C18柱子跑了纯水

⑴ 高效液相色谱纯化蛋白质一般都用什么柱子

色谱柱在HPLC中是非常关键的部件.一台色谱仪如果没有色谱柱几乎什么工作也做不了.色谱柱是消耗品,有一定寿命,使用中也非常容易出问题.普通的正相反相色谱柱使用得当可用一、两年.使用不得当用两、三个月就可能损坏.所以使用中应该非常注意.
1.
在使用一根新的色谱柱之前,一定要看柱说明书,将柱子的使用压力、pH值、温度范围和所用流动相种类都要弄清楚.接触最多的是C18色谱柱,它对试剂应用的范围非常广,甲醇、水、乙腈、四氢呋喃、三氯甲烷、正乙烷、各种缓冲盐都适用.但其他的色谱柱所使用的试剂就有一定的要求,有的色谱柱只能使用水,不能使用有机试剂,有的色谱柱只能使用有机试剂,而且使用指定是某一种,象GPC色谱柱.这些事情一定搞清楚,如果流动相使用不对,柱子很快会损坏.另外在更换柱子时不能让不能使用的流动相进入柱子.
2.
柱子是有方向的,柱子上箭头的方向就是流动相流动的方向.当换新柱子时,不要马上就接到检测器上使用.将柱子入口处接在进样器的出口,柱子出口处（即箭头的一端）先不接检测器,按箭头方向垂直朝上,用流动相（甲醇）以1ml/min的流速冲洗1min左右.将柱子里的小气泡全部赶走以后再接到检测器上,否则小气泡跑到检测池里,就很难赶走,检测器产生噪声信号,基线也就走不好.
3.
关于压力对色谱柱的影响：常用的正反两相色谱柱一般耐压在12～20MPa之间,生产厂家不同,耐压也不同,从理论上讲耐压高的色谱柱柱效就高,但柱效高低不仅与耐压的高低有关,还有其他因素.从使用中看,在保证柱效的同时,耐压不要太高,仪器所显示的压力是流路、混合器、自动进样器、柱压、流通池总体的压力,检查柱压力应分段检查.压力过高不仅柱子受不了,其他的部件也会出问题,例如自动进样器.
4.
色谱柱对pH值是有一定的使用范围.以硅胶为担体的柱子一般使用范围在2～7pH.
耐碱性能不太好,流动相的pH大于8会使硅胶溶解.有些分析条件须用碱性流动相,这时一定要选耐碱性好的色谱柱,流动相的PH值过高或过低,流动相使用纯水,使用高浓度磷酸盐缓冲溶液,使用离子对试剂等,均可能造成色谱柱填料被化学破坏,这种对色谱柱固定相及键合相的破坏通常是不可修复的.
5.
色谱柱的使用温度不要超过说明书上规定的温度.一般使用温度在60℃以下,典型硅胶基质色谱柱的使用温度在5℃与60℃之间,高温使用会缩短柱寿命.
6.
色谱柱使用过程中压力的骤然波动,温度的骤然变化或机械撞击都会对色谱柱床产生影响.进样过程中,进样阀转动太慢引起压力波动；流速的突然增大都应在日常分析中尽量避免.一般说来,在低柱压下操作可大大减少由压力波动造成的柱效损失.这种问题是不可修复的
7.
色谱柱内存在缓冲盐时,如果用高浓度甲醇或其他有机溶剂冲洗色谱柱,会导致柱内缓冲盐结晶析出,造成柱压明显升高.出现该问题时,反相色谱柱首先应使用20%左右有机溶剂的水溶液低流速冲洗色谱柱,使柱内的盐全部溶解冲出,再换成高浓度甲醇或其他有机溶剂的流动相.
8.
样品的预处理,许多样品,特别是生物样品与中药材,其组分复杂,样品预处理是影响色谱柱寿命的关键.样品经过常规的前处理后,进样前还需进行以下步骤：a.用微孔过滤膜出除去样品中的不溶颗粒,以免赌塞柱头筛板及柱内填充床,使柱压升高.b.将样品用流动相溶解或用与流动相互溶的溶剂溶解.
9.
为了保护色谱柱,在色谱柱前接了一个保护柱.保护柱通常是比较短的分析柱,通过吸附可能污染分析柱的强保留杂质,达到保护色谱柱的目的.保护柱的筛板与在线过滤器一样可以阻挡微粒杂质.为了达到最好的保护效果同时避免导致色谱结果的改变,最好选用与分析柱相同或相似的填料填充保护柱.
10.
色谱柱用合适的溶剂保存,若为C18柱推荐用甲醇保存.在日常分析中,流动相含有的不纯物质和样品中的某些组分会吸附在色谱柱中,随着分析时间的延长,吸附量会越多,所以柱子要经常清洗,一般柱子使用一两个星期洗一次,柱子不同清洗的流动相就不同,C18柱子常用甲醇清洗,不要用水清洗这对柱子不好,一般清洗3～4小时,另外色谱柱长时间不用,存放时要将柱子洗干净,脏柱子放置时间越长,柱效会大大降低.存放时,柱内应充满溶剂（甲醇或乙腈）,两端封死.
近几年化验室用的液相色谱仪是越来越多,所用色谱柱的种类也越来越多,问题出的也较多,值得注意的是,不论怎样对色谱柱进行处理,一般都很难恢复到原有水平,因此,大家再使用色谱柱之前一定要看说明书,把以上几项问题搞清楚后再使用,尽量避免发生如上问题.

⑵ C18反相柱怎样才能冲得够干净

相C18色谱柱（即来憎水柱子）如果自用纯水冲洗后，如果立即停泵则由于其憎水（疏水）的缘故使得柱子内的水因而流失掉，长时间停泵使得柱子干掉（变干），会造成柱子内固定相填料表面键合的硅烷基结构塌陷（也说成是失去支撑倒下），柱子就这样报废了。

⑶ 怎样判断柱子进气泡了我用C18 4.6x250mm 5um 的柱子走样品，发现第二天甲醇跑干了，柱子会不会进气泡

我们用的HPLC是Agilent1100,1200,1220,如果流动相低于0.2L，泵会自动停，你的甲醇跑干了，柱子应该是进了回气泡的。判断答柱子进气泡的方法，你可以通过看柱压，如果只用流动相冲柱子，但是柱压很不稳定，那柱子就是进气泡了

⑷ 为什么普通C18色谱柱不能用纯水冲洗

容易引起疏水坍塌，把强保留物质冲出来，会毁了柱子的，所以水相不能超过95%，最开始的梯度淋洗也是高有机相到高水相，但是不是纯水相。

⑸ 在冲洗高效液相C18反相柱的时候，为什么不能用纯水

相C18色谱柱（即憎水柱子）如果用纯水冲洗后，如果立即停泵则由于其憎水（疏水）专的缘故使得柱子内属的水因而流失掉，长时间停泵使得柱子干掉（变干），会造成柱子内固定相填料表面键合的硅烷基结构塌陷（也说成是失去支撑倒下），柱子就这样报废了。那么一旦冲洗柱子用了纯水相怎么办呢？诶！不要惊慌，只要你不停泵，上述情况不会立即发生，我们只要保证最后用有机相冲洗柱子，停泵后使柱子内留存的是有机相，就无大碍，

⑹ 老师，我做液相的，昨晚Agilent XDB C18的柱子被我用水冲了40分钟，有什么解救方法

你好，咱们C18的柱子一般是不能走纯水的，40min水应该还不是很严重，你用纯甲回醇低流速答冲色谱柱2小时，进样一个以前走过的物质，看看柱效情况。如果不理想了，进一针二氯甲烷，再用甲醇冲。冲完后，在进样看看。

⑺ waters x bridge c18 能耐纯水吗

一般说来，衡量色谱柱的柱压高低主要以甲醇为流动相时的柱压为准。内不同的液相仪容柱压也略有差异。
你所提供的色谱柱，一般情况下，以甲醇为流动相，流速为1ml/min时，柱压在700-900psi，压差在50psi以下均为正常。
10%乙腈我没用过，30%乙腈的一般在1500psi左右，10%乙腈应该比它低。
纯水可能损坏色谱柱，纯乙腈可能堵塞单向阀，不建议使用上述流动相。

⑻ 我的液相C18反相柱，用纯乙腈冲洗的压力由开始的3、4MPa上升到现在的20几MPa，怎么回事急需解救！

如果你接其他的柱子没有问题的话，肯定是你的柱子之前的盐没有冲洗干版净导致盐结晶了权。盐用有机相是冲不掉的，只能用水冲，但是像这种反相柱不能用纯水冲，纯水会溶解硅胶，导致相坍塌。

你可以视情况改变有机相与水的比例来冲。一般可用5%的甲醇溶液小流速冲洗。 不行就反冲吧。

希望对你有帮助，望采纳！！

⑼ 液相色谱C18柱堵塞后如何冲洗柱子，能用纯水 冲柱子吗

C18柱子抄不能用纯水冲洗，再说本来就堵了，压力很高应该选择压力低的溶剂。
如果你确定是堵塞了，就用纯乙腈反冲，先用低一点的流速，比如01ml/min，看压力情况，不要超过200bar，再慢慢提高流速，但不要超过1.的流速，如果是真的堵了，可能会压力慢慢降下来的。
如果上面方法不行，那还有可能是盐析堵的，那就用乙腈：水=90：10反冲。

⑽ 求助求助，waters的柱子不小心用纯水冲了

你问的应该是反相色谱柱，因为凝胶过滤用纯水相是司空见惯的。
Agilent的专Bonus系列，Aichorm的Aqua系列，都是可以做纯属水相的。
但你如果只是考虑梯度起点的高水相比例，那就不必了，普通的C18、C8都可以用纯水相短时间冲洗，不超过10个柱体积，是没什么问题的。