离子交换色谱进行酪蛋白分离
① 蛋白质、核酸等生物大分子为何能用离子交换色谱分离
因为他们都带电荷啊,因为你柱子上有相反的离子啊,他们可以通过离子键相互专作用啊!
同时的柱子有孔径啊,属可以将小的直接溜走,没有机会结合啊
可以让大的下来的更慢啊!
你满意不!
② 离子交换层析可用于哪些种类蛋白质的分离
离子来交换层析是利用蛋白质在不同自PH带不同种电荷的方法,利用离子交换的方法分离蛋白的。
离子交换内的介质一般是树脂,阳离子交换型的,使用前树脂先用碱处理成钠型,将氨基酸混合液(pH=2-3)上柱,pH=2-3时,氨基酸主要以阳离子形式存在,与树脂上的钠离子发生交换而被“挂”在树脂上,再用洗脱剂洗脱。不同的氨基酸(带的电荷不同)与树脂的亲和力不同,要将其分离洗脱下来,需要降低它们之间的亲和力,方法是逐步提高洗脱剂的pH和盐浓度,这样各种氨基酸将以不同的速度被洗脱下来,反之亦然。
不同反荷离子与树脂亲和力是不同的,其强弱关系为阳性竞争离子:Ag+〉CS+〉K+〉NH4+〉Na+〉H+〉Li+ 阴性竞争离子:I->NO3->(PO4)3->CN-〉HSO3-〉Mg2+〉HCO3-〉HCOO-〉CH3COO-〉OH-〉F- 如果某种离子溶液洗脱效果不好,可用另一种亲和力强的离子代替之,等电点>7选择阳离子交换树脂,等电点<7选择阴离子交换树脂。
③ 离子交换层析可用于哪些种类蛋白质的分离
离子交换层析是根据蛋白质所带电荷的差异进行分离纯化的一种方法。蛋白质的带电性是由蛋白质多肽中带电氨基酸决定的。
④ 7.下列关于用离子交换纤维素色谱法分离蛋白质原理的叙述哪一个是正确的
答案D
分配层析利用样品各组分在固定相和流动相间溶解度的不同专(分配系数不同)来进行分离;吸附属层析法利用吸附剂表面对样品组分吸附能力强弱不同来进行分离;亲和层析由于配体与待分离物质进行特异性结合;DEAE-纤维素离子交换层析法利用样品组分对离子交换剂静电力的差异来进行分离。
⑤ 离子交换层析法分离纯化蛋白质有哪些局限性
因为离子交换吸附蛋白质并不是特异性吸附,在某些情况下可能难以判断结合的蛋版白质权是否为当初设计的目的蛋白。
离子交换吸附依赖于蛋白质表面的静电荷,如果蛋白质结构比较特殊,可能会有在各种pH都难以结合上离子交换层析的情况。
离子交换层析对于等电点与目标蛋白接近的杂蛋白并没有很好的分离效果。
⑥ 离子交换层析可以用于哪些蛋白质的分离
可以分为阳离子交换层析和阴离子交换层析。
阳离子交换层析,使用含有酸性基团版的阳离子交换树脂等,权可以结合待层析液中的阳离子,因而洗脱顺序是,正电荷越多结合越紧密洗脱越晚。
阴离子交换层析则使用含有碱性基团的交换树脂,结合溶液中的含有阴离子基团的分子,因而负电荷越多结合越紧密,洗脱越晚。
⑦ 离子交换层析法分离纯化蛋白质有哪些局限性
1,离子交换树脂固定床的床层压力会随着分离过程的进程而不断加大,需要重新填充回。同时答,也造成固定床填充过程操作麻烦,而且密封性要求高。2,蛋白质分离纯度问题,如果在出峰之后再行切换接收馏分,而在峰行下降后提前切换,虽可以保证纯度,但蛋白分离收率则会下降。3,由于交换层析介质决定,不同蛋白质相互分离效果也不确定,这种分离,也易造成各蛋白峰重叠,造成分离纯度下降。4,自动化程度不高。主要也是受固定床以及树脂交换饱和当量无法保持长期稳定造成的。无法像液相色谱柱那样,可以在标样标定后,建立方法,自动分离目标蛋白。5,不过,规模化分离纯化蛋白质过程,使用这种层析法,还是具有一定优势的。
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详细资料请参考:
离子交换层析: http://proct.bio1000.com/100474/
⑧ 为什么说离子交换色谱法是分离蛋白质的最佳方法
它是根据蛋白质的组成物质氨基酸的物理性质(基于氨基酸电荷行为)为分离基础的方法。相对透析和超过滤及凝胶过滤来说,可以针对多种蛋白质中的某一种(前提是知道蛋白质的氨基酸组成及其离子交换树脂的亲和度及洗脱强度)进行分离。(而透析和超过滤还有凝胶过滤方法更大的取决于相对分子质量及其结构 分离出的单一蛋白质纯度相对要低 并且凝胶过滤要求凝胶对要求组分不能有吸附作用 适用性较低 ) 相对盐溶和盐析来说,分离单一蛋白质的纯度要高,且更好的保留其天然理化性(盐溶要求蛋白质分子吸附某一盐离子从而改变其溶解性 但有些蛋白质吸附某些盐离子后其蛋白质构象及理化性会发生改变)。 相对有机溶剂分级分离法,更好的保留其天然理化性(有机溶剂分类法易造成蛋白质不可逆变形 且适用范围窄) 相对凝胶电泳和等电聚焦来说 更易于实现大量制备分离 且不改变蛋白质结构和功能(电泳会影响蛋白质结构 且操作繁琐 成本高) 相对亲和层析来说 它更加易于实现且成本低廉效果也不错(亲和层析需要制备其配体并与载体交联 因而制备难且成本较高)
PS: 最好的分离方法不是例子交换色谱法 而是高效液相色谱法 相对离子交换色谱来说有着更高的效率、更高的分辨率和过柱速度
⑨ 离子交换层析在蛋白质分离中的应用
离子交换层析在蛋白质分离纯化中有非常广泛的应用,在样品富集,中度纯化和精制阶段都可以采用。另外还可以利用离子交换层析去除DNA和内毒素。因此在生物制品工艺中应用非常广泛。关键是要选择合适的介质和分离条件。
你的问题范围太广,如果有具体的问题可以详细讨论。
⑩ 求离子交换色谱法分离蛋白质试验步骤
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缓冲液和洗脱液最好一致。你自己查文献看看选吧。