除垢劑分離的膜蛋白

㈠ 用什麼方法可以分離膜蛋白，如何獲得有功能活性的膜蛋白

Ⅰ、（1）根據題干信息，「膜蛋白A能加快水通過細胞膜，而HgCl2對膜蛋白A的功能有抑製作用」，則該實驗的自變數有2個：膜蛋白的有無、HgCl2的有無，因此實驗的對照處理如下： ①甲組：缺乏蛋白A的非洲爪蟾卵母細胞若干． ②乙組：生理狀況相同的等量缺乏蛋白A的非洲爪蟾卵母細胞+注入控制膜蛋白A合成的有活性的mRNA（有膜蛋白）． ③丙組：乙組+HgCl2溶液（有膜蛋白和HgCl2）．（2）實驗的因變數是細胞水通透速率，把各組卵母細胞放入非洲爪蟾卵母細胞低滲溶液中，一段時間後，利用細胞水通透速率測量裝置測量細胞水通透速率． Ⅱ．「膜蛋白A能加快水通過細胞膜，而HgCl2對膜蛋白A有抑製作用」實驗結果記錄表：實驗組號水通透速率甲組（無膜蛋白A）慢乙組（有膜蛋白A）快丙組（有膜蛋白和HgCl2）較慢 Ⅲ、實驗結果說明：水通過細胞膜的方式是被動運輸（或簡單擴散和易化擴散）．故答案為： Ⅰ．（1）乙組：生理狀況相同的等量缺乏蛋白A的非洲爪蟾卵母細胞+注入控制膜蛋白A合成的有活性的mRNA．丙組：乙組+HgCl2溶液． 2．非洲爪蟾卵母細胞低滲溶液 Ⅱ．「膜蛋白A能加快水通過細胞膜，而HgCl2對膜蛋白A有抑製作用」實驗結果記錄表實驗組號水通透速率甲組慢乙組快丙組較慢 Ⅲ．被動運輸（或簡單擴散和易化擴散）

㈡ 如何讓蛋白質從去垢劑中釋放

答：蛋白質失活的原因是去垢劑中的表面活性劑能夠通過包含蛋白質的半透膜,而其強鹼性離子能夠使蛋白質變性.
去垢劑(表面活性劑)是一類即具有親水基又具有疏水基的物質,一般具有乳化、分散、和增溶作用,可分陰離子、陽離子和中性去垢劑等多種類型,中性去垢劑在蛋白提取鍾應用的較多.
A．中性去垢劑 又稱非離子表面活性劑,對蛋白質的變性作用影響較少,宜於蛋白質或酶提取之用.一般市售中性去垢劑有聚乙二醇類,如PEG200；多元醇類表面活性劑,如山梨醇、司盤類和吐溫類；聚氧乙烯脂肪醇醚,如苄澤類、平平加類；聚氧乙烯烷基苯酚醚,如Igepal CO、乳化劑OP、Triton、Pluronic(用作消泡劑、潤濕劑、增溶劑)、泡敵.中性去垢劑作用後可通過Sephadex LH-50柱除去；也可直接上DEAE-Sephadex柱層析分離目的蛋白,不必先除去去垢劑.
B．陰離子去垢劑 常見的有十二烷基硫酸鈉和十二烷基璜酸鈉.前者可促進核蛋白的溶解,將核酸釋放出來,並對核酸酶有一定抑製作用,常用於核酸的提取.
C．陽離子去垢劑 如潔爾滅、新潔爾滅、CTAB、CPC、ZEPH、克菌定、消毒凈（TMPB）、杜滅芬等,消毒滅菌類居多.
D．天然表面活性劑 又稱為生物表面活性劑,包括種類較為廣泛,如各種樹膠（阿拉伯膠、杏膠、桃膠、果膠）、明膠、皂甙、卵磷脂、豆磷脂、瓊脂、海藻酸鈉、酪蛋白、膽甾醇、膽酸類、多糖類（如環糊精）等.
E．兩性表面活性劑 在鹼性水溶液中呈陰離子表面活性劑的性質,起泡性好,去污力也強；在酸性溶液中則呈現陽離子表面活性劑特徵,其殺菌性很強.
蛋白質變性劑的作用是破壞蛋白質的次級鍵,如氫鍵、鹽鍵和疏水力,引起天然構象的解體；它們並不破壞共價鍵,如肽鍵和二硫鍵,故不涉及一級結構的改變.變性劑有溶解型和沉澱型兩類,SDS、尿素和胍鹽是有效的溶解型變性劑,而三氯乙酸、甲醇、和氯仿/異戊醇是有效的沉澱變性劑.一般而言,變性劑應用時常大大過量,破壞氫鍵的變性劑用量至少兩倍於氨基酸的克分子數,如1克蛋白質可可結合1.4g.SDS溶於水可達25%,對溫度敏感,W/V貯存液最為方便.需要注意的是SDS的鉀鹽是不溶性的,所以SDS溶液中要避免混入鉀鹽.尿素極易溶於水,可達10mol/L,在8mol/L以上要注意溫度以防止沉澱.尿素在水中緩慢分解形成氨及高度活性的氰酸離子,故要防止高溫.三氯乙酸與過氯酸（TCA,PCA）都是極好的沉澱劑,能沉澱蛋白質和核酸,前者應用更為廣泛.

㈢ 膜蛋白去掉錨定點一定會分泌到細胞外嗎

膜蛋白去掉錨定點一定會分泌到細胞外
生物膜所含的蛋白叫膜蛋白，是生物膜功能的主要承擔者。 根據蛋白分離的難易及在膜中分布的位置，膜蛋白基本可分為三大類：外在膜蛋白或稱外周膜蛋白、內在膜蛋白或稱整合膜蛋白和脂錨定蛋白。
胞內蛋白是在細胞質游離的核糖體上合成的 不需要運輸到細胞膜外 只在細胞內起作用如呼吸酶等細胞生命活動必需的酶
細胞中有游離的核糖體和附著在內質網上的核糖體。游離的核糖體就是製造胞內蛋白的，這個不應經過內質網和高爾基體。附著的也可以造胞內蛋白，需要內質網，高爾基體（比如溶酶體的形成，就是由高爾基體以出芽方式產生的囊泡所形成的）。 其實胞內蛋白種類很多，不一樣的蛋白形成的方式可能不相同。

㈣ 如何看是否是跨膜蛋白

經過簡單離子濃度改變等因素就可以將蛋白質從膜上分離，且不破壞膜結構是外在蛋白。
經過去垢劑才能分離的蛋白質是跨膜蛋白，而且必須破壞膜結構才可以分離。
望採納。

㈤ 請問膜蛋白的類型有哪些 已解決

膜蛋白是膜功能的主要體現者。
（一）類型根據膜蛋白與脂分子的結合方式，可分為：
1、膜周邊蛋白（peripheral protein）：
靠離子鍵或其它較弱的鍵與膜表面結合
只要改變溶液的離子強度甚至提高溫度就可以從膜上分離下來

與膜的結合非常緊密，只有用去垢劑(detergent是一端親水一端疏水的兩性小分子) 才能從膜上洗滌下來，如離子型去垢劑SDS，非離子型去垢劑Triton-X100。

㈥ 總膜蛋白提取試劑盒的原理是什麼

外在膜蛋白為水溶性蛋白，靠離子鍵或其它較弱的鍵與膜表面的蛋白質分子或脂分子結合，因此只要改變溶液的離子強度甚至提高溫度就可以從膜上分離下來，膜結構並不被破壞。
內在膜蛋白與膜結合非常緊密，是嵌在膜中的，水溶性不好，基本方法就是用不同的離心速度去掉胞質蛋白等，然後用去污劑把蛋白從膜中釋放出來。膜蛋白分離純化的重要步驟是選擇適當的增溶用表面活性劑，一般常用的有膽酸鹽，CHAPS(一種離子去污劑），Emulgen和Lubrol等表面活性劑。 
有專門的試劑盒效果好一些

㈦ 膜蛋白有幾種

生物膜所含的蛋白叫膜蛋白,是生物膜功能的主要承擔者.根據蛋白分離的難易及在膜中分布的位置,膜蛋白基本可分為三大類：外在膜蛋白或稱外周膜蛋白、內在膜蛋白或稱整合膜蛋白和脂錨定蛋白.

㈧ 膜蛋白的功能

1、單純擴散：

脂溶性物質由膜的高濃度區一側向膜的低濃度區一側順濃度差跨膜的移動過程。順濃度差，不耗能；無需膜蛋白幫助；最終使轉運物質在膜兩側的濃度差消失。

2、易化擴散：

非脂溶性或脂溶性較小的物質在膜蛋白質的幫助下，由膜的高濃度一側向低濃度一側轉運的過程。

載體轉運——小分子親水物質。蛋白質有結構特異性；飽和現象；競爭性抑制。

3、轉運功能

通道轉運/門控轉運特點：相對特異性；飽和性；有開放、失活、關閉不同狀態。

主動轉運/泵轉運：由離子泵和轉運體膜蛋白介導的消耗能量、逆濃度梯度或點位梯度的跨膜轉運。分為原發性轉運和繼發性轉運。

(8)除垢劑分離的膜蛋白擴展閱讀：

膜蛋白在細胞中扮演著重要的角色：例如被熟知的識別、信號轉導、運輸等功能，也是用葯的理想的靶點，雖動物細胞主要有9種膜脂，而膜蛋白的種類繁多，多數膜蛋白分子數目較少，但卻賦予細胞膜非常重要的生物學功能。

根據膜蛋白分離的難易及其與脂分子的結合方式，膜蛋白可分為兩大類型：外在膜蛋白、內在膜蛋白。

1、外在膜蛋白為水溶性蛋白，靠離子鍵或其它較弱的鍵與膜表面的蛋白質分子或脂分子結合，因此只要改變溶液的離子強度甚至提高溫度就可以從膜上分離下來，膜結構並不被破壞。

2、內在膜蛋白與膜結合非常緊密，一般只有用去垢劑(detergent)使其膜解後才可分離出來。

㈨ 十二烷基磺酸鈉(SDS)和Triton X-100都是去垢劑，哪一種可用於分離有生物功能的膜蛋白

去垢劑可分為離子型和非離子型兩種。十二烷基磺酸鈉(SDS)是常用的離子型去垢劑，它不僅可使細胞膜崩潰，並與膜蛋白的疏水部分結合使其分離，而且還破壞膜蛋白內部的非共價鍵，使蛋白變性，所以不宜用於分離有功能的膜蛋白。Triton X-100是溫和性去垢劑，它可以使膜脂溶解，又不使蛋白變性，可分離到有生物功能的膜蛋白。

㈩ 膜蛋白為什麼能停留在膜上

（三）膜蛋白
動物細胞主要由9種膜脂，而膜蛋白的種類繁多，多數膜蛋白分子數目較少，但卻賦予]細胞膜非常重要的生物學功能。

1、類型

根據膜蛋白分離的難易程度及其與脂分子的結合方式，膜蛋白可以分為兩類：膜周邊蛋白（peripheral proteins）或稱外在膜蛋白(extrinsic proteins)和膜內在蛋白(integral proteins)或稱整合膜蛋白。

膜周邊蛋白為水溶性蛋白，靠離子鍵或其它較弱的鍵與膜表面的蛋白質分子或脂分子結合，因此只要改變溶液的離子強度甚至提高溫度就可以從膜上分離下來，膜結構並不被破壞。

膜內在蛋白與膜結合非常緊密，只有用去垢劑使膜崩解後才能分離出來。

2、膜內在蛋白與膜脂結合的方式

膜內在蛋白多數為跨膜蛋白（transmembrane proteins），也有些插入脂雙層中，它與膜結合的方式主要有三種：

（1）膜蛋白的跨膜結構域與脂雙層分子的疏水核心的相互作用。

（2）跨膜結構域兩端攜帶正電荷的氨基酸殘基，如精氨酸、賴氨酸等與磷脂分子帶負電的極性頭形成離子鍵，或帶負電的氨基酸殘基通過Ca2+、Mg2+等陽離子與帶負電的磷脂極性頭相互作用。

（3）某些膜蛋白在細胞質基質一側的半胱氨酸的殘基上共價結合脂肪酸分子，插入脂雙層之間，進一步加強膜蛋白與膜雙層的結合力，還有少數蛋白質與糖脂共價結合。