環氧樹脂包埋切片
① 哪些樹脂不能用於冷凍超薄切片,哪些樹脂適用於冷凍超薄切片,請舉例
哪些復樹脂不能用於冷凍超薄切製片,哪些樹脂適用於冷凍超薄切片,請舉例?
A:Epoxi不能用於冷凍超薄切片,Acrylate適用於冷凍超薄切片。
備注說明:Super Glue的成分是Cyan Acrylate,是預配好的,接觸空氣中的水分子,即可固化聚合;Acrylate樹脂需要另配,並在一定條件下才能聚合。
② 怎麼製作包埋劑
在製作切片或超薄切片時,由於組織是柔軟的,或局部的軟硬不均,這樣製作厚內薄均勻的切片是困難的。所容以有必要用一定物質浸透組織內部,使整個組織一樣硬化,以利於切成薄片,這種物質叫做包埋劑。一般用光學顯微鏡觀察的切片,用石蠟、火棉膠、炭蠟、明膠等作包埋劑;電子顯微鏡則用環氧樹脂、聚苯乙烯樹脂、異丁烯樹脂及水溶性樹脂。
③ 超薄切片技術操作過程是什麼
觀察病毒在細胞組織內的狀態,可採取超薄切片技術,將標本用固定液固定後,經過脫水滲透包埋聚合切片等過程,切成薄片然後染色檢鏡。
(1)固定。
常用的固定液主要有鋨酸固定液、醛固定液、高錳酸鹽固定液等。
①鋨酸固定液:這是最常用的固定液,作用迅速,新鮮的鋨酸呈淺黃色,其蒸氣極毒,使用時應在強通風櫃中把裝有鋨酸的安瓿瓶在緩沖液內敲碎。
②醛固定液:植物材料具有厚壁,鋨酸固定液不能很好滲透,有時固定得不好。而醛固定液往往可獲得較好效果,同時還不會破壞酶的活性,可以在切片上進行組織化學測定。常用的有甲醛固定液和戊二醛固定液。
③高錳酸鹽固定液:此種固定液可保持膜的結構,但破壞核糖體並失去酶的活性,對維持TMV粒子在細胞內的排列比戊二醛及鋨酸固定液好。
緩沖液可用1%液體鋨酸和1%過錳酸鉀,也可用磷酸鹽巴比妥-醋酸和二甲胂酸鹽緩沖液。固定可在0~5℃或室溫下進行,供試材料盡可能使用幼嫩的植株,小的根可整個固定,葉片需剪成1~2cm的小塊。葉中的空氣會阻止固定液與大部分細胞接觸,可在真空下把空氣除去。
組織固定後必須徹底沖洗,在進行鋨酸固定前要把多餘的醛用緩沖液沖洗徹底。固定後的組織一定要進行脫水,特別是採取不溶於水的樹脂包埋時,在室溫低於4℃時,丙酮或乙醇脫水效果都很好。
(2)包埋。
包埋用的樹脂可分為四類,即甲基丙烯酸酯、環氧樹脂、聚酯樹脂和各種水溶性化合物。
甲基丙烯酸酯在聚合過程中可能引起組織損傷,在電子束轟擊下,這種介質有升華的趨向,引起細微組織結構的破壞。但甲基丙烯酸酯也有優點,它比環氧樹脂能切出較大的切塊切面,切片也容易染色。
環氧樹脂和聚酯樹脂是保存細胞細微結構的最好包埋材料,目前最常用的環氧樹脂是Epon和Araldite,用它包埋的標本可避免聚合損傷,樹脂切片在電鏡下不升華,可使標本連續觀察,並保存細微結構。
水溶性樹脂劑對一些不希望用有機溶劑脫水,或利用組織切片做酶外處理試驗特別有用,其缺點是不能很好地保持細胞的細微結構。
組織需在包埋介質中充分滲透,常用的有兩種方法:
①環氧樹脂包埋組織的滲透。將丙醇脫水的組織轉到裝有6ml由等量丙酮和環氧樹脂的標本管中,將標本管放在烤箱內由傾斜45°角的馬達帶動的輪上,使其不斷轉動,丙酮由開口的管中蒸發,當丙酮味消失後,將組織在擦鏡紙上吸干,浸入新鮮的樹脂中,再於同一溫度下放4h,再一次吸干組織後,移到裝有新鮮樹脂的膠囊內,將Epon塊放在40℃下,直至完全變硬,並繼續在60℃下凝固12h。
②水溶性樹脂包埋組織的滲透。將組織在戊二醛中固定,在緩沖劑中沖洗1~12h,然後在80%GMA單體和20%的水中脫水20min,再於97%GMA單體和3%的水中繼續脫水20min後,在制備的聚合混合物中滲透過夜。將組織放在烘爐內的明膠膠囊中,注滿聚合混合物除去所有空氣泡,蓋好使其不使與空氣接觸,把膠囊用金屬絲垂直吊起,用長波長的紫外光聚合1~3d即可。
(3)切片。
切片前切去埋塊四周的樹脂,留下高2~3mm的標本正方柱,裝入切片機,使埋塊面的平行邊與刀口平行,把刀慢慢向標本推進,通過切片機上的目鏡系統,把刀推到看不到有間隙之處,每次推進0.5~1.0μm,直到切下切片。切片厚度以能達到浮於液面的切片呈灰色為最好。切片可用醋酸雙氧鈾和檸檬酸鉛進行染色。染色後的切片在0.1N氫氧化鈉中沖洗,然後用水沖洗。
④ 環氧樹脂包埋的樣品很軟,怎麼辦
環氧來樹脂包埋塊硬自度應該如何調節(環氧樹脂,包埋,電鏡,切片)
摘要: [環氧樹脂包埋塊硬度應該如何調節(環氧樹脂,包埋,電鏡,切片)] 只找到關於環氧樹脂在電鏡切片時的使用配方,但是,我不準備做電鏡,只想在一般的推拉式切片機上完成切片,按照電鏡的方法配置出來的包埋塊太硬了,顯然不適用於一般的刀片,現在我有做電鏡用的Durcupan ACM,主要成分包括環氧樹脂Epoxy resin,固化交聯劑(anhydride of a dicarboxylic acid with aliphatic side chain),催化劑(pheno 關鍵詞:[環氧樹脂 包埋 電鏡 切片 催化劑]……
⑤ 求助!甲基丙烯酸甲酯包埋的具體步驟!
首先復電鏡是用高能電子而不是制用光作為媒介因此只有灰,銀色和金色適合,其概念就不是染色了!常用超薄切片和冰凍蝕刻術。\r\n超薄切片:鋨酸固定 酒精脫水 甲基丙烯酸甲酯或環氧樹脂包埋 最後切片\r\n冰凍蝕刻術 利用快速冷凍標本 冰刀切割 再鉑炭升華
⑥ 切片後,發現包埋在樹脂中的樣品顆粒破碎,或整體脫落,怎麼辦
切片後發現包埋在樹脂中的樣品顆粒破碎或整體脫落,我們應該配合醫生積極的選擇手術的治療。
⑦ 包埋劑有什麼作用
在製作切片或超薄來切片時,由於源組織是柔軟的,或局部的軟硬不均,這樣製作厚薄均勻的切片是困難的。所以有必要用一定物質浸透組織內部,使整個組織一樣硬化,以利於切成薄片,這種物質叫做包埋劑。一般用光學顯微鏡觀察的切片,用石蠟、火棉膠、炭蠟、明膠等作包埋劑;電子顯微鏡則用環氧樹脂、聚苯乙烯樹脂、異丁烯樹脂及水溶性樹脂。
⑧ 多孔類或內部中空的樣品,用什麼樹脂包埋比較好
用低連稠度的樹脂,例如Spurr。並需要輔助抽真空去氣步驟,確保樹脂充分滲透
⑨ 什麼是環氧樹脂包埋
第一次聽說過!暈
⑩ 有哪些材料可以用作包埋劑
在製作切片或超薄切片時,由於組織是柔軟的,或局部的軟硬不均,這樣制專作厚薄均勻的切片是屬困難的。所以有必要用一定物質浸透組織內部,使整個組織一樣硬化,以利於切成薄片,這種物質叫做包埋劑。一般用光學顯微鏡觀察的切片,用石蠟、火棉膠、炭蠟、明膠等作包埋劑;電子顯微鏡則用環氧樹脂、聚苯乙烯樹脂、異丁烯樹脂及水溶性樹脂。