離子交換纖維素的名詞解釋
① 簡述離子交換纖維素的特點有哪些
簡述離子交換纖維素的特點有哪些
具有開放性支持骨架,大分子可以自由進入內和迅速擴散容,故吸附容量大.⑵具有親水性,對大分子的吸附不大牢固,用溫和條件使可以洗脫,不致引起蛋白質變性或酶的失活.⑶多孔性,表面積大、交換容量大,回收率高,可用於分離和制備.
② DEAE纖維素柱的原理
DEAE纖維素柱原理,基於離子交換層析:離子交換層析中,基質是由帶有電荷的樹脂或纖版維素組成。
陰離子交權換基質結合,帶有負電荷的蛋白質,然後這類蛋白質被留在柱子上,然後通過提高洗脫液中的鹽濃度等措施,將吸附在柱子上的蛋白質從而洗脫下來。
(2)離子交換纖維素的名詞解釋擴展閱讀:
基本信息:
性狀:乾燥纖維狀。
用途:用於柱色譜分析,用以分離提純多糖、肽、核苷酸、酶、血清組分和病毒等,陰離子交換填料。
保存:常溫乾燥封袋保存。
DEAE—纖維素的使用方法:
稱取IgDEAE32或52,放入5ml量筒中,加蒸餾水浸泡過夜,觀察溶脹後DEAE的體積。根據所需層析柱的柱床體積計算所需DEAE的用量,稱取所需DEAE用蒸餾水浸泡過夜,其間換幾次水,每次除去細小顆粒。
抽干,改用0.5mol/LNaOH溶液浸泡1h以上,抽干(可用布氏漏斗),用無離子水漂洗,使pH至8左右(用pH試紙檢查)。再改用0.5mol/LHCl溶液浸泡1h以上,去酸溶液,用無離子水洗至pH6左右。本實驗中在用前應以0.0175mol/L,pH6.7磷酸鹽緩沖液,浸泡平衡後使用。
③ DEAE纖維素陰離子交換柱,看到很多地方講到流穿模式,什麼叫做流穿模式呢
流穿模式指的是樣品沒掛柱,都留下來了。
④ 離子交換層析中流出物質順序是什麼
若用離子交換層析分離物質,以蛋白質為例,離子交換層析中,基質是由帶有電荷的樹脂或纖維素組成。帶有正電荷的稱之陰離子交換樹脂;而帶有負電荷的稱之陽離子樹脂。離子交換層析同樣可以用於蛋白質的分離純化。
由於蛋白質也有等電點,當蛋白質處於不同的pH條件下,其帶電狀況也不同。陰離子交換基質結合帶有負電荷的蛋白質,所以這類蛋白質被留在柱子上,然後通過提高洗脫液中的鹽濃度等措施,將吸附在柱子上的蛋白質洗脫下來。結合較弱的蛋白質首先被洗脫下來。
反之陽離子交換基質結合帶有正電荷的蛋白質,結合的蛋白可以通過逐步增加洗脫液中的鹽濃度或是提高洗脫液的pH值洗脫下來。
(4)離子交換纖維素的名詞解釋擴展閱讀:
對於離子交換纖維素要用流水洗去少量碎的不易沉澱的顆粒,以保證有較好的均勻度,對於已溶脹好的產品則不必經這一步驟。
溶脹的交換劑使用前要用稀酸或稀鹼處理,使之成為帶H+或OH-的交換劑型。陰離子交換劑常用「鹼-酸-鹼」處理,使最終轉為-OH-型或鹽型交換劑;對於陽離子交換劑則用「酸-鹼-酸」處理,使最終轉為-H-型交換劑。
梯度不要上升太快,要恰好使移動的區帶在快到柱末端時達到解吸狀態。目的物的過早解吸,會引起區帶擴散;而目的物的過晚解吸會使峰形過寬。
⑤ 純化多糖時,纖維素和纖維素陰離子交換柱的區別
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⑥ 弱酸性和弱鹼性的纖維素離子交換劑分別適宜在哪些ph范圍內應用,為什麼
弱酸的適用pH值為0~14
弱鹼的適用pH值為0~9,因為高pH值下,弱鹼基團多以非離子形態存在,不顯鹼性
⑦ 離子交換纖維素有何特點.為什麼人們常用它來分離純化酶
離子交換纖維素有何特點.為什麼人們常用它來分離純化酶
⑴具有開放性支持骨回架,大分子可以自由答進入和迅速擴散,故吸附容量大.⑵具有親水性,對大分子的吸附不大牢固,用溫和條件使可以洗脫,不致引起蛋白質變性或酶的失活.⑶多孔性,表面積大、交換容量大,回收率高,可用於分離和制備.
⑧ 用過的sephadex G-25層析柱和DEAE纖維素離子交換柱再生的方法為什麼不一樣
飛秒檢測發現sephadex G-25層析柱填料是葡聚糖交聯的凝膠柱,G-X, X:(1)交聯度。X越小,交聯度越大,網孔越小,適用於分離低分子量產品,反之亦然。(2)吸水量。為凝膠得水值的10倍.例如,G-25為每克凝膠膨脹時吸水2.5克.凝膠柱使用一次後,必須反沖疏鬆一次,平衡後再使用。若使用數次,就需要再生處理。用0.1mol/L NaOH-0.5mol/L NaCl溶液浸泡,然後用蒸餾水洗至中性備用。若實驗完畢,將再生後的凝膠在布氏漏鬥上用蒸餾水洗滌抽干,再用95%乙醇洗兩次,在60℃烘箱中烘乾,回收保存。
DEAE-纖維素為二乙氨乙基纖維素,是陰離子交換劑。基質是由帶有電荷的樹脂或纖維素組成。離子交換層析中,基質是由帶有電荷的樹脂或纖維素組成。帶有正電荷的稱之陰離子交換樹脂;而帶有負電荷的稱之陽離子樹脂。離子交換層析同樣可以用於蛋白質的分離純化。由於蛋白質也有等電點,當蛋白質處於不同的pH條件下,其帶電狀況也不同。陰離子交換基質結合帶有負電荷的蛋白質,所以這類蛋白質被留在柱子上,然後通過提高洗脫液中的鹽濃度等措施,將吸附在柱子上的蛋白質洗脫下來。結合較弱的蛋白質首先被洗脫下來。反之陽離子交換基質結合帶有正電荷的蛋白質,結合的蛋白可以通過逐步增加洗脫液中的鹽濃度或是提高洗脫液的pH值洗脫下來。離子交換劑的再生與保存離子交換劑可在柱上再生。如離子交換纖維素可用2mol/:NaCl淋洗柱,若有強吸附物則可用0.1mol/LNaOH洗柱;若有脂溶性物質則可用非離子型去污劑洗柱後再生,也可用乙醇洗滌,其順序為:0.5mol/LNaOH-水-乙醇-水-20%NaOH-水。保存離子交換劑時要加防腐劑。對陰離子交換劑宜用0.002%氯已定(洗必泰),陽離子交換劑可用乙基硫柳汞(0.005%)。有些產品建議用0.02%疊氮鈉。
兩種填料的抗酸鹼性和抗腐蝕性能不同。
⑨ 7.下列關於用離子交換纖維素色譜法分離蛋白質原理的敘述哪一個是正確的
答案D
分配層析利用樣品各組分在固定相和流動相間溶解度的不同專(分配系數不同)來進行分離;吸附屬層析法利用吸附劑表面對樣品組分吸附能力強弱不同來進行分離;親和層析由於配體與待分離物質進行特異性結合;DEAE-纖維素離子交換層析法利用樣品組分對離子交換劑靜電力的差異來進行分離。
⑩ deae-陰離子纖維素的使用方法
DEAE-纖維素的處理及裝柱
(1)處理
本實驗採用的是DEAE-纖維素DE 52 是弱酸型陰離子交換劑,具體處理方法為:先將DE52陰離子交換劑乾粉浸泡於蒸餾水中,去除雜質;再在0.5N的HCL溶液中浸泡1-2h,再用無離子水或蒸餾水洗至pH值中性或PH4以上,並將其在抽濾漏斗中抽干;將抽乾的離子交換劑浸泡在0.5N的NaOH溶液中1-2h,再用無離子水或蒸餾水將其洗至中性。
(2)裝柱
將層析柱清洗干凈垂直固定到層析架上,加1/3體積的無離子水,打開下出液口,水流暢通,即刻將小燒杯中裝有適宜濃度的柱材,輕輕倒入層析柱中,凝膠自然慢慢沉降再層析柱底部,凝膠沉積直到離層析柱上端1.5-2cm處,停止裝柱。層析柱上端進液口連接恆流泵,下出口連接蛋白質監測儀,待層析柱的平衡。
(3)平衡
在柱層析上樣前必須對層析柱進行平衡,所謂平衡就是將層析柱中的溶液用層析過程的緩沖液(洗脫液)置換出來,使層析柱中的緩沖系統與柱層析過程中的系統一致。其方法是:利用層析柱上端的恆流泵將平衡緩沖液泵入到層析柱內,打開層析柱下端的出口,平衡液流速在0.5-1ml/min,當下出口流出液的PH值與平衡緩沖液的PH值一致時,層析柱達到了平衡。在本實驗中,用0.002M Tris-HCL緩沖液PH7.4(內含0.0001M EDTA),預先將DE-52柱進行平衡。