去离子甲酰氨rna酶

㈠ RNA酶的作用场所

rna复制酶
rna
replicase
亦称rna合成酶。是依赖于rna的聚合酶。是以“病毒rna”为模板，
4种
5′-三磷酸核苷[4种核糖核苷酸：腺嘌呤核糖核苷酸(a)，鸟嘌呤核糖核苷酸（g），胞嘧啶核糖核苷酸（c），尿嘧啶核糖核苷酸（u）]为底物的合成rna的酶。是从感染rna型噬菌体或癌病毒的细胞分离出来的。对反应来说，mg2+是必要的，而且模板的特异性高，例如大肠杆菌qβ噬菌体的酶只能以qβ或类绿的噬菌体rna为模板。反应生成物具有与模板链完全相同（排除偶然的环境因素）的结构。而实际上rna复制酶中缺乏校正功能，因此rna复制时错误率很高。

㈡ dd水是去RNA酶的吗

如果是直接买的ddH2O那应该是去RNase的，如果是你们实验室自己制取的，那可以用DEPC进行处理，就可以认为是RNase free的。

㈢ 异硫氰酸胍一步法分离纯化rna的时候为什么不适合富含甘油三酯的脂肪组织

异硫氰酸胍一步法分离纯化rna的时候为什么不适合富含甘油三酯的脂肪组织
通过变性剂破碎细胞或者组织，然后经过氯仿等有机溶剂抽提RNA，再经过沉淀，洗涤，晾干，最后溶解。但是由于RNA酶无处不在，随时可能将RNA降解，所以实验中有很多地方需要注意，稍有疏忽就会前功尽弃。
0 T3 z( F& _, D6 c% ^" h6 Y A6 _RNA提取的一般步骤
- O: Y+ x$ p# s8 U4 M9 S 所有RNA的提取过程中都有五个关键点，即：样品细胞或组织的有效破碎；有效地使核蛋白复合体变性；对内源RNA酶的有效抑制；有效地将RNA从DNA和蛋白混合物中分离；对于多糖含量高的样品还牵涉到多糖杂质的有效除去。但其中最关键的是抑制RNA酶活性。RNA的提取目前阶段主要可采用两种途径:提取总核酸，再用氯化锂将RNA沉淀出来；直接在酸性条件下抽提，酸性下DNA与蛋白质进入有机相而RNA留在水相。第一种提取方法将导致小分子量RNA的丢失，目前该方法的使用频率已很低。( O( g; ^+ K) f+ i& ]% P
实验步骤：
* l& d6 s5 e( q1 F( g2 | j, ^0 s 破碎组织→分离RNA→沉淀RNA→洗涤RNA→融解RNA→保存RNA。6 D8 }. Q; Y, g* X
1、 破碎组织和灭活RNA酶可以同步进行，可以用盐酸胍、硫氰酸胍、NP-40、SDS、蛋白酶K等破碎组织，加入β-ME可以抑制RNA酶活性。
" s% f, `0 [1 d* m! ]0 e2、 分离RNA一般用酚、氯仿等有机溶剂，加入少量异戊醇，经过此步，离心，RNA一般分布于上层，与蛋白层分开。
& X. P) i) Y; L# u/ [3、 沉淀RNA一般用乙醇、3M NaAc（pH-5.2）或异丙醇。2 @0 d& z7 ?+ i, g1 @
4、 洗涤RNA使用70％乙醇洗涤，有时，为避免RNA被洗掉，此步可以省掉，洗涤之后可以晾干或者烤干乙醇，但是不能过于干燥，否则不易溶解。
3 @% V" o9 v+ I1 J2 o9 k" z5、 融解RNA一般使用TE。
; L5 f. n6 }( S1 t% Z& J6、 保存RNA应该尽量低温。为了防止痕量RNase的污染，从富含RNase的样品（如胰脏、肝脏）中分离到的RNA需要贮存在甲醛中以保存高质量的RNA，对于长期贮存更是如此。从大鼠肝脏中提取的RNA，在水中贮存一个星期就基本降解了，而从大鼠脾脏中提取的RNA，在水中保存3年仍保持稳定。另外，长度大于4kb的转录本对于痕量RNase的降解比小转录本更敏感。为了增加贮存RNA样品的稳定性，可以将RNA溶解在去离子的甲酰胺中，存于-70℃。用于保存RNA的甲酰胺一定不能含有降解RNA的杂物。来源于胰脏的RNA至少可以在甲酰胺中保存一年。当准备使用RNA时，可以使用下列方法沉淀RNA：加入NaAc至0.3M，12,000×g离心5分钟。
& P3 [7 m* ^$ U$ _" ?
: F" x u* N( ?( I氯化锂法提取总RNA：
" u; }' I! r' ^' ^& l 本方法用高浓度尿素变性蛋白并抑制RNA酶，用氯化锂选择沉淀RNA，其特别适合于从大量样品中提取少量组织RNA，具有快速简洁的长处，但也存在少量DNA的污染及RNA得率不高,小RNA片断丢失的缺陷。# ~* S: }9 `* r4 Z3 P
试验试剂：
" d$ r6 Q+ _. I8 Q1、 氯化锂/尿素溶液【氯化锂126g(3M) 尿素、360g(6M) 加水至1L，过滤灭菌】
7 _8 w1 t" o9 a' q! i4 Z2、 悬浮液【10mM? Tris-HCL (pH7.6) ,1mM? EDTA (pH8,0) ,0.5%SDS】
! m8 Q4 R, ]& y: b# `7 d试验步骤：7 [6 ?$ `* }; o7 _ Z' {
1、 对于大量组织或细胞，则每克组织或细胞加入5－10ml氯化锂－尿素溶液，匀桨器高速匀桨2分钟；对于少量细胞（107个细胞/ml），则每克组织或细胞加入0.5ml氯化锂－尿素溶液手工匀桨，并转移至Eppendof管中。& Y) b: E, Q" l/ ^ Q: \$ s
2、 匀桨液在0－4℃放置4小时后，12000g离心30分钟。 x- C6 D- N/ N0 K! t2 a
3、 取沉淀，加入原匀桨液1/2体积的氯化锂－尿素溶液，重复步骤2。
) y- x) S0 K9 y6 j, e4、 沉淀用原匀桨液1/2体积的氯化锂－尿素溶液复溶后，加入等体积酚/氯仿/异戊醇在室温放置15－30分钟并不时摇动混匀，4000g离心5分钟。
3 d2 v' i1 ~( ~* D5、 取上层水相，加1/10倍体积的3M乙酸钠（pH5.2）及2倍体积的乙醇，－20℃放置1小时，5000g离心。
L4 a' Q4 u" l: a* K% Z$ ?( e6、 70％乙醇洗沉淀一次。真空干燥。3 }; r0 [/ Q' G9 q
7、 RNA溶解液溶解沉淀，得RNA，分装，于－70℃保存。
0 f. X% R( H% B7 g
! y7 j5 u$ C' |) [% ~! J3 D: Q蛋白酶－热酚法6 |" ^0 b* [) P3 S* c4 b4 H4 l
本方法适合于病毒RNA的提取
* I( i+ b# r! K试验试剂：
$ ?4 [7 H9 `) J1、 蛋白酶K（终浓度50ug/ml）, J5 p l6 V/ t7 [/ I
2、 2×缓冲液：1%SDS? 20mMTris-HCL (pH 7.6)? 0.2MnaCL9 h, p ] y+ \$ Z) O
试验步骤：# W3 v8 G1 [$ ]5 y
1、 提纯病毒液中加入等体积缓冲液、蛋白酶K,37℃40-50分钟。
- K0 p/ E' G0 M# Q- z7 n, {# d2、 加入等体积65℃预热的酚溶液，轻徭,在65℃保温5分钟后再轻徭。
w! `; W( ~, E: i3 ^3、 离心，取上清，氯仿抽提一次。, |( Z0 d; j2 @7 m+ d2 Q& x H
4、 取上层水相，加1/10倍体积的3M乙酸钠（pH5.2）及2倍体积的乙醇，－20℃放置1小时，5000g离心(10000g,10min)。
7 [/ w, h2 d6 U$ k5、 70％乙醇洗沉淀一次。真空干燥。
% A5 Y; {( w% ]3 a* y, O e) P6、 RNA溶解液溶解沉淀，得RNA，分装，于－70℃保存。植物RNA提取过程中难点的相应对策

㈣ 请告诉我一些是RNA的酶的例子

23SRNA的实抄质是肽酰转移酶，催化使肽键袭形成，不需要额外的能量在蛋白质合成过程中，它催化核糖体A位tRNA上末端氨基酸的氨基与P位肽酰-tRNA上氨基酸的羧基间形成肽键。其结果,使A位的氨酰-tRNA上的多肽延长了一个氨基酸,而P位的氨酰-tRNA形成脱氨酰-tRNA。

㈤ 然后如何去除DNA中的RNA酶

（一）从源头控制污染：
（1）玻璃制品、塑料制品和电泳槽 灭菌的一次性使用的塑料制品基本上无RNA酶，可以不经预处理直接用于制备和贮存RNA。实验室用的普通玻璃器皿和塑料制品经常有RNA酶法染，使用前必须于180 ℃干烤8小时或更长时间（玻璃器皿）或用氯仿冲洗（塑料制品）。另一种方法是用0.1 ％焦碳酸二乙酯（DEPC）的水溶液浸泡用于制备RNA的烧杯，试管和其他用品。DEPC是RNA酶的强烈抑制剂，但其作用并不是绝对的（Fedorcsak和Ehrenberg,1966）。灌满DEPC的玻璃或塑料器皿在37℃放置2小时，然后用灭菌水淋洗数次， 并于100℃干烤15分钟（Kumar和Lindberg,1972)。在15 lbf/in2(1.034x105Pa)高压蒸氯灭菌15分钟。上述处理可以除去器甲上痕量的DEPC，以防DEPC通过羧甲基化作用对RNA的嘌呤碱基进行修饰。
用于RNA电泳的电泳槽应用去污剂洗干净，再用水冲洗，用乙醇干燥，然后灌满3％的H2O2溶液，于室温放置10分钟，然后用0.1 ％DEPC处理过的水彻底冲洗电泳槽。最好能留出一些玻璃器皿、塑料制品和电泳槽作上特殊标记，存放在指定地点，为RNA实验专用。
（2）研究人员造成的污染 RNA酶最主要的潜在污染源是研究人员的手。因此，在准备分离的和分析RNA的材料和溶液时，主有涉及RNA的一切操作过程中，都应戴一次性手套，接触“胖的”玻璃器皿和其他物品以后，手套就可能沾染上RNA酶，因此进行RNA实验时应勤换手套。
（3）污染的溶液 用高压灭菌的水和RNA研究专用的化学试剂配制溶液，用干烤过的药匙称取试剂，将溶液装入无RNA酶的玻璃器皿。可能的话溶液均应用0.1％DEPC于37℃至少处理12小时，然后于100℃加热15分钟或在15lbf/in2(1.034x105Pa)的高压下蒸气灭菌15分钟。注：DEPC可与胺类迅速发生化学反应，因些不能用来处理含有Tris 一类的缓冲液。可存几瓶新的未开封的Tris晶体以制备无RNA酶的溶液。
（二）已经污染，可以加入RNA酶的抑制剂
（1）RNA酶的蛋白质抑制剂是 从人胎盘分离的一种蛋白质可与多种RNA酶紧密结合（KI≈3x1010）形成非共价结合的等摩尔复合物，使RNA酶失活。此蛋白质体内可能是血管生成素的抑制剂，血管生成素是氨基酸序列和推测的三级结构与胰RNA酶类似的一种血管生成因子， 几个厂家以不同的商品名出售这种抑制剂，该蛋白质应置于含5mmol/L二硫苏糖醇（DTT）的50％甘油中，贮存于－20℃。抑制剂制品冻融数次后或放置在氧化条件下即应弃之不用，因为上述处理会使蛋白质变性从而释放出所结合的RNA酶。因此，在使用变性剂裂解哺乳动物(mammal;mammalian)细胞这一提取RNA的初始步聚中不应使用这种蛋白抑制剂。然而职用更温和的裂解方法时应使用这种抑制剂，并且在后续的所有RNA纯化步骤中均应有此蛋白质存在。由于酚抽提可以除蛋白质抑制剂，故应在纯化过程中补加几次抑制剂。其最大活性的发挥要求巯基试剂，而且它并不干扰反转录或mRNA在无细胞体系中的翻译。
（2）氧钒核糖核苷复合物 这种由氧钒（1V）离子和4种核糖核苷之中的任意一种所形成的复合物，是量种过渡态类似物，它能与多种RNA酶结合并几科能百分之百地抑制RNA酶的活性。这4种氧钒核糖核苷复合物可加入完整细胞中，在RNA提取和纯化的所有过程中，其使用浓度都是10mmol/L。所得到的mRNA可直接在硅卵母细胞中进行翻译， 并能作为某些外酶促反应（如mRNA反转录）的模板。然而氧钒核糖核苷复合物强烈抑制mRNA在无细胞体系中的翻译，因此必须用含0.1 ％羟基喹淋的苯酚[ 用0. 01mol/LTris.Cl(pH7.8)平衡]多次抽提以去除之。有几家公司出售氧钒核糖核苷复合物。
（3）Macaloid（硅藻上）Macaloid是一咱粘土，很多年前就发现它能吸附RNA酶，用缓冲液将其制成浆液，以0.015％（W/V）的终浓度溶解细胞。 这种粘土随同它所吸附的RNA酶可在后续的RNA纯化过程中（如酚抽提后）经离心去除。
（三）提取核酸时可以加入盐酸胍或硫氰酸胍溶液。盐酸胍或硫氰酸胍溶液能迅速溶解蛋白质，从而免受RNA酶的干扰。

㈥ RNA类酶都有哪些

种类数量比较少，而且不常见,比如端粒酶,在细胞中负责端粒的延长的一种酶，是基内本的核蛋白逆容转录酶，可将端粒DNA加至真核细胞染色体末端.端粒酶，核酶，RNA聚合酶，逆转录酶。

核酶,主要指一类具有催化功能的RNA,亦称RNA催化剂.自然界中已发现多种核酶，目前主要有四种核酶能用于反式切割靶RNA：四膜虫自身剪接内含子、大肠杆菌RNase P，锤头状核酶和发夹状核酶。
rRNA，是核糖体上的酶。

拓展资料：

核酸分解的第一步是水解核苷酸之间的磷酸二酯键，在高等动植物中都有作用于磷酸二酯键的核酸酶。不同来源的核酸酶，其专一性、作用方式都有所不同。有些核酸酶只能作用于RNA，称为核糖核酸酶（RNase）。

㈦ rnase a酶能与sds结合么

如何去除提取过程中的蛋白质污染提取RNA时如何去除DNA的污染的方法：注意实验室的标准化问题，注意污染的存在，同时严格按照说明书上的操作应该没有问题。发现DNA污染，用DNAseI消化1小时，37度离心取上清的时候，一定要小心不要取到中间的膜和下面的液体。直接加NaOH溶液与提取液混合搅拌,然后离心就可以了.因为RNA可溶于NaOH溶液,而DNA不可溶,离心后的上清液就不含有DNA了。RNA提取步骤：1.匀浆处理：①组织将组织在液氮中磨碎，每50-100mg组织加入1mlTRIzol，用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10%。②单层培养细胞直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml，用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。③细胞悬液离心收集细胞，每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1mlTRIzol，反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。2.将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。3.可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。4.每使用1mlTRIzol加入0.2ml氯仿，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。5.2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60%。6.把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1mlTRIzol加入0.5ml异丙醇，室温放置10分钟。7.2-8℃10000×g离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。8.用75%乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1mlTRIzol至少加1ml75%乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟，弃上清。9.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀，大约晾5-10分钟即可。不要真空离心干燥，过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5%SDS，用枪头吸打几次，55-60℃放置10分钟使RNA溶解。如RNA用于酶切反应，勿使用SDS溶液。RNA也可用100%的去离子甲酰胺溶解，-70℃保存。注意事项：从少量样品（1-10mg组织或102-104细胞）中提取RNA时可加入少许糖原以促进RNA沉淀。例如加800mlTRIzol匀浆样品，沉淀RNA前加5-10μgRNase-free糖原。糖原会与RNA一同沉淀出来，糖原浓度不高于4mg/ml是不影响第一链的合成，也不影响PCR反应。匀浆后加氯仿之前样品可以在-60至-70℃保存至少一个月。RNA沉淀可以保存于75%酒精中2-8℃一星期以上或-5至-20℃一年以上。分层和RNA沉淀时也可使用台式离心机，2600×g离心30-60分钟。预期产量：1mg组织或1×106细胞提取RNA分别为：肝和脾6-10μg，肾3-4μg，骨骼肌和脑组织1-1.5μg，胎盘1-4μg，上皮细胞8-15μg，成纤维细胞5-7μg。

㈧ DNA聚合酶,解旋酶,RNA聚合酶各自的作用对象和作用时期（详细）

DNA聚合酶以脱氧核苷酸三磷酸（dATP、dCTP、dGTP、或dTTP，四者统称dNTPs）为作用对象，作用时期为DNA复制时期。

解旋酶以DNA双链的氢键为作用对象，作用时期为DNA或RNA复制时期。

RNA聚合酶以四种核糖核苷酸三磷酸（NTP：ATP、GTP、CTP、UTP）为作用对象，作用时期为转录时期。

(8)去离子甲酰氨rna酶扩展阅读

1、DNA聚合酶特性

聚合作用：在引物RNA-OH末端，以dNTP为底物，按模板DNA上的指令，即A与T，C与G的配对原则，逐步逐个、连续地将dNTP加到延伸中的DNA分子3'-OH末端，逐步合成延长中的子链DNA。这是DNA聚合酶的主要作用；

3’→5’'外切酶活性（校对作用）：这种酶活性的主要功能是从3’→5’方向识别和切除不配对的DNA生长链末端的核苷酸，3’→5’外切酶活性的主要功能是校对作用，当加入的核苷酸与模板不互补而游离时则被3’→5’外切酶切除，

以便重新在这个位置上聚合对应的核苷酸，可见，3’→5’外切酶活性对DNA复制真实性的维持是十分重要的。以保证复制过程的保真性和准确性；

5’→3’外切酶活性（切除修复作用）：该活性是从5’→3’方向水解DNA延长链前方的DNA链（即只对DNA上双链处的磷酸二酯键有切割作用），主要产生5'—脱氧核苷酸。这种酶活性在DNA损伤的修复中可能起着重要作用。

2、DNA解旋酶（DNA helicase）

通常为流体蛋白环，通过ATP水解产生的能量由解旋酶装载器装载到DNA单链上（单链穿过环中央），有3’→5’或5’→3’方向极性，该极性就是它结合的单链的极性。它像DNA聚合酶一样具有延伸性。

与解旋酶装载器结合，装载到单链DNA上之前，DNA解旋酶是没有活性的，只有解旋酶装载器将它装载到单链DNA上，解旋酶装载器自动离开之后，DNA解旋酶的活性才被激活。直到双链全部解开，运动到单链末端时，它才从单链上离开。

注意DNA解旋酶结合的是DNA单链而不是双链，至于它结合的单链，是由起始子蛋白作用到被称为复制器的DNA区段使该区段发生双链解旋才产生的。

3、RNA聚合酶

该酶需要四种核糖核苷酸三磷酸（NTP：ATP、GTP、CTP、UTP）作为RNA聚合酶的底物，DNA为模板，二价金属离子Mg2+、Mn2+是该酶的必需辅因子。其催化的反应表示为：（NMP）n+NTP→（NMP）n+1+PPi。RNA链的合成方向也是5’→3'，第一个核苷酸带有3个磷酸基。

其后每加入一个核苷酸脱去一个焦磷酸，形成磷酸二酯键，焦磷酸迅速水解的能量驱动聚合反应。与DNA聚合酶不同，RNA聚合酶无须引物，它能直接在模板上合成RNA链；RNA聚合酶能够局部解开DNA的两条链，所以转录时无须将DNA双链完全解开，RNA聚合酶无校对功能。

㈨ 请问什么是RNA 酶

酶的习惯命名抄根据两个原则：
1.根据酶所催化的底物：如水解淀粉的酶称为淀粉酶，水解蛋白质的称为蛋白酶；有时还加上来源，以区别不同来源的同一类酶，如胃蛋白酶、胰蛋白酶等等。
2.根据酶所催化的反应类型：催化底物分子水解的称为水解酶，催化还原反应的称为还原酶。
也有根据上述两项原则综合命名或加上酶的其它特点，如琥珀酸脱氢酶、碱性磷酸酶等等。

因此RNA酶是指作用底物为RNA的酶，例如RNA聚合酶。

核酶一词用于描述具有催化活性的RNA, 即化学本质是核糖核酸(RNA), 却具有酶的催化功能。核酶的作用底物可以是不同的分子, 有些作用底物就是同一RNA分子中的某些部位。核酶的功能很多,有的能够切割RNA, 有的能够切割DNA, 有些还具有RNA 连接酶、磷酸酶等活性。
与蛋白质酶相比，核酶的催化效率较低，是一种较为原始的催化酶。

水解RNA,DNA的可以称为核酸水解酶，简称核酸酶。

㈩ 核酸杂交液中的甲酰胺是那种呢单纯的甲酰胺还是去离子甲酰胺，还是别的甲酰胺，谢谢

核酸杂交液中的甲酰胺一般用去离子甲酰胺。