離子交換層析填料基質種類
⑴ 關於離子交換色譜中弱陽離子交換的填料,只要是羧甲基(CM)的填料都行
這個我知道的也不多,我們公司代理的就有,TOSOH的,他的Toyopearl弱陽離子交換樹脂,這個不錯,資料有些,你要的話可以發給你,留個郵箱啥的
⑵ 離子交換層析可用於哪些種類蛋白質的分離
離子來交換層析是利用蛋白質在不同自PH帶不同種電荷的方法,利用離子交換的方法分離蛋白的。
離子交換內的介質一般是樹脂,陽離子交換型的,使用前樹脂先用鹼處理成鈉型,將氨基酸混合液(pH=2-3)上柱,pH=2-3時,氨基酸主要以陽離子形式存在,與樹脂上的鈉離子發生交換而被「掛」在樹脂上,再用洗脫劑洗脫。不同的氨基酸(帶的電荷不同)與樹脂的親和力不同,要將其分離洗脫下來,需要降低它們之間的親和力,方法是逐步提高洗脫劑的pH和鹽濃度,這樣各種氨基酸將以不同的速度被洗脫下來,反之亦然。
不同反荷離子與樹脂親和力是不同的,其強弱關系為陽性競爭離子:Ag+〉CS+〉K+〉NH4+〉Na+〉H+〉Li+ 陰性競爭離子:I->NO3->(PO4)3->CN-〉HSO3-〉Mg2+〉HCO3-〉HCOO-〉CH3COO-〉OH-〉F- 如果某種離子溶液洗脫效果不好,可用另一種親和力強的離子代替之,等電點>7選擇陽離子交換樹脂,等電點<7選擇陰離子交換樹脂。
⑶ 離子交換層析中流出物質順序是什麼
若用離子交換層析分離物質,以蛋白質為例,離子交換層析中,基質是由帶有電荷的樹脂或纖維素組成。帶有正電荷的稱之陰離子交換樹脂;而帶有負電荷的稱之陽離子樹脂。離子交換層析同樣可以用於蛋白質的分離純化。
由於蛋白質也有等電點,當蛋白質處於不同的pH條件下,其帶電狀況也不同。陰離子交換基質結合帶有負電荷的蛋白質,所以這類蛋白質被留在柱子上,然後通過提高洗脫液中的鹽濃度等措施,將吸附在柱子上的蛋白質洗脫下來。結合較弱的蛋白質首先被洗脫下來。
反之陽離子交換基質結合帶有正電荷的蛋白質,結合的蛋白可以通過逐步增加洗脫液中的鹽濃度或是提高洗脫液的pH值洗脫下來。
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對於離子交換纖維素要用流水洗去少量碎的不易沉澱的顆粒,以保證有較好的均勻度,對於已溶脹好的產品則不必經這一步驟。
溶脹的交換劑使用前要用稀酸或稀鹼處理,使之成為帶H+或OH-的交換劑型。陰離子交換劑常用「鹼-酸-鹼」處理,使最終轉為-OH-型或鹽型交換劑;對於陽離子交換劑則用「酸-鹼-酸」處理,使最終轉為-H-型交換劑。
梯度不要上升太快,要恰好使移動的區帶在快到柱末端時達到解吸狀態。目的物的過早解吸,會引起區帶擴散;而目的物的過晚解吸會使峰形過寬。
⑷ 怎麼用離子交換層析分離等電點分別為4,6,7, 9 的蛋白質
6.洗脫:用含NaCL(0.2-0.6M)的0.02M
Tris-HCL
緩沖液
pH7.4(內含0.
等電聚焦電泳
(IEF)分離蛋白及測定
蛋白質等電點
一、原理
等電點聚焦
(IEF)
⑸ 按層析原理分類除了凝膠層析之外還有哪幾類層析
免疫親和層析
吸附物質與特異性配基配對到色譜基質上,且與配基間具有可逆的相互作用。
離子交換層析
吸附物質通過表面凈電荷的差異,分別與帶正負電荷的層析色譜結合。
疏水相互作用層析
根據吸附物質表面疏水性的不同,利用與疏水層析介質疏表面可逆的相互作用來實現分離。
凝膠過濾層析
根據分子通過凝膠填料大小不同對其進行分離。
反向層析
類似於疏水相互作用層析
⑹ 色譜柱的填料有哪些陽離子交換柱
陽離子是指功能基團,有很多選擇,強陽弱陽;基質又有多種,主要可分為硅膠和聚合物,聚合物種類比較多,如PSDVB,聚甲基丙烯酸酯等。
⑺ 離子交換層析可用於哪些種類蛋白質的分離
離子交換層析是根據蛋白質所帶電荷的差異進行分離純化的一種方法。蛋白質的帶電性是由蛋白質多肽中帶電氨基酸決定的。
⑻ 需要一種離子交換層析膜,基質為纖維素膜(紙),配體為羧酸
用來做什麼的啊 離子交換膜一般基質都是樹脂,配體大多為磺酸的說
⑼ 聚合物填料色譜柱適合分離什麼樣品
液相色譜柱的分類:(按色譜固定相基質分)
一.硅膠基質:
1.反相色譜柱:
反相色譜填料常是以硅膠為基礎,表面鍵合有極性相對較弱的官能團的鍵合相。
反相色譜所使用的流動相極性較強,通常為水,緩沖液與甲醇,已腈等混合物。
樣品流出色譜柱的順序是極性較強組合最先被沖出,而極性弱的組份會在色譜柱上有更強的保留。
常用的反相填料有C18(ODS)、C8(MOS)、C4(B)、C6H5(Phenyl)等。
2.正相色譜:
正相色譜用的固定相通常為硅膠(Silica),以及其他具有極性官能團,如胺基團(NH2,APS)和氰基團(CN,CPS)的鍵合相填料。
由於硅膠表面的硅羥基(SiOH)或其他團的極性較強,因此,分離的次序是依據樣品中的各組份的極性大小,即極性強弱的組份最先被沖洗出色譜柱。
正相色譜使用的流動相極性相對比固定相低,如:正乙烷(Hexane),氯仿(Chloroform),二氯甲烷(Methylene Chloride)等。
3.離子交換色譜柱:以磺化交聯強陰/陽離子鍵合硅膠色譜柱,常用規格:強陰離子色譜柱(SAX),強陽離子交換色譜柱(SCX)
二 .聚合物基質:
聚合物調料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等,其主要優點是在PH值為1~14均可使用。相對與硅膠基質的C18填料,這類填料具有更強的疏水性;大孔的聚合物填料對蛋白質等樣品的分離非常有效。現在的聚合物填料的缺點是相對硅膠基質填料,色譜柱柱效較低。
三.其他無機填料:
其它HPLC的無機填料色譜柱也已經商品化。由於其特殊的性質,一般僅限於特殊的用途。如石墨化碳也用於正逐漸成為反相色譜填料。這種填料的分離不同與硅膠基質烷基鍵合相,石墨化碳的表面即是保留的基礎,不再需其它的表面改性,該柱填料一般比烷基鍵合硅膠或多孔聚合物填料的保留能力更強,石墨化碳可用於分離某些幾何導構體,又由於HPLC流動相中不會被溶解,這類柱可在任何PH與溫度下使用。氧化鋁也可用於HPLC,
氧化鋁微粒剛性強,可製成穩定的色譜柱柱床,其優點是可在PH高達12的流動相中使用。
但由於氧化鋁與鹼性化合物作用也很強,應用范圍受到一定的限制,所以未能廣泛應用,新型氧化鋯填料也可用於HPLC,商品化的僅有聚合物塗層的多孔氧化鋯微球色譜柱,應用PH范圍1~14,溫度可達100℃。由於氧化鋯填料幾年才開始研究,加之面臨的實驗難度,其重要用途與優勢尚在進行中。
⑽ 我要分離純化一種未知酶,一切未知,想用凝膠層析和離子交換層析分離,不知選用什麼填料合適有好的建議
建議用離子交換層析。凝膠過濾層析流速慢,上樣量低,而且分離效內果一般,凝膠過濾一般用容於層析的後期包括除鹽,去除降解片段之類的。
離子交換一般就用到DEAE,因為大部分蛋白都偏酸。要是你的酶是鹼性蛋白,那就更好辦,上個CM柱,其他雜蛋白就留不下多少了。
所以先拿DEAE試試吧。