蛋白復性液離子交換
❶ 蛋白質復性
問錯地方了。這么專業的生物知識，最好去搜索文獻。關於包涵體的文獻太多了。基本上做蛋白的都有涉及。 不要在這問，自己多下載一些文獻，比這里的回答強的多。
簡單找了點。
1. 對於尿素和鹽酸胍該怎麼選擇?
尿素和鹽酸胍屬中強度變性劑，易經透析和超濾除去。它們對包涵體氫鍵有較強的可逆性變性作用，所需濃度尿素8-10M，鹽酸胍6-8M。尿素溶解包涵體較鹽酸胍慢而弱，溶解度為70-90%，尿素在作用時間較長或溫度較高時會裂解形成氰酸鹽，對重組蛋白質的氨基進行共價修飾，但用尿素溶解具有不電離，呈中性，成本低，蛋白質復性後除去不會造成大量蛋白質沉澱以及溶解的包涵體可選用多種色譜法純化等優點，故目前已被廣泛採用。
鹽酸胍溶解能力達95%以上，且溶解作用快而不造成重組蛋白質的共價修飾。但它也有成本高、在酸性條件下易產生沉澱、復性後除去可能造成大量蛋白質沉澱和對蛋白質離子交換色譜有干擾等缺點。
2. 怎樣洗滌包涵體？
通常的洗滌方法一般是洗不幹凈的，可以先把包涵體用6M鹽酸胍溶解充分，過濾除去未溶解的物質，注意留樣跑電泳，然後用水稀釋到4M,離心把沉澱和上清分別跑電泳，如此類推可以一直稀釋到合適的濃度，可以找到一個合適去除雜質的辦法，其實這就是梯度沉澱的方法，比通常的直接洗脫效果好。
3. 8M尿素溶解的包涵體溶液應如何保存?
在4度放置半個月，都沒什麼問題 。在室溫放置超過48小時，可能會對目的蛋白有影響，因為尿素在鹼性條件下可使一些氨基酸醯基化，所以早些處理BI溶液比較好。
4. 包涵體復性有什麼原則？
低濃度，平緩梯度，低溫。
5. 復性時的蛋白濃度是？
一般使用濃度為0.1-1mg/ml，太高的濃度容易形成聚體沉澱，太低的濃度不經濟，而且很多蛋白在低濃度時不穩定，很容易變性。
6. 復性中蛋白析出是怎麼回事？該怎麼處理？
出現蛋白析出，肯定是條件變化太劇烈了。復性應該採取復性液濃度和PH值逐漸變化的方法，例如根據包涵體的溶液成分，每隔1個PH或濃度值配置一種溶液，逐步透析到正常。此外透析時必須濃度極低，條件溫和，使蛋白質能夠正確折疊。但是復性的比率應該很低。
若加變性劑尿素可加到2M，鹽酸胍可加到1-1.5M；
另外可將甘油濃度增加，范圍可在≤30%，且在復性樣品中也可加適量甘油。
❷ 什麼叫蛋白質的復性
蛋白質的復性
蛋白質復性的最大問題，是在復性過程中形成中間體和多聚體，中間體阻礙作用大的使蛋白質正確折疊困難，復性就困難；阻礙小或無阻礙的容易復性。降低蛋白濃度可以減少中間體形成提高復性率。減少中間體的形成，可選用添加小分子物質，又叫分子伴侶，如精氨酸、甘油、PEG等小分子物質幫助蛋白質正確折疊。避免多聚體的形成可以加入氧化還原劑（DTT、ß－ME、還原型谷胱甘肽、氧化型谷胱甘肽、Cu2＋等），幫助蛋白質復性中二硫鍵的正確配對，減少錯配率。
復性緩沖液的pH要遠離等電點，離子強度不易過高，10－50mmol/L，離子強度太高蛋白質易發生沉澱，也不利於離子交換層析的分離；復性液溫度不易過高在4℃－10℃較合適對於耐熱蛋白也可以室溫復性。復性時間，以天然表達的重組蛋白復性應在6hr以上，需要進行酶切的融和表達重組蛋白，至少要復性1hr以上，方可進行進一步的酶切。
復性方式：常用的有透析復性和稀釋復性。透析復性適用於小樣品制備；對於大樣品制備，採用稀釋復性法簡便、實用。一般包含體蛋白的復性濃度不易過大，不同的蛋白質有所區別，一般掌握在100－200ug/ml較合適，蛋白濃度太稀使純化流程過長，蛋白濃度太濃，蛋白質復性不完全，會直接影響蛋白的回收率。直接稀釋有困難的，也可以試用分段稀釋法。
蛋白質的復性是重組蛋白純化中最關鍵和最復雜的問題。蛋白質的性質不同，所處的環境不同，使其復性條件大不相同。任何一個蛋白質都有一個最佳的復性條件，這個最佳條件的選擇是靠大量的實驗來完成的。只有選擇到了合適的復性緩沖液，使蛋白得以正確折疊，才能使進一步的層析分離得以順利完成。
❸ GSH-GSSG體系在蛋白質復性中的作用
GSH-GSSG體系中，GSH中含有巰抄基，在襲紅細胞中作為巰基緩沖劑存在，維持血紅蛋白和其他紅細胞蛋白質的半胱氨酸殘基處於還原態。
類似的實驗還有Anfinsen的核糖核酸酶變性、復性實驗，其中復性過程中起著類似作用的是巰基乙醇。
實驗中尿素是蛋白質變性劑，巰基乙醇是巰基還原劑。蛋白質復性過程中二硫鍵的結合不會自然的與原蛋白質中對應的巰基（SH-）對應，因而存在錯配現象，在存在微量巰基乙醇的條件下，會保持溶液的還原條件，允許「錯配者」反悔，最後趨向於熱力學上更穩定的配對，使原蛋白質的多肽鏈自發折疊成天然構象。
樓主說的GSH-GSSG體系，應該和巰基乙醇有相同的作用。
❹ 什麼是蛋白質的變性作用和復性作用蛋白質變性後那些性質會發生改變
蛋白質變性作用是指在某些因素的影響下,蛋白質分子的空間構想被破壞,並導致其版性質和生物活性改變的現象權.條件溫和,結構改變不大,除去變性因素,適當條件下變性可恢復其天然構象和生物活性.為復性.
變性發生的改變：①生物活性喪失,②理化性質改變,包括：溶解度降低,結晶能力喪失,光學性質改變.③生物化學性質改變,分子結構伸展鬆散,易被蛋白酶分解.3.DNA分子二級結構有哪些特點?
兩條反相平行的多核苷酸鏈圍繞同一個中心軸互繞;形成核算的骨架,鹼基平面與軸垂直,糖環面則與軸平行.兩條鏈皆為右手螺旋,雙螺旋的直徑為2nm,鹼基堆積距離為0.34nm,兩核算之間的夾角A為36度,每隊螺旋由10對鹼基組成,鹼基按A=T,G≡C配對互補,彼此以氫鹼相聯系.維持DNA結構穩定的力量主要是鹼基堆積力,雙螺旋結構表面有兩條螺形凹溝,一大一小.
❺ 蛋白質變性及復性的常用方法有哪些
引起蛋白質變性的因素很多，物理因素有高溫、紫外線、X-射線、超聲波、高壓、劇烈的攪 拌、震盪等。化學因素有強酸、強鹼、尿素、胍鹽、去污劑、重金屬鹽（如 Hg2+、Ag+、Pb2+ 等）三氯乙酸，濃乙醇等。不同蛋白質對各種因素的敏感程度不同。 蛋白質變性後許多性質都發生了改變，主要有以下幾個方面：
（一）生物活性喪失 蛋白質的生物活性是指蛋白質所具有的酶、激素、毒素、抗原與抗體、血紅蛋白的載氧能力 等生物學功能。 生物活性喪失是蛋白質變性的主要特徵。 有時蛋白質的空間結構只有輕微變 化即可引起生物活性的喪失。
（二）某些理化性質的改變 蛋白質變性後理化性質發生改變， 如溶解度降低而產生沉澱， 因為有些原來在分子內部的疏 水基團由於結構鬆散而暴露出來,分子的不對稱性增加，因此粘度增加，擴散系數降低。
（三）生物化學性質的改變 蛋白質變性後，分子結構鬆散，不能形成結晶，易被蛋白酶水解。蛋白質的變性作用主要是 由於蛋白質分子內部的結構被破壞。 天然蛋白質的空間結構是通過氫鍵等次級鍵維持的， 而 變性後次級鍵被破壞， 蛋白質分子就從原來有序的捲曲的緊密結構變為無序的鬆散的伸展狀 結構（但一級結構並未改變）。所以，原來處於分子內部的疏水基團大量暴露在分子表面， 而親水基團在表面的分布則相對減少， 至使蛋白質顆粒不能與水相溶而失去水膜， 很容易引 起分子間相互碰撞而聚集沉澱。
復性：如果變性條件劇烈持久，蛋白質的變性是不可逆的。如果變性條件不劇烈，這種變性 作用是可逆的，說明蛋白質分子內部結構的變化不大。這時，如果除去變性因素，在適當條 件下變性蛋白質可恢復其天然構象和生物活性，這種現象稱為蛋白質的復性
❻ 蛋白質復性如果加還原劑的話需要加氧化劑嗎
蛋白質的復性
蛋白質復性的最大問題，是在復性過程中形成中間體和多聚體，中間體阻礙作用大的使蛋白質正確折疊困難，復性就困難；阻礙小或無阻礙的容易復性。降低蛋白濃度可以減少中間體形成提高復性率。減少中間體的形成，可選用添加小分子物質，又叫分子伴侶，如精氨酸、甘油、PEG等小分子物質幫助蛋白質正確折疊。避免多聚體的形成入氧化還原劑（DTT、szlig;－ME、還原型谷胱甘肽、氧化型谷胱甘肽、Cu2＋等），幫助蛋白質復性中二硫鍵的正確配對，減少錯配率。
復性緩沖液的pH要遠離等電點，離子強度不易過高，10－50mmol/L，離子強度太高蛋白質易發生沉澱，也不利於離子交換層析的分離；復性液溫度不易過高在4℃－10℃較合適對於耐熱蛋白也可以室溫復性。復性時間，以天然表達的重組蛋白復性應在6hr以上，需要進行酶切的融和表達重組蛋白，至少要復性1hr以上，方可進行進一步的酶切。
復性方式：常用的有透析復性和稀釋復性。透析復性適用於小樣品制備；對於大樣品制備，採用稀釋復性法簡便、實用。一般包含體蛋白的復性濃度不易過大，不同的蛋白質有所區別，一般掌握在100－200ug/ml較合適，蛋白濃度太稀使純化流程過長，蛋白濃度太濃，蛋白質復性不完全，會直接影響蛋白的回收率。直接稀釋有困難的，也可以試用分段稀釋法。
蛋白質的復性是重組蛋白純化中最關鍵和最復雜的問題。蛋白質的性質不同，所處的環境不同，使其復性條件大不相同。任何一個蛋白質都有一個最佳的復性條件，這個最佳條件的選擇是靠大量的實驗來完成的。只有選擇到了合適的復性緩沖液，使蛋白得以正確折疊，才能使進一步的層析分離得以順利完成。
❼ 蛋白質復性時 透析液 可以反復使用么
按道理是可以的，但是如果每次復性不同蛋白的話重復用會有污染
❽ 簡述蛋白質變性與復性的機理🙏
蛋白質變性是指蛋白質在某些物理和化學因素作用下其特定的空間構象被改變,從而導致版其理化性質的權改變和生物活性的喪失,這種現象稱為蛋白質變性。如果變性條件劇烈持久,蛋白質的變性是不可逆的.
如果變性條件不劇烈,這種變性作用是可逆的,說明蛋白質分子內部結構的變化不大.這時,如果除去變性因素,在適當條件下變性蛋白質可恢復其天然構象和生物活性,這種現象稱為蛋白質的復性。
（記得採納哦）
❾ 簡述蛋白質變性與復性的機理
蛋白質變性是指蛋白質在某些物理和化學因素作用下其特定的空間構象被改變內,從而導容致其理化性質的改變和生物活性的喪失,這種現象稱為蛋白質變性。如果變性條件劇烈持久,蛋白質的變性是不可逆的.
如果變性條件不劇烈,這種變性作用是可逆的,說明蛋白質分子內部結構的變化不大.這時,如果除去變性因素,在適當條件下變性蛋白質可恢復其天然構象和生物活性,這種現象稱為蛋白質的復性。
（記得採納哦）
❿ 什麼是蛋白質的復性和變性
變形好說復，就是蛋白質失去其制生理活性，加熱，紫外線照射，酸鹼等都可以是蛋白質變性。
復性一般是指蛋白質的鹽析現象，蛋白質在低濃度鹽溶液中溶解（一般至飽和），然後加入可溶性鹽類（無毒,一般是鈉鹽），然後蛋白質在鹽溶液中結晶析出，但加入水後，蛋白質又溶解。說明加入鹽只是使蛋白質在鹽溶液中溶解度降低，但仍保持其生理活性。還有一種現象，就是把冷卻後的蛋白質在回溫，其生理活性也不變。這也叫復性，總之就是蛋白質生理活性下降，但恢復條件其生理活性又恢復的現象就叫蛋白質的復性。