核酸提取去离子

① DNA怎么提取

DNA提取的几种方法
(1).浓盐法
利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同，将二者分离，常用的方法是用1M 氯 纳提取化钠抽提,得到的DNP粘液与含有少量辛醇的 氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间，而DNA位于上层水相中,用2倍体积95%乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来.
也可用0.15 MNaCL液反复洗涤细胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脱氧核糖蛋白,再按氯仿---异醇法除去蛋白.
两种方法比较,后种方法使核酸降解可能少一些.
以稀盐酸溶液提取DNA 时,加入适量去污剂,如SDS可有助于蛋白质与DNA 的分离。在提取过程中为抑制组织中的DNase对DNA 的降解作用,在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的烙合剂.通常用.15MNaCL,0.015M柠檬钠,并称SSC溶液,提取DNA.

（2）.阴离子去污剂法:
用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,可以直接从生物材料中提取DNA .由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合,因为阴离子去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取DNA.
（3）.苯酚抽提法:
苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用.用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。离心分层后取出水层，多次重复操作，再合并含DNA 的水相，利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇沉淀DNA 。此时DNA是十分粘稠的物质，可用玻璃漫漫绕成一团，取出。此法的特点是使提取的DNA保持天然状态 .

（ 4）.水抽提法:
利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去RNA，然后将沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中,离心后收集上清液.在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M.加入2倍体积95%乙醇,立即用搅拌法搅出.然后分别用66% ٠80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥,既得DNA样品.此法提取的DNA中蛋白质含量较高,故一般不用.为除蛋白可将此法加以改良,在提取过程中加入SDS.

② 核酸的提取

要回答这个问题要确定你是在哪一步发现降解了。
是在质粒提取后后，直接点样发现降解的话，可能是提取过程中大肠杆菌富含DNase，或是操作过程中碱裂解过长
如果是在酶切过程中降解了，可能有盐离子污染导致特异性酶变成非特异性酶了，把质粒都降解了。
如果是在保存一段时间发现降解了，可能是保存液不是TE或是质粒发生了降解。具体要分析一下

③ 核酸提取物是什么

核酸也称多聚核苷酸，是由许多个核苷酸聚合而成的生物大分子，核苷酸是由含氮的碱基、核糖或脱氧核糖、磷酸三种分子连接而成。碱基与糖通过糖苷键连接成核苷，核苷与磷酸以酯键连接成核苷酸。核苷酸是生物体内一类重要含氮化合物，是各种核酸的基本组成单位。根据核酸所含戊糖的不同，可分为核糖核酸(RNA)和脱氧核糖核酸(DNA)二种。 核酸不但是一切生物细胞的基本成分，还对生物体的生长、发育、繁殖、遗传及变异等重大生命现象起主宰作用。它在生物科学的地位，可用“没有核酸就没有生命”这句话来概括。 饮食核酸的营养保健作用如下： 1.饮食核酸与免疫 ‘ 从核酸对机体各系统的影响来看，免疫系统是最敏感也是最直接受影响的系统。实验表明，核酸是维持机体正常免疫功能和免疫系统生长代谢的必需营养物质。

2.饮食核酸与衰老和内分泌 衰老是机体各组织器官的退行性变化，代谢性、退行性疾病的发生和发展与体内过氧化脂质含量高度正相关。饮食核酸能增加血浆单不饱和脂肪酸和co-3、¨6系列多不饱和脂肪酸的含量，多不饱和脂肪酸的增加可提高机体对抗自由基的能力。饮食核酸作为使遗传物质活泼代谢的原料，具有极强的抗生物氧化、消除体内自由基和全面增强免疫功能及性激素分泌的作用，因此在延缓衰老方面优势显著。

3.饮食核酸与增殖细胞 饮食中补加核酸有助于肝脏再生和受损伤的小肠恢复功能，饮食核酸是维持肝脏处于正常生理状态的必需营养物质。血液中的红细胞、白细胞、血小板和血浆蛋白等也都是代谢较快的增殖细胞系，加之它们中的大多数均无从头合成核酸的能力，因此它们的代谢和功能也都需要充足的核酸营养。再生障碍性贫血和抗癌药物、放疗、化疗等引起的贫血，即缺铁性贫血之外的贫血均需补充核酸营养，以改善骨髓造血功能和血液成分的代谢活力。

4.饮食核酸与癌症 人体每日约有数百万个癌状细胞出现，它们几乎全部被机体的免疫监视系统和核酸、维生素等食物成分，在形成大的癌细胞克隆前排除掉。因此在日常生活中尽量避免致癌因子的作用，增加核酸等防癌因素的作用非常必要。

5.饮食核酸与痴呆等神经障碍 食物核酸提取物对痴呆症状的改善非常令人鼓舞。老年痴呆患者脑内神经纤维变化多的部位，RNA和蛋白质合成显著减少，因此发生记忆障碍。

6.饮食核酸与循环系统 核酸营养对循环系统的作用是抑制过氧化脂质的形成，抑制胆固醇的生成，扩张血管，改善血流，纠正心肌代偿不良，促进血管壁再生，抑制血小板凝集，因此核酸被认为对脑血栓、心肌梗死、高血压和动脉粥样硬化症有较好的营养保健作用。

7、饮食核酸与糖尿病 非胰岛素依赖性糖尿病与生活方式和运动不足关系密切，目前尚无特效疗法，饮食疗法常常被应用于这类患者。如果在普通的饮食疗法的基础上，再加上核酸饮食，将收到更好的效果。 除上述作用外，饮食核酸还有以下作用：减肥，提高机体对环境变化的耐受力，显著的抗疲劳、增强机体对冷热的抵抗力、促进摄人氧气的利用，促进小鼠生殖系统的发育等。 对于婴儿、迅速成长期的孩子、老年体弱多病、全身感染、外伤手术者、肝功能不全以及白细胞、T细胞、淋巴细胞降低人群等，可以额外补充核酸类物质。世界卫生组织规定，每天膳食中核酸的量不大于2克，扣除食物中的核酸摄入量，每天补充小于1.5克核酸是合适的。 食物中，鱼类等海产品富含核酸，此外动物肝脏、脑、心、瘦肉，豆类及豆制品，笋，波菜，蘑菇，木耳，花粉，酵母，香蕉，葡萄，胡萝卜，番茄，苹果，桔子等，含核酸也较丰富。核酸产品有核酸调味品、食品添加剂及保健食品。

2核酸是什么
很多人对核酸是什么并不是很清楚，所以在对它补充的时候，也是需要对它进行很好的认识，使得选择它的时候，也是可以放心进行，不会危害到自身健康。

核酸是什么：

由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，为生命的最基本物质之一。核酸广泛存在于所有动植物细胞、微生物体内，生物体内的核酸常与蛋白质结合形成核蛋白。不同的核酸，其化学组成、核苷酸排列顺序等不同。根据化学组成不同，核酸可分为核糖核酸(简称RNA)和脱氧核糖核酸(简称DNA)。DNA是储存、复制和传递遗传信息的主要物质基础。RNA在蛋白质合成过程中起着重要作用——其中转运核糖核酸，简称tRNA，起着携带和转移活化氨基酸的作用;信使核糖核酸，简称mRNA，是合成蛋白质的模板;核糖体的核糖核酸，简称rRNA，是细胞合成蛋白质的主要场所。

④ 核酸提取仪的主要步骤及方法

核酸提取仪，是应用配套的核酸提取试剂来自动完成样本核酸的提取工作的仪器，核酸提取仪分为两类：一类是大型的自动化的，一般称为自动液体工作站；另一类是小型自动核酸提取仪，利用封装好的配套试剂自动完成提取纯化过程。大型自动液体工作站因为设备成本高昂，运行成本高，适合一次提取几千个同一种类标本，所以真正得到应用的比较少；而小型自动化的仪器，因为仪器设备和运行成本低，操作方便 得到越来越多的应用。

Nucleic Acid Extraction System是使用通用磁珠法提取核酸的高科技产品，具有自动化程度高，提取速度快，结果稳定，操作简便的优点。利用一般生化专用的96孔反应盘，可同时操作1-32个样品，可广泛应用于常规科研、基因组学、疾控系统、食品安全、法医等领域。使用本仪器只需加入样品与以磁珠为载体的全自动核酸提取试剂于96孔专用反应盘中，选择或编辑适当程序后执行即可。搭配不同种类的磁珠核酸试剂组，可以快速提取动植物组织、血液、体液、刑事检体等样品中的DNA和RNA

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可根据试剂优化提纯方案，配合精确的温育时间，实现了更高的提取效率，提取的DNA/RNA纯度高，可以直接用于PCR和RT-PCR。
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避免人工操作引起的差异及错误，结果温度，重复性好。
自我清洁
具有内置可定时紫外消毒功能。
污染控制
严格控制孔间污染及批次间污染，杜绝交叉污染。
试剂开放
可使用各种磁珠法提取试剂。
安全可靠
开门自动锁定保障操作安全；封闭提取仓，一次性耗材，最大程度减少操作者与试剂的接触；智能化操作，避免有害物质对人体的危害。

⑤ 核酸的分离提取属于分子生物学的哪个范畴

DNA重组，PCR技术，质粒的提取，酶切，分子标志和基因克隆都有涉及核酸的提取。

⑥ 核酸提取中除去蛋白质的方法主要有哪几种

可以用氯仿抽提之后离心，离心后分三层，下层有机层中有一些脂溶性的杂质，中间层白色絮状沉淀是蛋白，上清液中即含有核酸。也有很多试剂盒，是可以把核酸挂在柱子上，把蛋白质等杂质离心掉，这个方法即快捷又方便。

凝胶过滤，这是很容易去除小分子杂质物质的方法。

如果蛋白样本和核酸的分子大小差别比较大，可以考虑用超滤的方法。

超滤是以压力为推动力的膜分离技术之一，以大分子与小分子分离为目的 。

加入核酸酶消化三个小时。

比如加一定量的DNAase 和RNAse酶消化。

(6)核酸提取去离子扩展阅读：

核酸模板在核酸聚合酶、引物、四种单脱氧核苷酸存在条件下复制或转录时，如果在四管反应系统中分别按比例引入四种双脱氧核苷酸，只要双脱氧核苷酸掺入链端，该链就停止延长，链端掺入单脱氧核苷酸的片段可继续延长。

如此每管反应体系中便合成以共同引物为5’端，以双脱氧核苷酸为3’端的一系列长度不等的核酸片段。反应终止后，分四个泳道进行电泳。以分离长短不一的核酸片段（长度相邻者仅差一个核苷酸），根据片段3’端的双脱氧核苷酸，便可依次阅读合成片段的核苷酸排列顺序。

⑦ 核酸分离提取的原则是什么

核酸分离提取的原则
核酸包括DNA、RNA两种分子，在细胞中都是以与蛋白质结合的状态存在。真核生物的染色体DNA为双链线性分子，原核生物的“染色体”、质粒及真核细胞器DNA为双链环状分子；有些嗜菌体DNA有时为单链环状分子，RNA分子在大多数生物体内均是单链线性分子，不同类型的RNA分子可以具有不同的结构特点，如真核mRNA分子多数在3’端带有poly(A)结构，至于病毒的DNA、RNA分子，其存在形式多种多样，有双链环状、单链环状、双链线状及单链线状等。
95%的真核生物DNA主要存在于细胞核内，其它5%为细胞器DNA，如线粒体、叶绿体等。RNA分子则主要存在于细胞质中，约占75%，另有10%在细胞核内，15%在细胞器中，RNA以rRNA的数量最多（80％-85%），tRNA及核内小分子RNA占10%-15%，而mRNA分子大小不一，序列各异。总的来说，DNA分子的总长度一般随着生物的进化程度而增大，而RNA的分子量与生物进化无明显关系。
分离纯化核酸总的原则：
1.应保证核酸一级结构的完整性；2.排除其它分子的污染。
为了保证核酸结构与功能的研究，完整的一级结构是最基本的要求，因为遗传信息全部贮存在一级结构之中，核酸的一级结构还决定其高级结构的形式以及和其它生物大分子结合的方式。对于核酸的纯化应达到以下三点要求：
1.核酸样品中不存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子；
2. 其它生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降到最低程度；
3. 排除其它核酸分子的污染，如提取DNA分子时应去除RNA，反之亦然.
为了保证分离核酸的完整性和纯度，在实验过程中，应注意以下事项:
1. 尽量简化操作步骤，缩短提取过程，以减少各种有害因素对核酸的破坏；
2.减少化学因素对核酸的降解，为避免过酸、过碱对核酸链中磷酸二酯键的破坏，操作多在pH4-10的条件下进行;
3.减少物理因素对核酸的降解，物理降解因素主要是机械剪切力，其次是高温。机械剪切力包括强力高速的溶液振荡、搅拌，使溶液快速地通过狭长的孔道，细胞突然置于低渗液中，细胞爆炸式破裂以及DNA样本的反复冻贮。这些操作细节在实验操作中应倍加注意。机械剪切作用的主要危害对象是大分子量的线性DNA分子，如真核细胞的染色体DNA。对分子量小的环状DNA分子，如质粒DNA及RNA分子，威胁相对小些。高温如长时间煮沸，除水沸腾带来的剪切力外，高温本身对核酸分子中的有些化学键也有破坏作用。核酸提取过程中，一般在低温操作，但现在发现在室温快速提取与低温提取，获得核酸的质量没有太大差异.
4.防止核酸的生物降解，细胞内或外来的各种核酸酶消化核酸链中的磷酸二酯键，直接破坏核酸的一级结构，其中DNA酶，需要金属二价离子Mg2 、Ca2 的激活，使用EDTA、柠檬酸盐螯合金属二价离子，基本可以抑制DNA酶活性。而RNA酶不但分布广泛，极易污染样品，而且耐高温、耐酸、耐碱、不易失活，所以是生物降解RNA提取过程的主要危害因素.
核酸提取的主要步骤，无外乎破碎细胞，去除与核酸结合的蛋白质以及多糖、脂类等生物大分子，去除其它不需要的核酸分子，沉淀核酸，去除盐类，有机溶剂等杂质，纯化核酸等。核酸提取的方案，应根据具体生物材料和待提取的核酸分子的特点而定，对于某特定细胞器中富集的核酸分子，事先提取该细胞器，然后提取目的核酸分子的方案，可获得完整性和纯度两方面质量均高的核酸分子。

⑧ 请问DNA提取过程中70%乙醇是如何配制的所用水是去离子水还是经过其他处置的水

就是体积比
70ml无水乙醇加30ml的去离子水 去离子水要灭过菌的

⑨ 核酸分离时为什么要除去小分子物质和脂类物质

大多数核酸分离与纯化的方法一般都包括了细胞裂解、酶处理、核酸与其他生物大分子物质分离、核酸纯化等几个主要步骤.每一步骤又可由多种不同的方法单独或联合实现。
1、细胞裂解：核酸必须从细胞或其他生物物质中释放出来。细胞裂解可通过机械作用、化学作用、酶作用等方法实现。
2、酶处理：在核酸提取过程中，可通过加入适当的酶使不需要的物质降解，以利于核酸的分离与纯化。如在裂解液中加入蛋白酶(蛋白酶K或链酶蛋白酶)可以降解蛋白质,灭活核酸酶(DNase和RNase)，DNase和RNase``rightleder也用于去除不需要的核酸。