離子交換蛋白分不開
㈠ 傳統離子交換劑不適用於提取蛋白質的原因有哪三點
(1) 交聯度大 (大分子不能進入) (2) 電荷密度高(結合太強) (3) 骨架憎水性強(蛋白質易變性) 親水性離子交換劑。
㈡ 蛋白等電點為8.7 標簽為6.2 怎樣把他們分開
首先看設計的酶切位點是哪種酶
酶切後首選還是親和層析，因為標簽切除後目的蛋白不再帶有可以結合親和層析的tag，而標簽蛋白依然可以結合親和層析。這樣通過將標簽蛋白結合在親和層析上即可分開。
如果親和層析不能成功，通過離子交換，根據蛋白等電點8.7，標簽為6.2的情況。建議使用陽離子交換層析，在pH7.0的緩沖條件下，蛋白應該可以結合上陽離子交換層析，通過不同鹽濃度洗脫即可分開。
㈢ 離子交換層析和親和層析都可以用來分離所有的蛋白質嗎
理論上來說離子交抄換層析可以用襲來分離所有的蛋白質，但親和層析只能分離能和其特異性結合或者說帶tag的蛋白質。
從實際應用來說，離子交換層析不可能能用來分離所有的蛋白質。這是因為其解析度沒有辦法達到分離所有蛋白質。而且蛋白與蛋白之間可能存在其他的相互作用，造成某個鹽濃度下被洗脫的蛋白可能會吸附其他蛋白一起被洗脫，達不到分離的效果
親和層析就更不可能分離所有的蛋白質了，不管是哪種親和層析都有對應可以特異性吸附的親和標簽蛋白。如果沒有親和標簽，所有的蛋白都是不能吸附的
㈣ 用離子交換劑測定蛋白質的等電點時,為什麼一定要用強性離子交換劑
選用來纖維素離子交換自劑。因為蛋白質不能擴散到樹脂的鏈狀結構中，而纖維素離子交換劑交換容量大。選用ph為5.0的磷酸鹽緩沖溶液和強酸型陽離子交換劑如SE-纖維素。裝柱氫氧化鈉處理，0.1mol/L起始緩沖液平衡，上樣，吸附目標蛋白，0.15mol/L緩沖液洗脫，之後再選用ph6.5,8.0的緩沖液梯度洗脫。等電點=4.0的蛋白質在5.0緩沖液中帶負電，不能被吸附，直接分離。隨後6.0的蛋白質被洗脫出來。再用ph6.5,8.0的緩沖液梯度洗脫。
㈤ 離子交換層析法分離純化蛋白質有哪些局限性
1，離子交換樹脂固定床的床層壓力會隨著分離過程的進程而不斷加大，需要重新填充回。同時答，也造成固定床填充過程操作麻煩，而且密封性要求高。2，蛋白質分離純度問題，如果在出峰之後再行切換接收餾分，而在峰行下降後提前切換，雖可以保證純度，但蛋白分離收率則會下降。3，由於交換層析介質決定，不同蛋白質相互分離效果也不確定，這種分離，也易造成各蛋白峰重疊，造成分離純度下降。4，自動化程度不高。主要也是受固定床以及樹脂交換飽和當量無法保持長期穩定造成的。無法像液相色譜柱那樣，可以在標樣標定後，建立方法，自動分離目標蛋白。5，不過，規模化分離純化蛋白質過程，使用這種層析法，還是具有一定優勢的。
………………
……………………
詳細資料請參考：
離子交換層析: http://proct.bio1000.com/100474/
㈥ 關於蛋白質分離的問題
先通過sepharose G50將分子量為41kD與小分子量的蛋白分開。然後用離子交換膠如DEAE，buffer pH7.0，分離兩種41kD的蛋白。小分子的兩種蛋白通過HPLC分離。
㈦ 關於離子交換
pH9的時候你的蛋白帶負電，所以能結合。pH11的時候可能蛋白變性了。純化蛋白一般要避免極端條件。
㈧ Sephadex G75 凝膠過濾蛋白純化蛋白分不開怎麼辦
Sephadex G75 凝膠過濾分離蛋白也是有局限性的，比如目的蛋白和雜蛋白分子量比較接近的時候就會分不開，一般需要目的蛋白和雜蛋白分子量差距在一倍以上才會有比較好的分離效果。
如果分不開一般最還是選擇其他的層析手段分離，比如離子交換或者疏水
㈨ 離子交換層析法分離純化蛋白質有哪些局限性
因為離子交換吸附蛋白質並不是特異性吸附，在某些情況下可能難以判斷結合的蛋版白質權是否為當初設計的目的蛋白。
離子交換吸附依賴於蛋白質表面的靜電荷，如果蛋白質結構比較特殊，可能會有在各種pH都難以結合上離子交換層析的情況。
離子交換層析對於等電點與目標蛋白接近的雜蛋白並沒有很好的分離效果。