单抗超滤
㈠ 纯化的单克隆抗体，超滤浓缩的时候会把磷酸盐离心掉导致抗体的缓冲环境变成水吗
不会来的。。。
超滤浓缩对于自缓冲液成分不会有任何改变的，因为PBS中的磷酸根离子也好，氯离子也好，钠离子也好都是很小的离子，可以在溶液中自由扩散，不会因为超滤离心就被甩到下层滤液中去。
你可以做个简单的实验，取一定体积PBS溶液测一下pH值和电导率值，之后用超滤管去离心。取出上层未被滤完的溶液再测一下pH值和电导率值，会发现pH值和电导率值和之前测的是一样的。即可证明未被滤完的溶液还是PBS溶液，而不是水。
㈡ 求教对于单抗糖型分析的具体纯化和分析方法
单抗糖型分析方法步骤主要是
PNGase F酶切，收集寡糖，2-AB荧光标记，除去多余标记，最后内过HILIC分析。
酶切可以按买到容的试剂说明书进行操作
酶切后的纯化，有两种方法：一种是萃取柱；还有一种是加热使蛋白析出，再离心去除蛋白。也可以采取有机溶剂沉淀蛋白的方法来除去蛋白
收集寡糖，可以用HILIC SPE萃取收集
2-AB荧光标记可以按买到的试剂说明书进行操作
除去多余标记可以用超滤管去除
㈢ 过表达某种蛋白后会负反馈调节吗
蛋白表达纯化已经是非常经典简单的实验了，没有说的那么吓人。
说说我的蛋白表达纯化以及下面的单抗制作工作总体设计概要吧：
1
首先要知道你要纯化蛋白的编码DNA序列，查阅相关文献，看目的基因在那些细胞或者组织中高表达，进而设计该基因的引物，扩增出目的DNA片段的ARF。这一布叫目的基因片段的获取
2
构建表达载体：根据你获得的基因本身的特性确定原核或者真核载体中表达，这一步的主要问题就是构建带有目的基因的质粒，导入表达系统中。一般原核表达时间短，成本低，表达量大，常优先考虑；但是有些基因在E
coli中就是表达不出，可能是密码子优化等出现问题，也或者是由于想纯化得到更好的活性蛋白的考虑（原核的蛋白折叠系统显然没有真核的好），有很多研究者选择在毕赤酵母中表达。（我手里就有相关资料，因为以前做过表达纯化及后来的单抗制备），这一步再强调一下，优化密码子对于蛋白的成功表达很重要
3
载体构建好了，下面就是重组蛋白的表达了。这一过程涉及到用多少的诱导剂，诱导多少时间才能得到最多的蛋白的问题，即优化表达条件。就是在上述不同量诱导剂诱导条件下，取菌体上清（分泌型）或者破碎细胞（胞内表达的蛋白）电泳，看是否得到目的分子量大小的蛋白
4
蛋白表达成功，下面是根据蛋白质本身亲水/疏水，电荷带电特性等确定蛋白纯化的方法。一般步骤：离心，取蛋白所在的相
如果是分泌表达的蛋白，则取上清，超滤，没有超滤仪器可以用透析袋等代替，用离子交换柱层析。基本上这一步能得到纯化的95％的蛋白，电泳鉴定基本不会看到有杂带出现。如果还是纯度不符合要求，可以在表达蛋白最初在构建表达载体质粒的时候在蛋白的ORF后面加上HIS－标签，这样得到的蛋白不但可以用于HIS柱的进一步纯化，在不确定自己的融合蛋白是否有表达的时候，也可以单单用抗HIS的抗体做一WB，分析确认目的蛋白是否表达，这是蛋白表达的常用手段。
5
经过纯化后的蛋白仍然含有一部分无机盐，如果需要的话可以将蛋白经真空冻干机冻干，得到纯蛋白。
我们实验室做出来的一个蛋白，编码序列GC含量高75达％，但是功夫不负有心人，只要你想做那件事情，积极的寻找解决问题的手段，总会搞定的，没有跨不过的坎。如果坎太宽，搭桥解决总行。
㈣ 合成单克隆抗体需要哪些实验材料及试剂
1. 将蛋白A-Sepharose置于Tris缓冲液中（超过50倍的量，v/v）充分溶胀。在室温下将其灌入直径为2.5 cm 玻璃层析柱中，用Tris缓冲液使其平衡。
2. 腹水浓稀释于3倍体积的Tris缓冲液，以1~5 ml/min 的速度上样于蛋白A-Sepharose柱，用Tris缓冲液洗柱子直至所有的未结合的蛋白都被洗脱，采用A280监测。
3. 依次用2~3倍柱床体积的柠檬酸缓冲液、乙酸缓冲液液以及甘氨酸·Cl缓冲液连续洗脱结合蛋白，洗脱下的蛋白直接接入装有中和缓冲液的管中，中和缓冲液的体积应为所收集蛋白体积的1/4。
4. 采用ELISA法检测抗原特异性MAb。
5. 在超滤器中浓缩所分离的单克隆抗体到1~5 mg/ml，所用超滤膜为XM50，将单克隆抗体存于-20℃。
㈤ 求重组蛋白表达纯化服务质量好些的公司国内或者国外进口皆可！懂的来！
你想知道重组蛋白表达纯化服务质量好些的公司?首先就要确定自己的需求！
国内内或者国外进口容皆可！？看来你不缺钱啊！
这个问题问的过于笼统！
首先，蛋白表达与纯化包括很多种类型，比如原核蛋白表达，哺乳动物蛋白表达，酵母蛋白表达以及昆虫蛋白表达等等，而现在生物实验中常说的蛋白表达纯化通常是指利用大肠杆菌表达系统的原核蛋白表达，这种表达方式比较简单，普遍都可以做。但是如果是指很多种蛋白表达系统的话，可以做的单位就比较少了。
另外，蛋白的表达成功与否还需要取决于蛋白的性质，所以前期一定要问清楚！