茚三酮试剂纯水合茚三酮析还原态茚三酮
❶ 水合茚三酮试液与茚三酮试液一样吗
一水抄茚三酮为试剂。近似为白色结晶,或浅黄色结晶粉末,微溶于乙醚及三氯甲烷,100℃以上变为红色。
茚三酮试液是用茚三酮配制的溶液,可以有不同浓度。比如可以把2g茚三酮溶解于100mL乙醇中。水合茚三酮试液是用一水合茚三酮配制的试液。
配制相同浓度的试液两者所加的量不一样,其他的是一样的。
❷ 茚三酮显色机理是什么
茚三酮是一种用于检测氨或者一级胺和二级胺的试剂。当与这些游离胺反应时,能够产生深蓝色或者紫色的物质,叫做Ruhemann紫。
茚三酮常用来检测指纹,这是由于指纹表面所蜕落的蛋白质和肽中含有的赖氨酸残基,其上的一级胺被茚三酮检测。在室温条件下,它是一种白色的固体物质,溶于乙醇和丙酮。茚三酮可以看作是是二氢茚-1,2,3-三酮的水合物。
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应用领域
茚三酮可以用来监测固相肽合成中的脱保护作用(Kaiser测试)。肽链通过C端与固相基质连接,利用N端扩展肽链,当N脱保护后,茚三酮测试呈蓝色。
氨基酸残基是在N端被保护的情况下接入肽链的,因此如果下一个氨基酸残基成功的连接到肽链上,茚三酮测试会给出无色或者黄色的结果。
茚三酮也可以用于蛋白质的氨基酸分析。除去脯氨酸之外的大多数氨基酸,水解之后可与茚三酮反应。水解中某些氨基酸的侧链也会被降解。因此对于那些与茚三酮不反应或者发生其他反应的氨基酸需要另作分析。
其余的氨基酸经过色谱分离后可以比色定量。在分析化学反应的薄层色谱(TLC)中,它可以用于检测所有的胺类,氨基甲酸酯类,在经过充分热处理后可以检测酰胺类物质。
当茚三酮与氨基酸反应时可以释放CO2。二氧化碳中的碳原子来源于氨基酸的羧基碳。在考古研究中,这个反应用于释放古老骨骼中羧基碳用于稳定同位素分析,以帮助重现古代生物的食物结构。
❸ 茚三酮显色问题
我觉得楼上的解答有个不妥之处:楼主说明了过程,无论是反应前试样的处理还是反应后的测定,都是冷却了的。所以,温度这方面应该不会影响测定了。而楼主担心的氨基酸浓度过低这种假设可能也不会很大,因为茚三酮的显色反应检出下限很低,只要有几微克的氨基酸都能检测出来。
所以我分析可能有两个原因:
1,pH值的影响。楼主在实验中两次用到缓冲液调节pH=5.5,但是在最后显色的一步是在加热的状况下进行的。没有在反应过程中检测pH值的变化,导致颜色不是Ruhemann紫。而茚三酮与氨基酸作用得到的蓝紫色物质是一种铵盐。从结构上看,季铵和还原的酮的氧连在一起,这本来就是个亚稳定结构。季铵盐容易把H+给O得到一个羟基,所以很依赖pH的变化。那么你的溶液不停变化吸光度就能解释了,是由于Ruhemann紫因pH不适不断释放NH3或NH4+的结果。这个情况一般是由于pH值过大引起的。
2,没有反应完全。在进行样品沉降时其实很有可能残留了许多蛋白质和多肽。多肽和蛋白质也能形成这个反应,但是肽越大反应就越不灵敏。所以有可能是第三产物,中间得到的醛可能会影响了这个反应,可能会生成其他带有颜色的副产物干扰紫色的呈现。但是在逐渐反应后,醛由于大基团逐渐分解对反应的影响越来越小,这个干扰也就变小了,实际的紫色浓度自然比原来要弱许多。
以上只是个人推测,没有依据。建议你用其它方法测定,比如用茚三酮作显色剂的纸层析色谱,不仅可以计算总量,还可以初步估计氨基酸种数。
❹ 为什么氨基酸与茚三酮反应要在酸性的条件下,还得要沸水浴加热 谢谢咯
因为这个反应鉴定氨基酸的实质是,还原性的茚三酮与氨还有一分子水合茚三酮反应,缩合内成蓝紫色物质,这容个反应需要弱酸性的条件,因此需要酸。
这里面,氨从氨基酸里来。但氨基酸常温下相对稳定,试验需要还原性的茚三酮,而一般溶剂中都是水合茚三酮,这都需要加热,使它们活化。
主要反应分为两步 :
第一步 氨基酸 + 弱酸→ 水合茚三酮 + 二氧化碳 + 醛类 + 氨气
第二步 两个水合茚三酮 + 氨→ 还原性茚三酮 (蓝紫色)
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应用:
此反应十分灵敏,根据反应所生成的蓝紫色的深浅,用分光光度计在570nm波长下进行比色就可测定样品中氨基酸的含量(在一定浓度范围内,显色溶液的吸光率与氨基酸的含量成正比)。
也可以在分离氨基酸时作为显色剂对氨基酸进行定性或定量分析。在法医学上,使用茚三酮反应可采集嫌疑犯在犯罪现场留下来的指纹。因为手汗中含有多种氨基酸,遇茚三酮后起显色反应。
❺ 茚三酮与甘氨酸反应,然后烘干颜色变化的原因
氨基酸的α-NH2所引起的反应。α-氨基酸与水合茚三酮一起在水溶液中加热,可发生反应生成蓝紫色物质。首先是氨基酸被氧化分解,放出氨和二氧化碳,氨基酸生成醛,水合茚三酮则生成还原型茚三酮。在弱酸性溶液中,还原型茚三酮、氨和另一分子茚三酮反应,缩合生成蓝紫色物质。
所有氨基酸及具有游离α-氨基的肽都产生蓝紫色,但脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应产生黄色物质,因其α-氨基被取代,所以产生不同的衍生物。
此反应十分灵敏,根据反应所生成的蓝紫色的深浅,在570nm波长下进行比色就可测定样品中氨基酸的含量。也可在分离氨基酸时作为显色剂定性、定量地测定氨基酸。
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除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应生成黄色物质外,所有的α-氨基酸及一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质。该反应分两步进行,首先是氨基酸被氧化,产生 CO2 、NH3和醛,而水合茚三酮被还原成还原型茚三酮。
第二步是所生成之还原型茚三酮与另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成有色物质。此反应的适宜pH为5~7,同一浓度的蛋白质或氨基酸在不同pH条件下的颜色深浅不同,酸度过大时甚至不显色。
该反应十分灵敏,1:1 500 000浓度的氨基酸水溶液即能显示反应,因此是一种常用的氨基酸定量方法。但也有些物质对茚三酮也呈类似的阳性反应,如β-丙氨酸、氨和许多一级胺化合物等。所以定性或定量测定中,应严防干扰物存在。
主要反应分为两步 :
第一步 氨基酸 + 弱酸→ 水合茚三酮 + 二氧化碳 + 醛类 + 氨气。
第二步 两个水合茚三酮 + 氨→ 还原性茚三酮 (蓝紫色)。
❻ 氨基酸和茚三酮的显色反应 会有三种不同颜色的原因
茚三酮反应分为两步,第一步是氨基酸被氧化形成 CO2、NH3 和醛,水合茚三酮被回还原成还原型茚三酮;第二步是答所形成的还原型茚三酮同另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成有色物质。
大多数氨基酸反应形成蓝紫色产物,
谷氨酰胺和天冬酰胺与茚三酮反应则形成棕色产物。
而脯氨酸则与茚三酮反应则形成黄色产物
大多数氨基酸的α-氨基与茚三酮反应生成蓝紫色产物
而谷氨酰胺和天冬酰胺则因为另外含一个酰胺基可与茚三酮反应,生成棕色产物
最后脯氨酸则是因为脯氨酸与一般α-氨基酸不同,没有自由的α-氨基.,其α-氨基是亚氨基
❼ 茚三酮是否可用于氨基酸和蛋白质的定性鉴定
可以的,茚三酮也可以用于蛋白质的氨基酸分析。除去脯氨酸之外的大多数氨基酸,水解之后可与茚三酮反应。水解中某些氨基酸的侧链也会被降解。因此对于那些与茚三酮不反应或者发生其他反应的氨基酸需要另作分析。
其余的氨基酸经过色谱分离后可以比色定量。在分析化学反应的薄层色谱(TLC)中,它可以用于检测所有的胺类,氨基甲酸酯类,在经过充分热处理后可以检测酰胺类物质。
当茚三酮与氨基酸反应时可以释放CO2。二氧化碳中的碳原子来源于氨基酸的羧基碳。在考古研究中,这个反应用于释放古老骨骼中羧基碳用于稳定同位素分析,以帮助重现古代生物的食物结构。
用一种标记底物处理的土壤,随后利用茚三酮与氨基酸的反应释放羧基胺,可以证明这种底物是否被吸收进微生物蛋白质。这种方法成功的发现了一些氨氧化细菌(也叫做硝化细菌)利用土壤中的尿素作为碳源。
法医常用茚三酮溶液分析诸如纸张等多孔表面上的潜指纹。手指所分泌的细微汗液聚集于独特的手指纹路表面,也即含有氨基酸的指纹,经过茚三酮处理可以将氨基酸指尖纹路变为可见的紫色。
(7)茚三酮试剂纯水合茚三酮析还原态茚三酮扩展阅读
反应机理
除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应生成黄色物质外,所有的α-氨基酸及一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质。
该反应分两步进行,首先是氨基酸被氧化,产生 CO2 、NH3和醛,而水合茚三酮被还原成还原型茚三酮;第二步是所生成之还原型茚三酮与另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成有色物质。此反应的适宜pH为5~7,同一浓度的蛋白质或氨基酸在不同pH条件下的颜色深浅不同,酸度过大时甚至不显色。
该反应十分灵敏,1:1 500 000浓度的氨基酸水溶液即能显示反应,因此是一种常用的氨基酸定量方法。但也有些物质对茚三酮也呈类似的阳性反应,如β-丙氨酸、氨和许多一级胺化合物等。所以定性或定量测定中,应严防干扰物存在。
主要反应过程:
首先茚三酮水合物和氨基反应,失去二分子水,然后失羧,生成亚胺,水解后得到氨基茚二酮,再和一分子茚三酮水合物失水,然后互变异构,即得到紫色的化合物。
参考资料来源:网络-茚三酮反应
参考资料来源:网络-茚三酮
❽ 茚三酮反应在溶液中为何是先粉红色再紫红色最后变蓝色
反应机理显色反应方法反应应用茚三酮显色反应的影响因素分析
茚三酮反应
氨基酸的α-NH2所引起的反应。α-氨基酸与水合茚三酮一起在水溶液中加热,可发生反应生成蓝紫色物质。首先是氨基酸被氧化分解,放出氨和二氧化碳,氨基酸生成醛,水合茚三酮则生成还原型茚三酮。在弱酸性溶液中,还原型茚三酮、氨和另一分子茚三酮反应,缩合生成蓝紫色物质。 所有氨基酸及具有游离α-氨基的肽都产生蓝紫色,但脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应产生黄色物质,因其α-氨基被取代,所以产生不同的衍生物。此反应十分灵敏,根据反应所生成的蓝紫色的深浅,在570nm波长下进行比色就可测定样品中氨基酸的含量。也可在分离氨基酸时作为显色剂定性、定量地测定氨基酸。
此反应十分灵敏,根据反应所生成的蓝紫色的深浅,用分光光度计在570nm波长下进行比色就可测定样品中氨基酸的含量(在一定浓度范围内,显色溶液的吸光率与氨基酸的含量成正比),也可以在分离氨基酸时作为显色剂对氨基酸进行定性或定量分析。在法医学上,使用茚三酮反应可采集嫌疑犯在犯罪现场留下来的指纹。因为手汗中含有多种氨基酸,遇茚三酮后起显色反应。
除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应生成黄色物质外,所有的α-氨基酸及一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质。该反应分两步进行,首先是氨基酸被氧化,产生 CO2 、NH3和醛,而水合茚三酮被还原成还原型茚三酮;第二步是所生成之还原型茚三酮与另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成有色物质。此反应的适宜pH为5~7,同一浓度的蛋白质或氨基酸在不同pH条件下的颜色深浅不同,酸度过大时甚至不显色。该反应十分灵敏,1:1 500 000浓度的氨基酸水溶液即能显示反应,因此是一种常用的氨基酸定量方法。
❾ 茚三酮乙醇溶液和茚三酮丙酮溶液的区别是什么啊,有什么使用范围
茚三酮丙酮溶液:茚三酮1—5克,丙酮100毫升。
茚三酮乙醇溶液:茚三酮1—5克,乙醇100毫升。
使用范围:
茚三酮可以用来监测固相肽合成中的脱保护作用(Kaiser测试)。肽链通过C端与固相基质连接,利用N端扩展肽链,当N脱保护后,茚三酮测试呈蓝色。氨基酸残基是在N端被保护的情况下接入肽链的,因此如果下一个氨基酸残基成功的连接到肽链上,茚三酮测试会给出无色或者黄色的结果。
茚三酮也可以用于蛋白质的氨基酸分析。除去脯氨酸之外的大多数氨基酸,水解之后可与茚三酮反应。水解中某些氨基酸的侧链也会被降解。因此对于那些与茚三酮不反应或者发生其他反应的氨基酸需要另作分析。其余的氨基酸经过色谱分离后可以比色定量。在分析化学反应的薄层色谱(TLC)中,它可以用于检测所有的胺类,氨基甲酸酯类,在经过充分热处理后可以检测酰胺类物质。
当茚三酮与氨基酸反应时可以释放CO2。二氧化碳中的碳原子来源于氨基酸的羧基碳。在考古研究中,这个反应用于释放古老骨骼中羧基碳用于稳定同位素分析,以帮助重现古代生物的食物结构。用一种标记底物处理的土壤,随后利用茚三酮与氨基酸的反应释放羧基胺,可以证明这种底物是否被吸收进微生物蛋白质。这种方法成功的发现了一些氨氧化细菌(也叫做硝化细菌)利用土壤中的尿素作为碳源[4]。法医常用茚三酮溶液分析诸如纸张等多孔表面上的潜指纹。手指所分泌的细微汗液聚集于独特的手指纹路表面,也即含有氨基酸的指纹,经过茚三酮处理可以将氨基酸指尖纹路变为可见的紫色
❿ 水合茚三酮与茚三酮有什么不同
茚三酮(ninhydrin)各种氨基酸和多肽和它在弱酸性溶液中加热,发生氨基酸氧化,版脱氨,和权脱羧反映,然后茚三酮与反映产物——氨和还原性茚三酮反映,最终生成蓝紫色化合物
还原性茚三酮就是连2个羟基的那个碳上其中一个羟基变成氢