蛋白超滤管
① 取50ul国产Bradford溶液 ，加入10ul流穿，看有没变蓝色，以此判断超滤管是否漏掉蛋白.
先回答你的问题：
Bradford溶液现在自己配也行（其实就是考马斯亮蓝溶液），不过买商品化的也很多，可以买Bradford蛋白定量试剂盒之类的东西。可以用这个试剂检测溶液中蛋白的浓度。如果要自己配，可以参考：http://..com/link?url=7UwTia_b3FPpAaia
在用超滤管的时候，保留在上方的是所需蛋白样品，超滤膜下方收集到的溶液就是流穿液。
这个意思应该是说，如果超滤完全保留蛋白，流穿液中理论是没有蛋白的，所以加入bradford溶液（棕红色）是不应该引起溶液变色的。但是如果有蛋白，会与Bradford溶液反应，变成蓝色。但是也有问题，超滤膜只能保留一定分子量以上的蛋白，如果截留分子量比较大，例如30K或者更大，有一些小的蛋白还是会进到流穿液的，会产生变色反应，而且肉眼观察变色，也没有办法给出具体蛋白的量，可能还是用仪器检测一下比较好。
② 蛋白分子量为45KD应选用截留分子量30kd的超滤管合适吗
超滤膜上标的10KD、30KD都是指截留率.单位越大,超滤得到的物质分子也越大.
③ 蛋白用超滤管浓缩容易沉淀怎么办
可能是这个蛋白的水溶性较差，也就是只能保持在一定浓度不能太高
另外就内和这个蛋白容的稳定性有关了，超滤时保持低温，体积缩小一点后就把滤液混匀避免局部浓度过高，选择更合适的缓冲液，添加一点甘油等小分子物质等都可以增加蛋白的稳定性。
④ 蛋白纯化过程中，超滤能除咪唑吗
您好！可以的，但是超滤除的不是很干净，用分子筛干净些。
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⑤ 超滤离心管怎么使用
蛋白浓缩和换Buffer通常使用的超滤管，常用Millipore的Amicon-Ultra-15超滤管（MWCO10kD）。也有其它型号的、不同体积大小和MWCO超滤管可选，视目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩目标体积而定。可重复使用。
1、选择合适的超滤管，主要考虑MWCO和浓缩体积，通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量为35kDa，就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右，则可以用截留分子量3kD的超滤管。
2、新买来的超滤是干燥的，使用前加入MilliQ水，水量完全过膜，冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超过管顶的白线为准。操作要轻，加入蛋白液前，超滤管需要插在冰上预冷。
3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快，否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤（离心机预冷至4度）。膜与转轴的方向根据说明书调整（角转离心机的情况是膜与轴垂直）。在实际使用中，一般转速开的比说明书里的要低，这样可以延长离心管的使用寿命。
4、当浓缩到剩下1ml时，【取50ul国产Bradford溶液，加入10ul流穿，看有没变蓝色，以此判断超滤管是否漏掉蛋白。如果管漏了，将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。要精确判断是否漏管，用5mg/ml的BSA离心10min，再取流穿，跑蛋白胶或Bradford粗测】，继续加入剩下的蛋白液浓缩（在冰上操作，防止蛋白受热），直到所有浓缩液都加完为止。离心过程中注意是否发生蛋白沉淀，导致堵管。若发生沉淀，要确定沉淀的具体原因，是蛋白浓度过高还是Buffer不合适；前者可用多根超滤管同时超滤，降低浓度的办法解决，后者的方法是换不同的Buffer，直到蛋白不发生沉淀为止。
5、前面几步用以浓缩蛋白，如果要换Buffer，在总蛋白液浓缩至1ml左右的时候，轻轻加入新的Buffer（经0.22um超滤膜超滤），再浓缩至1ml左右，连续三次，最后一次的浓缩终体积根据需要的蛋白浓度而定，一般不多于500ul，也有浓缩至200ul以内的情况。按照每次至少10倍左右的体积浓缩算，三次达到1000倍以上，基本上可以达到换buffer的目的。
6、取出最终蛋白浓缩液的操作在冰上操作，用黄枪头（200ul）取，轻轻顺着边缘插入枪头，轻轻吹打、混匀蛋白液，注意不要碰到超滤膜，然后吸取浓缩液，每次吸接近200ul，直到吸完。管底剩下的最后一点浓缩液不必吸取，否则难度太大，有可能损坏超滤膜。最后加入MilliQ水到超滤管中，没过超滤膜，防止膜失水变干。
7、以下是处理超滤管，重复利用超滤管的步骤。
8、倒出超滤管里的水，用milliQ水轻轻润洗几次，【若管底有可见的蛋白沉淀，可以先加入水，然后用枪头吹打，注意不要碰到膜，吹打至沉淀悬起，然后倒掉，不可用自来水猛冲】然后加入0.2M的NaOH溶液，室温放置20min，期间平衡超滤管。再离心10min。倒出残留的NaOH溶液，将管芯浸入MilliQ水的烧杯(1或2L)中,放置几个小时,再换新的水,放置几个小时，不断稀释NaOH浓度。50ml管和盖子用自来水洗，内壁再用MilliQ水洗干净。
9、取出浸没的管芯，加至接近满的MilliQ水，50ml管也加满MilliQ水，将管芯慢慢放入50ml
离心管，排出部分水，然后盖上盖子，放4度保存，直到下次使用。一般来说，按照上述步骤和注意事项，每根管用三四年不会坏。
⑥ 同一个超滤浓缩管可以用来纯化不同的蛋白吗
不可以的
不管是哪个公司生产超滤浓缩管使用后都会有蛋白残留在滤膜上，而不管是使用氯版化钠或者氢氧权化钠清洗都不能确保可以完全清理掉残留在膜上的蛋白。
如果不同的蛋白间混合使用，可能前一个蛋白会污染到后一个蛋白，甚至有些某些高活性的酶残留在上面会造成后一个蛋白被酶切降解，造成不必要的损失。
⑦ 蛋白分子量为45KD应选用截留分子量30kd的超滤管合适吗
3KD指的是截留分子量截留分子量（MWCO:molecularweightcutoff）是使用分子量大小表示的超滤内膜的截留性能，又称作容切割分子量。由于直接测定超滤膜的孔径相当困难，所以使用已知分子量的球状物质进行测定。如膜对被截留物质的截留率大于90%时，就用被截留物质的分子量表示膜的截留性能，称为膜的截留分子量。实际上，所使用的物质并非绝对的球形，由于试验条件的限制，所测定的截留率也有一定的误差，所以截留分子量不能绝对表示膜的分离性能。也就是说3KD分子量的产品有可能透过膜也有可能被膜拦截，一般来说希望3KD的产品全部透过，需要选择截留分子量更大的膜，比如5KD
⑧ 蛋白大小为27.8kd，应该用多大的超滤管截流
3KD指的是来截留分子量
截留分子量（自MWCO:molecular weight cutoff）是使用分子量大小表示的超滤膜的截留性能，又称作切割分子量。
由于直接测定超滤膜的孔径相当困难，所以使用已知分子量的球状物质进行测定。如膜对被截留物质的截留率大于90%时，就用被截留物质的分子量表示膜的截留性能，称为膜的截留分子量。实际上，所使用的物质并非绝对的球形，由于试验条件的限制，所测定的截留率也有一定的误差，所以截留分子量不能绝对表示膜的分离性能。也就是说3KD分子量的产品有可能透过膜也有可能被膜拦截，一般来说希望3KD的产品全部透过，需要选择截留分子量更大的膜，比如5KD
⑨ 蛋白在超滤管浓缩过程中出现沉淀怎么办
1、选择合适的超滤管，主要考虑MWCO和浓缩体积，最常见的是Ultra-15（10kD）。
通常应截留分子量不应专大于目的蛋属白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量为35kDa，就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。
若目的蛋白分子量为10kD左右，则可以用截留分子量3kD的超滤管。认真阅读使用说明书，注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同，表格中有。
2、新买来的超滤是干燥的，使用前加入MilliQ水，水量完全过膜，冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超过管顶的白线为准。操作要轻，加入蛋白液前，超滤管需要插在冰上预冷。
3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快，否则直接损坏超滤膜。
注意，一定要等离心机达到目的转速之后，方可离开
离心机，否则离心机出问题时，无法第一时间处理，后果不可预测！膜与转轴的方向根据说明书调整（角转离心机的情况是膜与轴垂直）。在实际使用中，一般转速开的比说明书里的要低，这样可以延长离心管的使用寿命。
⑩ 超滤蛋白 咪唑浓度在多少一下可以了
超滤蛋白不需要考虑咪唑的浓度
咪唑是小分子试剂，分子量68.07，正常的超专滤管截留分子量一属般都是3KD~10KD
咪唑这样的小分子会直接透过滤膜进入到下层滤出液中，而蛋白会被留在上层溶液中
超滤蛋白如果不添加溶液，咪唑浓度是不会改变的，只会是提高蛋白的浓度
所以超滤蛋白不需要去考虑咪唑的浓度