，採用艾傑爾(Agela)ASB系列親水色譜柱，不用離子對試劑也能得到有效的保留與分離。因此方法中流動相不含離子對試劑，可以用於質譜檢測。
與FDA2007年4月公布的《(HPLC-UV)》相比較，該方法大大降低了最低檢測限(MSD：0.5ppm;UV：2ppm)，提高了檢測靈敏度。
以該方法分別在ASB-C84.6×250mmASB-C184.6×250mm得到的譜圖如下：
圖3LC-MS方法檢測三聚氰胺的譜圖
緩沖液：10mM的NH4AC;流動相：Buffer:：ACN=95：5;流速：1.0mL/min;進樣量：樣品先用70%ACN溶解成約1mg/mL，用ACN稀釋成0.1mg/mL，進10uL;柱溫：40℃;波長：240nm
4結果與討論
4.1陽離子交換柱(PCX)
三聚氰胺呈弱鹼性(弱陽離子化合物)，凈化過程一般應選擇陽離子交換柱。混合型的陽離子交換柱(PCX)通過將磺酸基團(-SO3H)鍵合在極性高聚物聚苯乙烯/二乙烯苯(PEP)吸附劑上，具有陽離子交換和反相吸附兩種機理，並具有以下優點：
a)可通過兩種不同溶液的洗滌(水/一定pH值的緩沖溶液和有機溶劑)，使樣品更干凈，提高檢測的靈敏度。
b)批次重復性好。
c)回收率高，重現性好，即使小柱跑干也可以得到較高回收率。
4.2LC-MS方法優點：
(1)檢測過程簡便：無須添加離子對試劑，三聚氰胺就可得到良好的保留與分離，避免了配製離子對流動相的復雜過程。
(2)提高了檢測的靈敏度：無離子對試劑，可以用於質譜檢測器，大大降低了最低檢測限(MSD：0.5ppm;UV：2ppm)。
(3)降低了檢測成本：不用離子對試劑，就不再需要買價格較貴的離子對試劑了，從而降低了檢測成本。
(4)延長了色譜柱的使用壽命：避免了使用離子對試劑減少色譜柱壽命的影響。
(5)該方法所使用的色譜柱具有通用性：無論是用FDA方法、中國農業部部頒標准方法和本公司開發的LC-MS方法，使用艾傑爾(Agela)ASB系列親水色譜柱均能得到一個很好的檢測結果，從而給客戶提供了多種選擇空間。
國家食品質量監督檢測中心有關人士說，在現有的國家標准奶粉檢測中，主要進行蛋白質、脂肪、細菌等檢測。三聚氰胺屬於化工原料，是不允許添加到食品中的，所以現有標准不會包含相應內容。也就是說，三聚氰胺不屬於常規檢測項目，正常情況下，很少有人會想到去檢測它。
來源：中科院上海有機化學研究所 化學專業資料庫

參考資料：http://ke..com/view/298398.htm

6. 三聚氰胺有沒有測速的方法

專業的化學檢測法測試三聚氰胺
GC-MS法測定動物食品中的三聚氰胺
Spectra-Quad實現三聚氰胺含量在線檢測
超高效液相色譜_電噴霧串聯質譜法測定飼料中殘留的三聚氰胺
反相高效液相色譜法測定飼料中三聚氰胺的含量
高效液相色譜-二極體陣列法測定高蛋白食品中的三聚氰胺
高效液相色譜法(HPLC)測定飼料中三聚氰胺的含量
高效液相色譜-四極桿質譜聯用測定飼料中三聚氰胺含量
固相萃取與高效液相色譜聯用測定寵物食品中三聚氰胺
液相色譜串聯質譜法(LC-MSMS)分析寵物食品中三聚氰胺
液相色譜-串聯質譜法測定飼料中三聚氰胺殘留
GC-MS法測定動物食品中的三聚氰胺
1儀器與條件
Agilent1100高效液相色譜儀(美國，Agilent公司);二極體陣列檢測器(DAD)，檢測波長240nm，柱溫：40℃。
(1)AgelaVenusilTMASBC18(4.6×250mm);緩沖液：10mM檸檬酸,10mM庚烷磺酸鈉;流動相：緩沖溶液:乙腈=85:15;流速：1.0mL/min。
(2)AgelaVenusilTMASBC8(4.6×250mm);流動相：緩沖液：乙腈=85：15;緩沖液：10mM檸檬酸，10mM辛烷磺酸鈉，調pH為3.0;流速：1.0mL/min;
離子交換固相萃取柱AgelaClearnertTMPCX(北京艾傑爾科技有限公司)
2試劑與樣品
寵物飼料樣品(農業部飼料供應中心提供);甲醇、乙腈為北京艾傑爾科技有限公司提供;氨水、乙酸鉛、三氯乙酸、均購於北京化學試劑公司;三聚氰胺標准品、檸檬酸、辛烷磺酸鈉(Sigma公司);甲醇為色譜純，其他均為化學純。
3實驗方法
3.1樣品前處理方法
(1)標准樣品配製：
取50mg三聚氰胺標准品，以20%甲醇溶解定容至50mL得到1000ppm的標准溶液，使用時，以提取液(0.1%三氯乙酸)稀釋至所要的濃度。
(2)提取：
稱取飼料樣品5g，加入50ml0.1%三氯乙酸提取液，充分混勻，加入2mL2%乙酸鉛溶液，超聲20min。
然後取部分溶液轉移至10mL離心管中，8000rpm/min離心10min，取上清液3mL過混合型陽離子交換小柱(PCX)。
(3)凈化(PCX小柱，60mg/3mL)：
a)活化及平衡：3mL甲醇，3mL水
b)上樣：加入提取液3mL
c)淋洗：3mL水;3mL甲醇;棄去淋洗液並將小柱抽干。
d)洗脫：5mL5%氨化甲醇(v/v)洗脫。(5%氨化甲醇的配製：5mL氨水+95mL甲醇)。
e)濃縮：50℃，氮氣吹乾，20%甲醇/水定容至2mL，HPLC分析或衍生後GC/MS分析。
3.2HPLC檢測方法
3.2.1三聚氰胺HPLC-UV檢測方法
三聚氰胺是強極性化合物，在傳統的反相C18柱上保留很差，需要用離子對試劑色譜方法才能有良好的保留與分離，按照美國食品葯品監督管理局(FDA)的三聚氰胺檢測方法和中國農業部公布的三聚氰胺檢測方法，採用艾傑爾(Agela)ASB系列親水色譜柱，可以得到良好的分離效果，分析色譜圖如下：
(a)色譜柱：VenusilASBC84.6×250mm;標准：FDA方法;流動相：緩沖液：乙腈=85：15;緩沖液：10mM檸檬酸，10mM辛烷磺酸鈉，調pH為3.0;流速：1.0mL/min;柱溫：40oC;波長：240nm
(b)色譜柱：VenusilASB-C184.6×250mm;標准：中國農業部頒標准方法;緩沖液：10mM檸檬酸,10mM庚烷磺酸鈉;流動相：緩沖溶液:乙腈=85:15;流速：1.0mL/min;柱溫：40℃;波長：240nm
3.2.2三聚氰胺LC-MS檢測方法
由於FDA公布的HPLC-UV方法中，流動相添加了離子對試劑，因此限制了液質聯用方法的使用;但不用離子對試劑色譜方法，三聚氰胺在傳統的C18柱上保留很差，不能得到較好的分離定量〔3〕。
基於此問題，艾傑爾科技公司自主開發了新的方法，採用艾傑爾(Agela)ASB系列親水色譜柱，不用離子對試劑也能得到有效的保留與分離。因此方法中流動相不含離子對試劑，可以用於質譜檢測。
與FDA2007年4月公布的《(HPLC-UV)》相比較，該方法大大降低了最低檢測限(MSD：0.5ppm;UV：2ppm)，提高了檢測靈敏度。
以該方法分別在ASB-C84.6×250mmASB-C184.6×250mm得到的譜圖如下：
圖3LC-MS方法檢測三聚氰胺的譜圖
緩沖液：10mM的NH4AC;流動相：Buffer:：ACN=95：5;流速：1.0mL/min;進樣量：樣品先用70%ACN溶解成約1mg/mL，用ACN稀釋成0.1mg/mL，進10uL;柱溫：40℃;波長：240nm
4結果與討論
4.1陽離子交換柱(PCX)
三聚氰胺呈弱鹼性(弱陽離子化合物)，凈化過程一般應選擇陽離子交換柱。混合型的陽離子交換柱(PCX)通過將磺酸基團(-SO3H)鍵合在極性高聚物聚苯乙烯/二乙烯苯(PEP)吸附劑上，具有陽離子交換和反相吸附兩種機理，並具有以下優點：
a)可通過兩種不同溶液的洗滌(水/一定pH值的緩沖溶液和有機溶劑)，使樣品更干凈，提高檢測的靈敏度。
b)批次重復性好。
c)回收率高，重現性好，即使小柱跑干也可以得到較高回收率。
4.2LC-MS方法優點：
(1)檢測過程簡便：無須添加離子對試劑，三聚氰胺就可得到良好的保留與分離，避免了配製離子對流動相的復雜過程。
(2)提高了檢測的靈敏度：無離子對試劑，可以用於質譜檢測器，大大降低了最低檢測限(MSD：0.5ppm;UV：2ppm)。
(3)降低了檢測成本：不用離子對試劑，就不再需要買價格較貴的離子對試劑了，從而降低了檢測成本。
(4)延長了色譜柱的使用壽命：避免了使用離子對試劑減少色譜柱壽命的影響。
(5)該方法所使用的色譜柱具有通用性：無論是用FDA方法、中國農業部部頒標准方法和本公司開發的LC-MS方法，使用艾傑爾(Agela)ASB系列親水色譜柱均能得到一個很好的檢測結果，從而給客戶提供了多種選擇空間。
國家食品質量監督檢測中心有關人士說，在現有的國家標准奶粉檢測中，主要進行蛋白質、脂肪、細菌等檢測。三聚氰胺屬於化工原料，是不允許添加到食品中的，所以現有標准不會包含相應內容。也就是說，三聚氰胺不屬於常規檢測項目，正常情況下，很少有人會想到去檢測它。
編輯本段十一、三聚氰胺事件導致傷亡人員數量
新華網北京9月21日電 衛生部21日通報三鹿牌嬰幼兒配方奶粉事件醫療救治情況時指出，截止到9月21日8時，各地報告因食用嬰幼兒奶粉正在住院接受治療的嬰幼兒共有12892人，其中有較重症狀的嬰幼兒104人；此前已治癒出院1579人。
通報還指出，各地報告因食用嬰幼兒奶粉接受門診治療咨詢並已基本康復的嬰幼兒累計為39965人。
在所有接受治療的嬰幼兒中，2歲以內嬰幼兒佔81.87%，2至3歲幼兒佔17.33%，3歲以上幼兒佔0.8%。經流行病學調查，這些接受治療的嬰幼兒基本上與食用三鹿牌嬰幼兒配方奶粉有關，沒有發現與食用液態奶有關的病例。

7. 乳製品中三聚氰胺檢測技術研究發展

苦味酸法
苦味酸法是國標GB/T9567-1997《工業三聚氰胺>中規定的檢測方法。將水加入試樣，加熱溶解後，加入苦味酸溶液，稱量所生成的苦味酸三聚氰胺沉澱的質量，即測得三聚氰胺純度含量。稱試樣1g（精確至0.0002g）,置於500mL錐形瓶中，同時加入400mL水，加熱溶解；冷卻後，加入酚酞指示液3滴，若顯色，加入硫酸溶液，直至溶液顏色消失，若有不溶物，需過濾，水洗；把濾液和洗液合並，移入500mL容量瓶中，加水至刻度，仔細振搖混合後，准確吸取100mL置於500mL燒杯里；將此溶液加熱至80℃，另加入已加熱至80℃的100mL苦味酸溶液，冷卻至室溫後，保持在15℃以下約8h；用已恆重的玻砂過濾器過濾，之後，先用約100mL苦味酸三聚氰胺的飽和溶液洗滌，再用10mL水洗；在100-105℃下經2h烘乾玻砂過濾器，置於乾燥器中冷卻後，稱量（精確至0.0002g）求得沉澱物質量。。

升華法
在升華裝置中將試樣在負壓下進行加熱，讓三聚氰胺完全升華後，稱其殘渣量，即測得三聚氰胺純度。稱取試樣，置於預先乾燥了的且已知質量的試樣容器里；將試樣容器置入減壓升華裝置內，待完全密閉後，開啟真空裝置緩緩吸引，並調節裝置內的溫度，經2小時升華結束；取出試樣容器，冷至室溫後，稱量試樣容器的質量。

電位滴定法
袁立勇等利用電位滴定法測定溶液中三聚氰胺的含量。硫酸溶液和三聚氰胺反應生成弱酸性化合物。以pH3為終點指示，通過硫酸溶液的消耗體積計算三聚氰胺的含量。相對標准偏差不大於0.50%。

食品中的檢測方法
2007年06月14日，農行行業標准NY/T1372-2007《飼料中三聚氰胺的檢測》中規定測定飼料中三聚氰胺的含量方法為高效液相色譜（HPLC）和氣相色譜質譜聯用法（GC-MS）。2008年10月07日，國家標准GB/T22388-2008《原料乳與乳製品中三聚氰胺檢測方法》[20]中規定原料乳、乳製品以及含乳製品中三聚氰胺檢測方法為高效液相色譜法（HPLC）、液相色譜-質譜/質譜法（LC-MS/MS）和氣相色譜-質譜聯用法[包括氣相色譜-質譜法（GC-MS），氣相色譜-質譜/質譜法（GC-MS/MS）]。2008年10月15日，國家標准GB/T22400-2008《原料乳中三聚氰胺快速檢測液相色譜法》[21]中規定了液相色譜法作為快速檢測原料乳及不含添加物的液態乳製品中三聚氰胺的方法。目前，三聚氰胺的檢測方法還包括試劑盒檢測法（ELISA）、離子交換色譜-紫外檢測法等。

高效液相色譜法（HPLC)
試樣中的三聚氰胺用三氯乙酸溶液提取，提取液離心後經混合型陽離子交換固相萃取柱凈化，洗脫物吹乾後用甲醇溶液溶解，用高效液相色譜儀進行測定。在添加濃度2mg/kg～10mg/kg濃度范圍內，回收率在80%～110%之間，相對標准偏差小於10%。稱取5g試樣，准確加入50ml 10g/L三氯乙酸溶液，加入2ml 22g/L乙酸鉛溶液。搖勻，超聲提取20min。靜止2min，取上層提取液約30ml轉入離心管。在10000r/min離心機上離心5min。分別用3ml甲醇，3ml水活化混合型陽離子交換固相萃取柱，准確移取10ml離心液分次上柱，控制過柱速度在1ml/min以內。再用3ml水和3ml甲醇洗滌混合型陽離子交換固相萃取柱，抽干後用氨水甲醇3ml洗脫。洗脫液50℃氮氣吹乾，准確加入甲醇溶液，渦旋震盪1min，過0.45µm濾膜，上機測定。

氣相色譜-質譜聯用法（GC-MS和GC-MS/MS）[20]
試樣經超聲提取、固相萃取凈化後，進行硅烷化衍生，衍生產物採用選擇離子監測質譜掃描模式（SIM）或多反應監測質譜掃描模式（MRM），用化合物的保留時間和質譜碎片的豐度比定性，外標法定量。其中GC-MS法在添加濃度0.05mg/kg～2mg/kg濃度范圍內，回收率在70%～110%之間，相對標准偏差小於10%；GC-MS/MS法在添加濃度0.005mg/kg～1mg/kg濃度范圍內，回收率在90%～105%之間，相對標准偏差小於10%。

GC-MS法，稱取1g（精確至0.01g）試樣於50mL具塞塑料離心管中，加入25mL 1%三氯渦漩振盪30s，再加入15mL三氯乙酸溶液，超聲提取15min，加入2mL乙酸鉛溶液，用三氯乙酸溶液定容至刻度。充分混勻後，轉移上層提取液約30mL至50mL離心試管，以不低於4000r/min離心10min。上清液待凈化。若樣品中脂肪含量較高，可以先用乙醚脫脂後再用三氯乙酸溶液提取。准確移取5mL的待凈化濾液至固相萃取柱中。再用3mL水、3mL甲醇淋洗，棄淋洗液，抽近干後用3mL 5%氨化甲醇溶液洗脫，收集洗脫液，50℃下氮氣吹乾。

GC-MS/MS法，稱取0.5g（精確至0.01g）試樣，加入5mL甲醇水溶液，渦旋混勻2min後，超聲提取15min-20min，以不低於4000r/min離心10min，取上清液200μL用微孔濾膜過濾，50℃下氮氣吹乾。取氮氣吹乾殘留物，加入600μL的吡啶和200μL衍生化試劑，混勻，70℃反應30min後，供GC-MS或GC-MS/MS法定量檢測或確證。

液相色譜-質譜/質譜法（LC-MS/MS
試樣用三氯乙酸溶液提取，經陽離子交換固相萃取柱凈化後，用液相色譜-質譜/質譜法測定和確證，外標法定量。在添加濃度0.01mg/kg～0.5mg/kg濃度范圍內，回收率在80%～110%之間，相對標准偏差小於10%。稱取1g（精確至0.01g）試樣於50mL具塞塑料離心管中，加入8mL 1%三氯乙酸溶液和2mL乙腈，超聲提取10min，再振盪提取10min後，以不低於4000r/min離心10min。上清液經三氯乙酸溶液潤濕的濾紙過濾後，做待凈化液。若樣品中脂肪含量較高，可以用三氯乙酸溶液飽和的正己烷液-液分配除脂後再用SPE柱凈化。將上述待凈化液轉移至固相萃取柱中。依次用3mL水和3mL甲醇洗滌，抽至近干後，用6mL氨化甲醇溶液洗脫。整個固相萃取過程流速不超過1mL/min。洗脫液於50℃下用氮氣吹乾，殘留物（相當於1g試樣）用1mL流動相定容，渦旋混合1min，過微孔濾膜後，供LC-MS/MS測定。

試劑盒檢測法（Enzyme Linked Immunosorbent Assay ELISA）
試劑盒檢測法即為酶聯免疫吸附劑測定，是利用萃取液通過均質及震盪的方式提取樣品中的三聚氰胺進行免疫測定的一種方法。
將三聚氰胺HRP酶標記物、標樣及樣品提取液加入包被三聚氰胺抗體的試驗孔中孵育在30min的孵育過程中，樣品中的三聚氰胺與HRP酶標記物競爭結合三聚氰胺抗體。孵育完後，傾去孔內液體洗滌除去未結合的三聚氰胺和HRP酶標記物。每孔加入清澈的底物溶液，結合的酶標記物將無色的底物轉化為藍色的物質。孵育30min後終止反應，用酶標儀讀取450nm下各孔的OD值。比較未知樣品的OD值與標樣的OD值，就可計算出樣品中的三聚氰胺濃度，最低可檢測到10ppb以下的三聚氰胺殘留，檢測過程約需65min

離子交換色譜-紫外檢測法
何強建立離子交換色譜-紫外檢測法測定乳製品中三聚氰胺。樣品用水和乙腈提取，分析時用LC-SCX離子交換色譜柱分離，濃度為0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液（pH3.0）-乙腈（70：30）為流動相，在紫外波長240nm處檢測。三聚氰胺為0.5mg/L-100.0mg/L時，質量濃度與色譜峰面積呈良好的線性關系（r=0.9999），最低檢出限為1.0mg/kg，加標回收率為93.8%～102.5%，RSD<3.5%。

其他檢測法
利用抗原與抗體相互識別的原理，製作出能識別三聚氰胺的抗體試紙，將試紙插入稀釋的奶製品中，則可檢測出其中是否含有三聚氰胺。使用膜分離技術萃取樣品溶液，然後採用紫外可見光度法或化學檢驗的方法檢測樣品中三聚氰胺的含量。

8. 三聚氰胺的檢測方法

三聚氰胺檢測方法匯總

GC-MS法測定動物食品中的三聚氰胺

Spectra-Quad實現三聚氰胺含量在線檢測

超高效液相色譜_電噴霧串聯質譜法測定飼料中殘留的三聚氰胺

反相高效液相色譜法測定飼料中三聚氰胺的含量

高效液相色譜-二極體陣列法測定高蛋白食品中的三聚氰胺

高效液相色譜法(HPLC)測定飼料中三聚氰胺的含量

高效液相色譜-四極桿質譜聯用測定飼料中三聚氰胺含量

固相萃取與高效液相色譜聯用測定寵物食品中三聚氰胺

液相色譜串聯質譜法(LC-MSMS）分析寵物食品中三聚氰胺

液相色譜-串聯質譜法測定飼料中三聚氰胺殘留

GC-MS法測定動物食品中的三聚氰胺

2.1儀器與條件

Agilent1100高效液相色譜儀（美國，Agilent公司）；二極體陣列檢測器（DAD），檢測波長240nm，柱溫：40℃。

（1）AgelaVenusilTMASBC18（4.6×250mm）；緩沖液：10mM檸檬酸,10mM庚烷磺酸鈉；流動相：緩沖溶液:乙腈=85:15；流速：1.0mL/min。

（2）AgelaVenusilTMASBC8（4.6×250mm）；流動相：緩沖液：乙腈=85：15；緩沖液：10mM檸檬酸，10mM辛烷磺酸鈉，調pH為3.0；流速：1.0mL/min；

離子交換固相萃取柱AgelaClearnertTMPCX(北京艾傑爾科技有限公司)

2.2試劑與樣品

寵物飼料樣品（農業部飼料供應中心提供）；甲醇、乙腈為北京艾傑爾科技有限公司提供；氨水、乙酸鉛、三氯乙酸、均購於北京化學試劑公司；三聚氰胺標准品、檸檬酸、辛烷磺酸鈉（Sigma公司）；甲醇為色譜純，其他均為化學純。

3實驗方法

3.1樣品前處理方法

(1)標准樣品配製：

取50mg三聚氰胺標准品，以20%甲醇溶解定容至50mL得到1000ppm的標准溶液，使用時，以提取液(0.1%三氯乙酸)稀釋至所要的濃度。

(2)提取：

稱取飼料樣品5g，加入50ml0.1%三氯乙酸提取液，充分混勻，加入2mL2%乙酸鉛溶液，超聲20min。然後取部分溶液轉移至10mL離心管中，8000rpm/min離心10min，取上清液3mL過混合型陽離子交換小柱(PCX)。
(3)凈化(PCX小柱，60mg/3mL)：

a)活化及平衡：3mL甲醇，3mL水

b)上樣：加入提取液3mL

c)淋洗：3mL水；3mL甲醇；棄去淋洗液並將小柱抽干。

d)洗脫：5mL5%氨化甲醇(v/v)洗脫。(5%氨化甲醇的配製：5mL氨水+95mL甲醇)。

e)濃縮：50℃，氮氣吹乾，20%甲醇/水定容至2mL，HPLC分析或衍生後GC/MS分析。

3.2HPLC檢測方法

3.2.1三聚氰胺HPLC-UV檢測方法

三聚氰胺是強極性化合物，在傳統的反相C18柱上保留很差，需要用離子對試劑色譜方法才能有良好的保留與分離，按照美國食品葯品監督管理局（FDA）的三聚氰胺檢測方法和中國農業部公布的三聚氰胺檢測方法，採用艾傑爾(Agela)ASB系列親水色譜柱，可以得到良好的分離效果，分析色譜圖如下：

圖2VenusilASB色譜柱分離三聚氰胺的譜圖

(a)色譜柱：VenusilASBC84.6×250mm；標准：FDA方法；流動相：緩沖液：乙腈=85：15；緩沖液：10mM檸檬酸，10mM辛烷磺酸鈉，調pH為3.0；流速：1.0mL/min；柱溫：40oC；波長：240nm

(b)色譜柱：VenusilASB-C184.6×250mm；標准：中國農業部頒標准方法；緩沖液：10mM檸檬酸,10mM庚烷磺酸鈉；流動相：緩沖溶液:乙腈=85:15；流速：1.0mL/min;柱溫：40℃；波長：240nm

空白加水平（mg/L）回收率0.01116%0.1108%0.592%296%

3.2.2三聚氰胺LC-MS檢測方法

由於FDA公布的HPLC-UV方法中，流動相添加了離子對試劑，因此限制了液質聯用方法的使用；但不用離子對試劑色譜方法，三聚氰胺在傳統的C18柱上保留很差，不能得到較好的分離定量〔3〕。

基於此問題，艾傑爾科技公司自主開發了新的方法，採用艾傑爾(Agela)ASB系列親水色譜柱，不用離子對試劑也能得到有效的保留與分離。因此方法中流動相不含離子對試劑，可以用於質譜檢測。

與FDA2007年4月公布的《(HPLC-UV)》相比較，該方法大大降低了最低檢測限（MSD：0.5ppm；UV：2ppm），提高了檢測靈敏度。

以該方法分別在ASB-C84.6×250mmASB-C184.6×250mm得到的譜圖如下：

圖3LC-MS方法檢測三聚氰胺的譜圖

緩沖液：10mM的NH4AC；

流動相：Buffer:：ACN=95：5；流速：1.0mL/min；進樣量：樣品先用70%ACN溶解成約1mg/mL，用ACN稀釋成0.1mg/mL，進10uL；柱溫：40℃；波長：240nm
4結果與討論

4.1陽離子交換柱(PCX)

三聚氰胺呈弱鹼性(弱陽離子化合物)，凈化過程一般應選擇陽離子交換柱。混合型的陽離子交換柱(PCX)通過將磺酸基團(-SO3H)鍵合在極性高聚物聚苯乙烯/二乙烯苯（PEP）吸附劑上，具有陽離子交換和反相吸附兩種機理，並具有以下優點：

a)可通過兩種不同溶液的洗滌(水/一定pH值的緩沖溶液和有機溶劑)，使樣品更干凈，提高檢測的靈敏度。

b)批次重復性好。

c)回收率高，重現性好，即使小柱跑干也可以得到較高回收率。

4.2LC-MS方法優點：

（1）檢測過程簡便：無須添加離子對試劑，三聚氰胺就可得到良好的保留與分離，避免了配製離子對流動相的復雜過程。

（2）提高了檢測的靈敏度：無離子對試劑，可以用於質譜檢測器，大大降低了最低檢測限（MSD：0.5ppm；UV：2ppm）。

（3）降低了檢測成本：不用離子對試劑，就不再需要買價格較貴的離子對試劑了，從而降低了檢測成本。

（4）延長了色譜柱的使用壽命：避免了使用離子對試劑減少色譜柱壽命的影響。

（5）該方法所使用的色譜柱具有通用性：無論是用FDA方法、中國農業部部頒標准方法和本公司開發的LC-MS方法，使用艾傑爾(Agela)ASB系列親水色譜柱均能得到一個很好的檢測結果，從而給客戶提供了多種選擇空間。

國家食品質量監督檢測中心有關人士說，在現有的國家標准奶粉檢測中，主要進行蛋白質、脂肪、細菌等檢測。三聚氰胺屬於化工原料，是不允許添加到食品中的，所以現有標准不會包含相應內容。也就是說，三聚氰胺不屬於常規檢測項目，正常情況下，很少有人會想到去檢測它。