离心过滤实验
㈠ 蛋白质提取实验,加入提取液震荡,过滤,离心后,待测液能否放置一段
植物组织蛋白质提取方法
1、根据样品重量(1g样品加入3.5ml提取液,可根据材料不同适专当加入),准备属提取液放在冰上。
2、把样品放在研钵中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上静置(3-4小时)。
3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃
4、提取上清液,样品制备完成。
㈡ 要使悬浊液尽快地澄清,除了离心还有哪些办法
要想让悬浊液尽快的澄清,除了离心以外,我觉得添加絮凝剂是一个比较好的办法,另外,如果你对杂质没有需求的话,可以通过反复过滤的方式将浊液澄清,同时你也可以在其中加入一定的化学物质,例如说强酸和强碱,将其中的杂质分解掉,再或者通过蒸馏的方法也能得到澄清的液体。
另外,我觉得离心也是一个比较好的办法,如果你身边正好有离心的仪器,这样不仅能够迅速的分离浊液,而且分离出的液体也比较纯净。
总而言之,能够分离悬浊液的方法有很多,但是具体情况还是要看你对悬浊液的需求如何?比如说在进行矿泉水的净化时,对于我们个人来说,还是比较推荐通过蒸馏的方式进行净化,这样得到的水分也比较干净纯粹,但是对于企业,他们一般都会对其加入一些絮凝剂进行净化,另外我觉得对于离心应该更多的用于化工实验上面,在日常生活中,我们更多见到的一般都是进行过滤,因为过滤相对的比较简单方便,而且我们对过滤出的液体并没有太多的要求,只是简单的希望它更干净一点。
以上便是我想到的一些办法,具体的解决方法还是要看你面临的情况。
㈢ 实验室常用固液分离的方法及注意事项
最常用的就是过滤,也会用到沉淀后吸取上清夜的方法。
过滤常用的工具有漏版斗,在漏斗中放入权过滤材料,然后把需要分离的固液混合物倒入漏斗即可。
过滤材料有滤纸、棉花、纱布等,滤纸又分为快速、中速、慢速滤纸。
选用哪种材料过滤取决于实验对滤夜的澄清度、杂质度的要求.必要时,可以多次过滤。
从废水中除去固体一般采用筛或沉淀方法。污泥处理中采用的分离方法有污泥重力浓缩、污泥的浮选或污泥的机械脱水。水处理中有微滤、澄清和深床过滤等方法。
把固体和液体分开的过程都是固液分离,方法非常多,沉降,过滤,膜过滤,压滤,真空,离心机......
固液分离机是利用离心力,分离液体中固体颗粒物和絮状物的机械。
㈣ 离心机的分类介绍
离心机
离心机的品种很多,依据转速不同,能够分为
低速离心机
、
高速离心机
和
超速离心机
,转速少于6000r/min
的为低速离心机,低于25000r/min
的为高速离心机,超越30000r/min的是超速离心机;依据温度控制不同,能够分为
冷冻离心机
和
普通离心机
,冷冻离心机带有
制冷系统
,能够控制温度最低至-20℃,普通离心机不带制冷系统;依据用处不同,还能够将离心机分为剖析离心机和制备离心机。
实验室常用
电动离心机
有低速、高速离心机和低速、
高速冷冻离心机
,以及超速剖析、制备两用冷冻离心机等多种型号。其中以低速(包括大容量)离心机和高速冷冻离心机应用最为普遍,是
生化实验室
用来分别制备
生物大分子
必不可少的重要工具。
①
普通(非冷冻)离心机
这类离心机构造较简单,可分小型台式和落地式两类,配有驱动电机、
调速器
、定时器等安装,操作便当。低速离心机转速普通不超越
4000rpm
,
台式高速离心机
最大转速可达
18000rpm。
②
低速冷冻离心机
转速普通不超越4000rpm,最大容量为2~4L,在实验室中最常用于大量初级分别提取生物大分子、
沉淀物
等。其转头多用铝合金制的甩平式和角式两种
离心管
有硬质玻璃、聚乙烯
硬塑料
和
不锈钢管
多种型号。离心机装配有驱动电机、定时器、
调整器
(速度指示)和制冷系统(温度可调范围为-20~+40℃),可依据离心物质所需,改换不同容量和不同型号转速的转头。
③
高速冷冻离心机
转速可达20000rpm
以上,除具有低速冷冻离心机的性能和构造外,高速离心机所用角式转头均用钛合金和铝合金制成。离心管为具盖聚乙烯硬塑料制品。这类离心机多用于搜集微生物、细胞碎片、细胞、大的
细胞器
、硫酸沉淀物以及
免疫沉淀物
等。
④
超速离心机
转速可达30000rpm
以上,能使亚细胞器分级分别,并用于蛋白质、核酸分子量的测定等。其转头为高强度钛合金制成,可依据需求改换不同容量和不同型号的转速转头。超速离心机驱动电机有两种,一种为调频电机直接升速,另一种为经过变速
齿轮箱
升速。为了避免驱动电机在高速运转中产热,装有冷却驱动电机系统(风冷、水冷),
限速器
、记时器、转速记载器等。此外,超速离心机还装配有
抽真空系统
。
㈤ 离心机角转子和水平转子的区别
一、离心管中心线与旋转轴角度不一样:水平转子静止时,转子中的离心管中心线与旋转轴平行,旋转加速时,中心线由平行位置逐渐过渡到与旋转轴接近垂直的位置,降速时,离心管中心线由与旋转轴接近垂直的位置逐渐趋向平行位置;角转子中的离心管中心线与旋转轴成20~40度的固定角度,角度越大,分离效果越好。
二、适用性不一样:水平转子可以做到大容量分离和利于从离心管中分层取出,不宜高速分离;角转子不宜大容量分离,颗粒沉降时,先沿离心力方向撞向离心管,然后沿管壁滑向管底,管的一侧会出现颗粒沉积而产生壁效应,影响分离效果,宜高速分离。
三、重心和阻力不一样:水平转子分离重心较高,阻力较大,有少量的壁效应;角转子可以做到重心低,阻力小,运转稳。
(5)离心过滤实验扩展阅读
过滤式离心机的主要原理是通过高速运转的离心转鼓产生的离心力(配合适当的滤材),将固液混合液中的液相加速甩出转鼓,而将固相留在转鼓内,达到分离固体和液体的效果,或者俗称脱水的效果。沉降式离心机的主要原理是通过转子高速旋转产生的强大的离心力,加快混合液中不同比重成分(固相或液相)的沉降速度,把样品中不同沉降系数和浮力密度的物质分离开。
当含有细小颗粒的悬浮液静置不动时,由于重力场的作用使得悬浮的颗粒逐渐下沉。粒子越重,下沉越快,反之密度比液体小的粒子就会上浮。微粒在重力场下移动的速度与微粒的大小、形态和密度有关,并且又与重力场的强度及液体的粘度有关。象红血球大小的颗粒,直径为数微米,就可以在通常重力作用下观察到它们的沉降过程。
角转子中的离心管能够保持固定的角度离心,可以使用较高的转速,离心后沉淀位于管底的斜面。较大容量的转子通常可以配不同的“适配器”来“固定”小容量的样品管,例如6 x 85ml的转子每孔可以放置85ml的离心管,也可以放50ml或者15—20ml的离心管,实现一物多用;但是由于重量的负担,大容量转子的最高转速相对小的要低一些,因而还要考虑最高离心力是否能满足实验要求。
水平转子配有4或6个吊篮,静止时垂直挂在转子上,吊篮有不同的适配器以满足不同容量的离心管的需要。当转子转速超过600rpm后离心管达到水平位置,样品沉降方向是沿离心管轴向移动,最后沉降在管底,便于收集。因为不如固定角转子稳固,水平吊篮最高转速相比固定角转子要低很多,限于低速离心的范围。
㈥ 实验室过滤和离心的作用相同不,离心能发挥过滤吗
过滤和离心作用不相同
,离心的线速度快
,某种程度上可提高过滤的速度
.
过滤是把不合专要求的颗粒分离出来属
,
离心是做圆周运动的物体,
速度超过一定数值后而离开圆周运动
.
如豆浆机的工作
,一定程度上离心作用
可提高工作效率
.
㈦ 蛋白质纯化所用的柱子有几种,分别有什么作用
一、沉淀法
1、 盐析
实验原理:中和蛋白质表面电荷并破坏水化膜。
蛋白质易溶于水,因为其分子的-COOH -NH2和-OH都是亲水基团,这些基团与极性水分子相互作用形成水化层,包围于蛋白质分子周围形成1~100 nm大小的亲水胶体,从而削弱了蛋白质分子之间的作用力。当大量盐加到蛋白质溶液中,高浓度的盐离子(如硫酸铵的 SO42- 和NH4+)有很强的水化力,可夺取蛋白质分子的水化层,使之"失水",于是蛋白质胶粒凝结并沉淀析出。
2、等电点沉淀法:
实验原理:利用蛋白质在等电点时溶解度最低而各种蛋白质又具有不同等电点的特点进行分离的方法。
在等电点时,蛋白质分子以两性离子形式存在,其分子净电荷为零(即正负电荷相等),此时蛋白质分子颗粒在溶液中因没有相同电荷的相互排斥,分子相互之间的作用力减弱,其颗粒极易碰撞、凝聚而产生沉淀,所以蛋白质在等电点时,其溶解度最小,最易形成沉淀物。
注意点:不同的蛋白质,具有不同的等电点。同一种蛋白质在不同条件下,等电点不同。
3、有机溶剂沉淀法
实验原理:加入有机溶剂使水溶液的介电常数降低,因而增加了两个相反电荷基团之间的吸引力,促进了蛋白质分子的聚集和沉淀。
有机溶剂引起蛋白质沉淀的另一种解释认为与盐析相似,有机溶剂与蛋白质争夺水化水,致使蛋白质脱除水化膜,而易于聚集形成沉淀。
影响因素:(一)有机溶剂的选择 (二)温度的控制 (三)pH值 (四)离子强度
用此法析出的沉淀一般比盐析法易过滤或离心沉降,分离后的蛋白质沉淀应立即用水或者缓冲液溶解,以达到降低有机溶剂的浓度的目的。此法在血液制品的制备过程中较多使用。
二、层析
1、离子交换柱层析
实验原理:以离子交换剂为固定相,依据流动相中的组分离子与交换剂上的平衡离子进行可逆交换时的结合力大小的差别而进行分离的一种层析方法。是发展最早的层析技术之一,目前已成为蛋白质分离纯化最常用的手段,是基于蛋白质电荷不同的分离技术。
离子交换层析中,基质是由带有电荷的树脂或纤维素组成。带有正电荷的称之阴离子交换树脂;而带有负电荷的称之阳离子树脂。阴离子交换基质结合带有负电荷的蛋白质,所以这类蛋白质被留在柱子上,然后通过提高洗脱液中的盐浓度等措施,将吸附在柱子上的蛋白质洗脱下来。结合较弱的蛋白质首先被洗脱下来。反之阳离子交换基质结合带有正电荷的蛋白质,结合的蛋白可以通过逐步增加洗脱液中的盐浓度或是提高洗脱液的pH值洗脱下来。
2、疏水相互作用层析
实验原理:根据分子表面疏水性差别来分离蛋白质和多肽等生物大分子的一种较为常用的方法。
蛋白质和多肽等生物大分子的表面常常暴露着一些疏水性基团,我们把这些疏水性基团称为疏水补丁,疏水补丁可以与疏水性层析介质发生疏水性相互作用而结合。不同的分子由于疏水性不同,它们与疏水性层析介质之间的疏水性作用力强弱不同,疏水作用层析就是依据这一原理分离纯化蛋白质和多肽等生物大分子的。
3、亲和层析
实验原理:利用蛋白质能和某些专一分子可逆结合的特性,
当蛋白质溶液通过层析柱时,其中可与亲和载体配基相互作用的受体被吸附剂结合,不被吸附的无关成分则可随流出液通过柱体,从而将吸附蛋白与其他蛋白质分开。此法特异性强,收率高。
4、凝胶层析
实验原理:根据分子大小分离蛋白混合物的最有效的方法之一。混合物随流动相流经装有凝胶固定相的层析柱时,其中各物质因分子大小的的不同而被分离的技术。
三、离心
1、速率区带离心法
实验原理根据分离的粒子在离心力作用下,因其在梯度液中沉降速度的不同,离心后具有不同沉降速度的粒子处于不同的密度梯度层内,形成几条分开的样品区带,达到彼此分离的目的。
由于此法是一种不完全的沉降,沉降受物质本身大小的影响较大,一般是应用在物质大小相异而密度相同的情况。容量小,只能用于少量的制备。
2、差速离心法
实验原理:利用样品中各组分沉降系数的差异,对不同的微粒施以不同的离心力,经过多次离心,离心速度逐步加大,将不同的微粒依次沉降,从而实现离心分离。
四、膜分离
1、超滤法
是利用加压膜分离技术,在一定的压力下,使小分子溶质和溶剂穿过一定孔径的特制薄膜,大分子溶质滞留,从而使大分子物质得到部分的纯化。常和离子交换,凝胶过滤联合使用。
2、透析
是利用小分子经过半透膜扩散到水( 或缓冲液) 的原理,将无机盐等小分子与生物大分子分开的一种分离纯化技术,常和盐析,盐溶等方法联合使用。
㈧ 下列DNA粗提取的实验操作中,经离心或过滤后取上清液或滤液的有()A.在新鲜鸡血中加入适量的柠檬酸
A、在新鲜鸡血中加入适量的柠檬酸钠防止血液凝固,混合均匀后离心,取内血细胞的沉淀物,A错误容;
B、在盛有血细胞的塑料烧杯中加蒸馏水,快速搅拌后过滤,取其含有DNA的滤液,B正确;
C、在2mol/L的氯化钠溶液中放入丝状物,能溶解DNA,除去不能溶解的杂质,C正确;
D、在溶有DNA的氯化钠溶液中缓缓加入蒸馏水,使得DNA析出,过滤取其丝状物,D错误.
故选:BC.
㈨ 叶绿体的制备实验中两次离心的沉淀物颜色有什么不同
叶绿体的制备实验中两次离心的沉淀物颜色有深浅不同。
在电子显微镜下观察这版种有缺权陷的叶绿体,发现它含有很少或者根本没 有叶绿体基质,并且叶绿体外被是破损的或者没有外被,将这种叶绿体称为型 叶绿体。相比之下,用温和方法分离的叶绿体具有完整的被膜,将它称为型叶 绿体,它能够完成整个光合作用,包括CO2 的固定。 可以用型或型叶绿体作为分离叶绿体各组分的出发材料,常用型叶绿 体分离叶绿体的亚组分。将叶绿体悬浮在低渗溶液中,破裂外被,接着用等密度 离心分离叶绿体基质、外被、类囊体。如果用型叶绿体作为分离叶绿体亚组分 的出发材料,需要弗氏细胞压碎器(French pressure cell), 分离到组成叶绿体 的亚组分之后,便可对这些组分化学组成和功能进行分析。用温和匀浆技术分离型叶绿体,这种类型的叶绿体保留完整的被膜。然后 在低渗条件下破坏叶绿体,使叶绿体的膜、叶绿体基质、类囊体相互分开。
㈩ 实验室过滤和离心的作用相同不,离心能发挥过滤吗
过滤和离心作用不相同 ,离心的线速度快 ,某种程度上可提高过滤的速度 .
过滤是把不合要求的颗粒分离出来 , 离心是做圆周运动的物体, 速度超过一定数值后而离开圆周运动 .
如豆浆机的工作 ,一定程度上离心作用 可提高工作效率 .