超滤过后蛋白含量变化
『壹』 浓缩前蛋白浓度很高,浓缩后却没有多少改变是怎么回事
丙酮浓缩，tca浓缩，硫酸铵浓缩蛋白哪个比较好
我以前提的蛋白用的是TCA-丙酮内法,可是跑了好几次,电压都升不上容去,谷友们说可能是盐离子浓度过高,但是我用超滤的方法试了,电压还是升不上去,我只有重提蛋白,（我还是想用TCA-丙酮法）但我不知大家在用TCA-丙酮法提取蛋白时,在作等电聚焦前是不是都有一个除盐过程呀.（如超滤,透析）
不知大家用这种方法提的怎样,效果如何?希望给一点建议我用的是丙酮沉淀法,8000,10000都能在设定的程序时间内达到.
有资料说丙酮沉淀丢失低丰度蛋白,但是我胶片上低丰度蛋白还是有一些点,我估计丙酮沉淀后蛋白损失在30%左右.
『贰』 蛋白质水解后的蛋白质含量会如何变化
蛋白质水解后生成多肽或氨基酸，蛋白如果水解了，就不应该称其为蛋白质了。所以专溶解在水里的大豆蛋属白如果水解了，蛋白质的含量自然是下降了。蛋白质中氮的平均含量是一定的，所以可以根据测定N的含量，来推测蛋白的含量，这种方法叫凯氏定氮方法。凯氏定氮法只能测定N的含量，根据N的含量计算溶液中蛋白质的含量，但凯氏定氮法中无法得知溶液中蛋白质是否水解。
『叁』 超滤浓缩蛋白溶液时其浓度该从高到低还是有低到高对超滤膜好呢
从低到高,当然首先3瓶中蛋白分子量应该差不多,否则先超滤小分子的,主要是减少超滤膜的堵塞程度
『肆』 蛋白纯化后浓度太低怎么办
蛋白纯化后浓度太低怎么办
提高SDS-PAGE的上样量 将蛋白样品超滤浓缩几倍提高浓度 WB压片时间稍微延长一点
『伍』 蛋白质水解后的蛋白质含量会如何变化
蛋白质水解后生成多肽或氨基酸，蛋白如果水解了，就不应该称其为蛋白质了。所以溶解在水里的大豆蛋白如果水解了，蛋白质的含量自然是下降了。蛋白质中氮的平均含量是一定的，所以可以根据测定N的含量，来推测蛋白的含量，这种方法叫凯氏定氮方法。凯氏定氮法只能测定N的含量，根据N的含量计算溶液中蛋白质的含量，但凯氏定氮法中无法得知溶液中蛋白质是否水解。
『陆』 蛋白质冻融后蛋白质含量变高是什么原因
蛋白质冻融后蛋白质含量变高，这个最大的可能原因就是冻融的回过程中蛋白溶液的溶剂有答所减少，造成蛋白浓度提高。所以冻融后蛋白质含量变高。
另外一种可能就是冻融前后检测的蛋白含量并不准确，要么是冻融前检测偏低，要么是冻融后检测偏高。造成了蛋白质冻融后蛋白质含量变高
『柒』 蛋白透析复性后，调pH变浑浊，蛋白会有影响吗
问错地方了。这么专业的生物知识，最好去搜索文献。关于包涵体的文献太多了。基本上做蛋白的都有涉及。 不要在这问，自己多一些文献，比这里的回答强的多。
简单找了点。
对于尿素和盐酸胍该怎么选择?
尿素和盐酸胍属中强度变性剂，易经透析和超滤除去。它们对包涵体氢键有较强的可逆性变性作用，所需浓度尿素8-10M，盐酸胍6-8M。尿素溶解包涵体较盐酸胍慢而弱，溶解度为70-90%，尿素在作用时间较长或温度较高时会裂解形成氰酸盐，对重组蛋白质的氨基进行共价修饰，但用尿素溶解具有不电离，呈中性，成本低，蛋白质复性后除去不会造成大量蛋白质沉淀以及溶解的包涵体可选用多种色谱法纯化等优点，故目前已被广泛采用。
盐酸胍溶解能力达95%以上，且溶解作用快而不造成重组蛋白质的共价修饰。但它也有成本高、在酸性条件下易产生沉淀、复性后除去可能造成大量蛋白质沉淀和对蛋白质离子交换色谱有干扰等缺点。
2. 怎样洗涤包涵体？
通常的洗涤方法一般是洗不干净的，可以先把包涵体用6M盐酸胍溶解充分，过滤除去未溶解的物质，注意留样跑电泳，然后用水稀释到4M,离心把沉淀和上清分别跑电泳，如此类推可以一直稀释到合适的浓度，可以找到一个合适去除杂质的办法，其实这就是梯度沉淀的方法，比通常的直接洗脱效果好。
3. 8M尿素溶解的包涵体溶液应如何保存?
在4度放置半个月，都没什么问题 。在室温放置超过48小时，可能会对目的蛋白有影响，因为尿素在碱性条件下可使一些氨基酸酰基化，所以早些处理BI溶液比较好。
4. 包涵体复性有什么原则？
低浓度，平缓梯度，低温。
5. 复性时的蛋白浓度是？
一般使用浓度为0.1-1mg/ml，太高的浓度容易形成聚体沉淀，太低的浓度不经济，而且很多蛋白在低浓度时不稳定，很容易变性。
6. 复性中蛋白析出是怎么回事？该怎么处理？
出现蛋白析出，肯定是条件变化太剧烈了。复性应该采取复性液浓度和PH值逐渐变化的方法，例如根据包涵体的溶液成分，每隔1个PH或浓度值配置一种溶液，逐步透析到正常。此外透析时必须浓度极低，条件温和，使蛋白质能够正确折叠。但是复性的比率应该很低。
若加变性剂尿素可加到2M，盐酸胍可加到1-1.5M；
另外可将甘油浓度增加，范围可在≤30%，且在复性样品中也可加适量甘油。
『捌』 超滤蛋白 咪唑浓度在多少一下可以了
超滤蛋白不需要考虑咪唑的浓度
咪唑是小分子试剂，分子量68.07，正常的超专滤管截留分子量一属般都是3KD~10KD
咪唑这样的小分子会直接透过滤膜进入到下层滤出液中，而蛋白会被留在上层溶液中
超滤蛋白如果不添加溶液，咪唑浓度是不会改变的，只会是提高蛋白的浓度
所以超滤蛋白不需要去考虑咪唑的浓度
『玖』 请问用Vivaspin超滤完蛋白质水解液之后应该怎么处理才能恢复其超滤能力（其中的超滤膜不能更换）
很难,一般蛋白多肽类物质可以用1N NAOH处理,不过VIVASPIN的外壳是聚碳酸酯材料,对极性酸碱都不耐受,不过还是欢迎你来电探讨这个问题,我们上海摩速科学器材有限公司是SARTORIUS产品的一级代理021-56902220,VIVASPIN是SARTORIUS的超滤离心管
『拾』 超滤后得到的两个样品短肽含量和蛋白质含量差异很大，该怎么解释
本身就是大分子蛋白全过不来的 只有短肽过来
凯氏定氮法 测的氮元素 就把短肽也都当蛋白质算了
双缩脲法检 测的有肽键物质 比色估测 也是分不出短肽和蛋白质的
鄙人孤陋寡闻 或者题目有点问题