多糖離子交換
Ⅰ 生物多糖提取已經經過了粗提,離子交換柱層析,濃縮中卻出現了絮狀沉澱,但攪拌下可溶解,沉澱是什麼
粗提是除去大部分固體雜質,離子交換是去除一些鹽類物質,濃縮時出現的雜質可能是一些粗體時沒有去除干凈的雜質,知識在很稀的時候看不到。也有可能是柱子沒洗干凈,樹脂中的雜質!
Ⅱ 高血鉀枸杞子能吃嗎
可以!降血糖:枸杞提取物可顯著而持久降低大鼠血糖,增加糖耐量,且毒性較小。 另外,本品還有抗腫瘤、促進造血功能等作用。補腎功能:李曉玫、王海燕、李麗英、毛亞文、韓可漢、耿琳、韓進、李美花、張曉英、餘霞君在老年鼠腎線粒體的老化及其葯物防護中論述道:通過觀察應用枸杞多糖、維生素E-C合劑等抗衰老葯物後,老年鼠腎細胞線粒體超微結構、ATP合成量以及脂質過氧化產物丙二醛水平的改變,發現老年鼠腎線粒體的結構和功能變化伴隨著自由基代謝產物丙二醛的增高,老年鼠腎細胞線粒體ATP合成量為120.38nM/mgPrmin±16.72nM/mgPrmin,較青年組低18.75nM/mgPrmin;而腎組織丙二醛為 30.40μg/100mg±6.66μg/100mg濕重,是青年組的2.4倍。長期服用維生素E-C合劑或枸杞多糖均可在一定程度上起到對抗自由基的作用,使腎組織丙二醛水平下降,預防線粒體老化,使其功能有所改善。 滋補肝腎佳品枸杞子。枸杞子從詩經「集於苞杞」時起,便用於醫葯,迄今已有3000餘年的歷史。枸杞子之名始見於《神農本草經》,並列為上品,千百年來深受人們的喜愛。晉朝葛洪單用枸杞子搗汁滴目,治療眼科疾患;唐代孫思邈用枸杞子配合其他葯製成補肝丸,治療肝經虛寒,目暗不明;唐代李梃《醫學入門》中的五子衍宗丸,就是用枸杞配合菟絲子等做成蜜丸,用淡鹽水送服,治療男子陽痿早泄、久不生育,須發早白及小便後余瀝不禁。枸杞子在增強性功能方面的具有獨特的作用,我國民間流傳甚廣的「君行千里,莫食枸杞」的名言 ,就是講枸杞具有很強的激發性功能的作用,對離家遠行的青年男、女不宜。但是,對於在家的男女和那些性功能減弱的人來說,多食枸杞或其製品,又是非常必要的。對於腎虛的人,枸杞子無疑是最受歡迎的美味與妙葯,更是一種不可多得的保健營養品。大詩人陸游到老年,因兩目昏花,視物模糊,常吃枸杞治療,因此而做「雪霽茅堂鍾磬清,晨齋枸杞一杯羹」的詩句。枸杞子是古今養生的最佳選擇,有延年益壽之功。歷代醫家著重於枸杞子的滋補肝腎作用,近年來人們對枸杞子的化學成分和葯理作用有了進一步的認識,在臨床上擴大了其使用范圍。病情分析:
血清鉀離子>5 mEq/L稱為高鉀血症,6~7 mEq/L為中度高鉀血症,大於7 mEq/L為嚴重高鉀血症.高血鉀最常見的原因是腎衰,症狀為乏力,心律失常等.
意見建議:
首先應糾正病因,減少鉀的來源:如停用含鉀的食物或葯物;供給高糖高脂飲食或採用靜脈營養,以確保足夠熱量,減少體內分解代謝所釋放的鉀;清除體內積血或壞死組織;避免使用庫存血;減少感染,減少細胞分解.治療脫水,酸中毒等.糾正酸中毒靜脈注射11.2%乳酸鈉溶液或5%碳酸氫鈉溶液100ml,重危病犬也可向心腔內注射10~20ml,除糾正酸中毒外還有降低血鉀的作用.降低血鉀靜脈注射25%葡萄糖溶液200m1加胰島素10~20U,以促使鉀由細胞外轉入細胞內.為排除體內多餘鉀,可應用陽離子交換樹脂口服或灌腸,如環鈉樹脂,每天20~40g,分3次使用,以促進排鉀.對腎功能衰竭所引的高血鉀,可採用腹膜透析療法.解除高鉀對心肌的有害作用可反復靜脈注射10%葡萄糖酸鈣溶液或氯化鈣溶液5~10ml,因為鈣可拮抗鉀對心肌的作用.透析適合急重症者伴腎衰竭時,以血液透析為最佳,也可以使用腹膜透析. 如何預防高血鉀症:1.避免攝取高鉀食物例如代鹽、咖啡、濃茶、肉湯、雞精、蜜餞、龍眼乾等。2.蔬菜水煮三分鍾再炒;薯類切片後泡水20分鍾後汁液倒掉不用。竹筍、菜湯及肉湯均為一般人所偏好之食物,請節制食用。3.高鉀水果有柳丁、香蕉、芭樂、蕃茄、硬柿、枇杷、桃子和奇異果。 楊桃因有特殊的副作用,因此,絕對不可食用。西瓜因為容易食用過量,雖鉀離子不高,仍需限制在每日半斤以內。4.胃口好的患者必須特別注意飲食中鉀的攝取。5.食慾不振發高燒病患要注意足夠熱量的攝取。6.防止便秘,養成每天上大號的習慣。7.按時接受每周2--3次血液透析,不可無故延期。
Ⅲ 純化多糖時,纖維素和纖維素陰離子交換柱的區別
庫侖首宰 youtuoh142
Ⅳ RNA的測序原理及方法!^~^
細胞中的RNA可以分為信使RNA、轉運RNA和核糖體RNA三大類,不同組織總提取的實質就是將細胞裂解,釋放出RNA,並通過不同方式去除蛋白,DNA等雜質,最終獲得高純度RNA產物的過程。
RNA 提取流程
1. 樣品處理
從各種不同來源樣品(如細菌、酵母、血液、動物組織、植物組織和培養細胞),或同一來源樣品的不同組織(如植物幼嫩葉片、成熟根、莖等)中提取高質量的RNA,因細胞結構及所含的成分不同,樣品預處理的方式也各有差異。
樣品的要求:
最好使用新鮮的樣品或取樣後立即在低溫(-20℃或-70℃)冷凍保存的樣品,避免反復凍融,因為這會導致提取的RNA降解和提取量下降。
樣品預處理方式:
植物材料-液氮研磨
動物材料-勻漿、液氮研磨
細菌-溶菌酶破壁
酵母-液氮研磨、玻璃珠處理、混合酶破壁
2. 細胞裂解
異硫氰酸胍/苯酚法(TRIZOL)
這是一種傳統的RNA提取方法,適用於大部分動植物材料,但對於次生代謝產物較多的植物材料提取RNA效果較差。異硫氰酸胍能使核蛋白復合體解離,並將RNA釋放到溶液中,採用酸性酚-氯仿混合液抽提,低PH值的酚將使RNA進入水相,而蛋白質和DNA仍留在有機相,從而可以完成RNA的提取工作。
該法應用非常廣泛,適用於包括動物組織、微生物、培養細胞等在內的各類動物性材料,同時還適用於次生代謝物較少的植物性材料,如幼苗、幼葉等。該法主要應用在動物組織和培養細胞的RNA提取中。
胍鹽/ β- 巰基乙醇法:
適用於各種不同動物材料和次生代謝物少的植物材料。
在這種方法中,胍鹽使細胞充分裂解,β-巰基乙醇作為蛋白的變性劑在實驗全程中可以抑制RNaseA的活性,保護RNA不被降解。
我公司的「GREEN 」系列總RNA 提取試劑盒是基於這種方法開發的產品,分別適用於各類不同的材料。此系列產品的具體實驗步驟和適用范圍在實驗技術手冊中有詳細介紹,實驗者可根據自己的需要進行選擇。
其它方法:
有些植物材料多糖多酚含量較高,如植物果實,番茄的葉子等,有些植物木質化程度較高,如根莖等組織。針對這類材料本公司推出了一種全新的植物總RNA提取試劑,該試劑特別適合於從富含多糖、多酚、澱粉的材料中提取純度高、完整性好的總RNA,有關的具體步驟將在分論中詳細介紹,實驗者可根據自己的需要進行選擇。
3. RNA 純化及獲得
純化要求
RNA樣品中不應存在對酶(如逆轉錄酶)有抑製作用的有機溶劑和過高濃度的金屬離子。避免其它生物大分子如蛋白質、多糖和脂類分子的污染。排除DNA分子的污染。
純化方法及沉澱
方法一:有機溶劑抽提法
氯仿抽提
在使用RNA提取試劑進行RNA提取時,常使用氯仿進行抽提,以去除蔗糖、蛋白等雜質,並促進水相與有機相的分離,從而達到純化RNA的方法。在本公司的提取RNA的產品中,與TRIzol同型試劑法及其衍生試劑盒。
沉澱
氯仿抽提RNA後,一般採用了異丙醇或乙醇來沉澱水相RNA。加入0.6倍水相體積的異丙醇或與水相等體積的異丙醇,室溫沉澱20-30分鍾,高速離心,可獲得RNA沉澱。
洗滌沉澱
加入無RNase的75%乙醇,將RNA沉澱振盪懸浮,使RNA沉澱中的鹽離子被充分溶解。然後再離心10-30分鍾。再次沉澱RNA。離心後,小心倒掉上清(注意不要倒出RNA沉澱),隨後快速離心1-2秒,將殘留在管壁上的乙醇手機到管底後,用小槍頭吸凈,超靜台中風干1-2分鍾(注意不要晾得太干,否則RNA沉澱不易溶解)。
溶解沉澱
加入適量RNase-free ddH2O溶解RNA沉澱。
方法二:硅基質吸附法
隨著實驗方法的改進,現已發展出一種採用吸附材料純化核酸的方法。目前較常見的有:硅基質吸附材料、陰離子交換樹脂和磁珠等。硅基質吸附材料因其具有可特異吸附核酸,使用方便、快捷、不使用有毒溶劑如苯酚、氯仿等優點,成為核酸純化的首選。
本公司生產的總RNA提取試劑盒(ZP403-ZP407)和GREENspin系列總RNA提取試劑盒即採用硅基質吸附達到RNA分離純化目的,通過專一結合RNA的離心吸附柱和獨特的緩沖液系統,使樣品在高鹽條件下與硅膠膜特異結合,而蛋白、有機溶劑等雜質不能結合到膜上而被洗脫,鹽類則被含有乙醇的漂洗液洗滌,最後用RNase-free ddH2O將RNA從硅膠膜上洗脫下來。
Ⅳ 離子交換提取蛋白質為什麼用多糖基離子交換劑
鈦白復粉(二氧化鈦TiO2)化學性質穩定,在一制般情況下與大部分物質不發生反應。在自然界中二氧化鈦有三種結晶:板鈦型、銳鈦和金紅石型。板鈦型是不穩定的晶型,無工業利用價值,銳鈦型(Anatase)簡稱A型,和金紅石型(Rutile)簡稱R型
Ⅵ 離子交換純化多糖使用什麼方法檢測收集
離子交換純化多糖使用什麼方法檢測收集
鑒定多糖(參考資料):
1.苯酚-硫酸法 需要多糖的純品和特定的酶
2.蒽酮-硫酸法 多糖在濃硫酸水合產生的高溫下迅速水解,產生單糖,單糖在強酸條件下與苯酚反應生成橙色衍生物。在波長490nm左右處和一定濃度范圍內,該衍生物的吸收值與單糖濃度呈線性關系,從而可用比色法測定其含量,所用的單糖對照品盡量採用與其多糖組成一致或為含量較高的單糖,這樣測得的值較准確。
3.3,5-二硝基水楊酸比色法(DNS法) 在鹼性條件下顯色,較准確測定還原糖與總糖的含量從而求出多糖的含量,可消除還原性雜質的干擾。
多糖的分離純化
在多糖提取物中,常會有無機鹽、蛋白質、色素及小分子物質等雜質,必須分別除去.一般是先脫除非多糖組分,再對多糖組分進行分級.
2.1 除蛋白:除蛋白質時一般選擇能使蛋白質沉澱而不使多糖沉澱的試劑來處理,如酚、三氯乙酸、鞣酸等。但必須處理時間短,溫度低,避免多糖降解。Sevage法(氯仿:戊醇/丁醇=4:1)和三氟三氯乙烷法在避免降解上有較好效果但要達到除盡游離蛋白質的目的仍需反復處理。如能加入蛋白質水解酶,使蛋白質大分子進行一定程度的降解,再用Sevage法處理,一般效果更好。
為了避免使用有機溶劑也可採用反復凍融的方法除蛋白,將多糖液濃縮後,一20℃室溫反復凍融7~8次,離心除去蛋白質。另外,蛋白質在等電點時溶解度最小,用氫氧化鈣飽和液調pH10~pH11可除去偏鹼性的蛋白質,然後再用硫酸調pH5~pH6,可除去偏酸性的蛋白質。凍融和等電點沉澱除蛋白質操作簡單,但多糖液里往往有低濃度的蛋白質殘留,應與其它方法結合使用。
2.2 脫色:植物多糖提取物中含有酚類化合物而使其顏色較深,可用吸附劑(纖維素、硅藻土、活性炭等)、離子交換柱(DEAE一纖維素)、氧化劑(H2O2)等脫除。活性炭比表面積大,吸附能力強,在進行當歸多糖的提取時只向多糖液中加入了0.1%左右的活性炭,煮沸後濾過即完成了脫色操作。此法成本低廉,適合工業化生產。
2.3 除小分子雜質
小分子雜質如低聚寡糖的殘留往往影響多糖的生物活性,需要進一步脫除,提高純度。傳統的方法是透析法,該法操作簡單、技術成熟,但周期長,往往需要2一3天,常溫下操作有可能造成多糖的霉變,必要時需加入少量防腐劑或需在低溫條件下進行。隨著膜分離技術的發展,纖維濾器透析法已經發展起來了,它利用不同孔徑的膜使大小不同的分子分級,這種方式可縮短生產周期,而且條件溫和,無疑是多糖脫除雜質的一條新途徑。
2.4 多糖的分級純化
採用一般方法提取的多糖通常是多糖的混合物,分級的方法可達到純化的目的.可按溶解性不同進行分級、按分子大小和形狀分級(如分級沉澱、超濾、分子篩、層析等),也可按分子所帶基團的性質分級.
2.4.1按溶解性不同分離
2.4.1.1分步沉澱法
分步沉澱法是根據不同多糖在不同濃度低級醇、酮中具有不同溶解度的性質,從小到大按比例加入甲醇或乙醇或丙酮進行分步沉澱.
2.4.1.2 鹽析法
鹽析法是根據不同多糖在不同鹽濃度中溶解度不同而將其分離的一種方法。常用的鹽析劑有氯化鈉、氯化鉀、硫酸銨等,其中以硫酸銨最佳。
2.4.2 按電離性質不同分離
2.4.2.1季胺鹽沉澱法
季胺氫氧化物是一類乳化劑,能與酸性多糖形成不溶性化合物季銨絡合物,此絡合物在低離子強度的水溶液中不溶解而產生沉澱。若提高多糖液pH值或加入硼砂緩沖液,也可使中性多糖沉澱分離。常用季銨鹽有十六烷基三甲基季銨鹽的溴化物及其氫氧化物和十六烷基吡啶。
2.4.3 柱層析法
2.4.3.1凝膠柱層析法
凝膠柱層析法常用的凝膠有葡聚糖凝膠(Sephadex)和瓊脂糖凝膠(Sepharose),以不同濃度的鹽溶液和緩沖溶液作為洗脫劑,從而使不同大小的多糖分子得到分離純化,但不適宜粘多糖的分離。
2.4.3.2纖維素陰離子交換劑柱層析法
纖維素陰離子交換劑柱層析法常用的交換劑為DEAE一纖維素和ECTEOLA一纖維素,分類硼砂型和鹼型兩種,洗脫劑可用不同濃度鹼溶液、硼砂溶液、鹽溶液,其優點可吸附雜質、純化多糖,並適用於分離各種酸性、中性多糖和粘多糖。如百合多糖、北沙參多糖、太子參多糖等。
2.4.3.3 活性炭柱層析法
活性炭吸附量大、效率高,是分離水溶性物質的常用吸附劑。柱層析時活性炭中常拌入等量的硅藻土作稀釋劑,以增加溶液的流速。糖溶液上柱後先用水洗脫無機鹽、單糖等再依次增加乙醇濃度進行洗脫。
2.4.3.4 離子交換柱層析和普通凝膠柱層析聯用法
有些植物的多糖成分復雜, 除中性多糖外,還含有糖醛酸等,因此往往兩種不同性質的色譜柱聯用才能得到單一多糖組分。
2.4.3.5 三種層析柱聯用
採用離子交換葡聚糖凝膠柱、丙烯葡聚糖凝膠柱和葡聚糖凝膠柱三者聯用,即先進行DEAE—SephadexA柱層析,用蒸餾水洗脫。水洗組分進一步用SephacrylS柱層析,得到主要組分再用SephadexG一100柱層析,有時會有較高的得率。
三、多糖的純度鑒定
經過分級純化的多糖在測定結構前須進行純度鑒定.而且多糖的純度不能用通常化合物的純度標准來衡量,因為即便是多糖純品,其微觀也並不均一,僅代表相似鏈長的多糖分子的平均分布,通常所謂的多糖純品也只是一定相對分子質量范圍的多糖的均一組分.目前常用於多糖純度的鑒定方法有:高效液相、 凝膠層析法、電泳法、色譜法、旋光度法等.
多糖的單糖組分的鑒定稱取多糖粗品8 mg,用2 mL濃度為1 mol/L硫酸100*C水解6 h。飽和Ba(OH)2中和至中性,抽濾,取濾液,濃縮,毛細管點樣,薄層層析法分析。採用硅膠G板105"(2活化2 h後使用。標准糖分別為D一半乳糖,D一葡萄糖,D一甘露糖,L一山梨糖、L一阿拉伯糖。展開劑為正丁醇一冰醋酸一水(4:1:5)(體積比)。用AgNO3一NaOH 溶液顯色。
Ⅶ 離子交換提取蛋白質為什麼用多糖基離子交換劑
離子交換柱中以多糖鏈(如葡聚糖)作為載體連接臂,在多糖分子末端通過化專學反應連接具有交換屬作用的離子交換劑。這樣的做法旨在增大離子交換的柔性以及減小離子交換過程中目的吸附物質相互間的空間位阻;另外多糖的帶電性以及解離性比較穩定,產生的非特異吸附較少。
Ⅷ DEAE-52離子交換色譜柱精製多糖 在加洗脫劑前會不會有多糖出來
這個理論上來說是不會有多糖出來的,但是實際上會有很少的部分會流出,這取決於吸附劑的多少,和能力的強弱