大肠杆菌表达离子交换
㈠ 大肠杆菌作为外源基因表达系统有哪些优缺点
遗传背景清楚、载体受体系统完备、生长迅速、培养简单、重组子稳定
㈡ 大肠杆菌表达系统表达外源蛋白时,其蛋白表达量一般是多少谢谢！
这个没有固定数值，可能表达同一种蛋白，不同人都会得到不同的浓度，这个和你的试验设计有关系
㈢ 大肠杆菌诱导基因表达的时候为什么加iptg
具体问题具体分析，什么时候最好需要用实验来确定，针对原核蛋白表达实验而言，内最好做个容梯度实验来比较一下。
前期诱导可能增加代谢负担会导致最终菌长得不是很旺盛
对数后期诱导可避免对菌代谢负担这一问题因为菌本就即将停止对数增长
在OD0.6左右开始诱导的话 菌长得不多 可以减少外源蛋白对宿主的负担
在OD1。2左右开始诱导的话 菌长得多 蛋白液多 但是比较容易形成包涵体
㈣ 为什么通常吧目的基因运至大肠杆菌，然后通过大肠杆菌表达呢
细菌可以在某种条件下形成感受态，然后可以接受外界基因，而动物细胞的专感受态很难做，属或者干脆需要注射；另外细菌的细胞可以无限繁殖，动物细胞不可以。。。
细菌转化的局限性在于，真核生物和原核生物的表达是不同的，这导致了很多基因无法用转化大肠杆菌的方法大量表达，这时才需要转入动物细胞
㈤ 大肠杆菌系统表达外源基因必须具备哪些条件
启示密码子，终止密码子，以及基因中没有终止密码子导致提前终止。还有得有原核表达载体。
㈥ 如何以大肠杆菌表达系统克隆并表达一个编码动物激素的基因实验设计题，写出所以尽可能的详细方案，并说明
克隆就看看作为受体细胞的大肠杆菌子代有没有动物激素被表达出来
编码动物基因就是做个对照试验
你这个实验设计题目太大了点，可以分成好几个试验了：微生物的培养，基因工程，激素的检测等等，
㈦ 在大肠杆菌中表达外源基因需要注意什么
原核载体表达基因通用：
启动子，rbs，终止子缺一不可
rbs离表达框的距离一专定要在8个碱基左属右
插入基因必须有正确的阅读框，不能移位
大肠杆菌中表达：
需考虑大肠杆菌密码子偏好问题。需点突变更改外源基因的稀有密码子。
㈧ 外源基因在大肠杆菌中高效率表达的基本条件是什么
1. 强启动子
2. 产物本身对大肠杆菌没有毒性
如果你使用了强启动子还是表达量低，先专做个PCR，看看转录有没属有问题。如果mRNA水平低，那就是转录有问题，换个启动子，或者重新做个表达载体。如果mRNA水平很高，建议你可以在16°培养过夜。或者换一个株系的细菌看看。
㈨ 人α防御素5在大肠杆菌中的可溶性表达与纯化研究哪位了解生物知识在哪里可以了解求大神帮助
你可以到生物帮那里了解这类信息啊，那里是专业的生物技术、生命科学门户网站。致力提供各种生物制剂试剂、实验抗体、仪器耗材、医疗设备等产品交易信息，提供生物技术知识方法文档、生物医药等领域的资讯 生物工程学报 Chin J Biotech 2008, February 25; 24(2): 291-296 journals.im.ac.cn Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 [email protected] . 2008 Institute of Microbiology, CAS & CSM, All rights reserved Received: April 26, 2007; Accepted: July 3, 2007 Supported by: Sci & Tech Research Foundation of PLA “Eleventh Five-Year Plan” (No. 06G076), the National Natural Science Foundation of China (No. 30771892), and Academician Fund of Chongqing City (No. CSTC, 2007AB5022). Corresponding author: Junping Wang. Tel: +86-23- 68752883; E-mail: [email protected] 军队“十一五”科技功关项目(No. 06G076)、国家自然科学基金 (No. 30771892)和重庆市院士基金(No. CSTC, 2007AB5022)资助。 研究报告 人α 防御素5 在大肠杆菌中的可溶性表达与纯化研究 王艾平, 粟永萍, 程天民, 邹仲敏, 王军平 第三军医大学军事预防医学院全军复合伤研究所, 创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室, 重庆 400038 摘要: 采用PCR 扩增大肠杆菌偏好的人α防御素5 成熟肽(mHD-5)密码子序列, 并将其克隆至pMAL-p2x 质粒, 构建pMAL-p2x-mHD-5 表达载体, 转化大肠杆菌BL21(DE3), 诱导表达, SDS-PAGE 分析目的蛋白表达量并优化表达条件。经亲和层析、酶切和离子交换层析等方法分离、纯化重组mHD-5(rmHD-5)多肽。采用浊度法测定rmHD-5 对细菌的抑制活性。通过优化表达条件, 获得约30%的可溶性目的蛋白表达量, 并成功纯化rmHD-5。rmHD-5 对大肠杆菌标准菌株(ATCC25922)具有较强的抑制活性, 在终浓度为62.5μg/mL 时, 90%以上的细胞被抑制。结果表明采用可溶性融合表达策略, 在原核表达系统中诱导表达并纯化具有生物活性的防御素是可行的途径之一。 关键词: 防御素, 原核表达, 纯化, 生物活性 please click to connect www.bio1000.com/zt/disease/219828.html .that can help you Soluble Expression and Purification of Human Alpha-Defensin-5 in Escherichia coli Aiping Wang, Yongping Su, Tianmin Cheng, Zhongmin Zou, and Junping Wang Institute of Combined Injury of the People’s Liberation of Army; National Key Laboratory of Trauma, Burn and Combined Injury, Third Military Medical University, Chonqqing 400038, China Abstract: DNA fragment containing human alpha-defensin 5 mature peptide (mHD-5) coding sequence with biased codons of E. coli was amplified by PCR, which was subsequently cloned into the plasmid pMAL-p2x in order to create pMAL-p2x-mHD-5 expression vector. The plasmid pMAL-p2x-mHD-5 was transferred into engineered strain BL21(DE3) to express heterogeneous fusion protein (MBP-mHD-5). The soluble MBP-mHD-5 targeted protein incible expressed by IPTG was accounted for about 30% under optimized conditions. The recombinant mHD-5 (rmHD-5) peptide was successfully purified through a separation process including affinity chromatography, Factor Xa digestion and ion exchange chromatography. The bioactivity of rmHD-5 was examined by bacteria-inhibition tests in liquid culture. The growth of E. coli ATCC25922 was dramatically suppressed with an inhibition rate of 90%, with the presence of 62.5μg/mL rmHD-5 in the media. These results indicate that the strategy of soluble expression of fusion protein in E. coli can be a useful and practical way to proce bioactive defensins. Keywords: defensin, prokaryotic expression, purify, bioactivity
㈩ 在大肠杆菌中表达外源基因时需要考虑哪些因素
加入外源基因的大肠杆菌生长及表达受到各种因素的影响，培养基的成分、温度、pH值、溶氧、诱导条件等因素都会影响到最终产物也就是重组蛋白的表达。