除垢剂分离的膜蛋白

㈠ 用什么方法可以分离膜蛋白，如何获得有功能活性的膜蛋白

Ⅰ、（1）根据题干信息，“膜蛋白A能加快水通过细胞膜，而HgCl2对膜蛋白A的功能有抑制作用”，则该实验的自变量有2个：膜蛋白的有无、HgCl2的有无，因此实验的对照处理如下： ①甲组：缺乏蛋白A的非洲爪蟾卵母细胞若干． ②乙组：生理状况相同的等量缺乏蛋白A的非洲爪蟾卵母细胞+注入控制膜蛋白A合成的有活性的mRNA（有膜蛋白）． ③丙组：乙组+HgCl2溶液（有膜蛋白和HgCl2）．（2）实验的因变量是细胞水通透速率，把各组卵母细胞放入非洲爪蟾卵母细胞低渗溶液中，一段时间后，利用细胞水通透速率测量装置测量细胞水通透速率． Ⅱ．“膜蛋白A能加快水通过细胞膜，而HgCl2对膜蛋白A有抑制作用”实验结果记录表：实验组号水通透速率甲组（无膜蛋白A）慢乙组（有膜蛋白A）快丙组（有膜蛋白和HgCl2）较慢 Ⅲ、实验结果说明：水通过细胞膜的方式是被动运输（或简单扩散和易化扩散）．故答案为： Ⅰ．（1）乙组：生理状况相同的等量缺乏蛋白A的非洲爪蟾卵母细胞+注入控制膜蛋白A合成的有活性的mRNA．丙组：乙组+HgCl2溶液． 2．非洲爪蟾卵母细胞低渗溶液 Ⅱ．“膜蛋白A能加快水通过细胞膜，而HgCl2对膜蛋白A有抑制作用”实验结果记录表实验组号水通透速率甲组慢乙组快丙组较慢 Ⅲ．被动运输（或简单扩散和易化扩散）

㈡ 如何让蛋白质从去垢剂中释放

答：蛋白质失活的原因是去垢剂中的表面活性剂能够通过包含蛋白质的半透膜,而其强碱性离子能够使蛋白质变性.
去垢剂(表面活性剂)是一类即具有亲水基又具有疏水基的物质,一般具有乳化、分散、和增溶作用,可分阴离子、阳离子和中性去垢剂等多种类型,中性去垢剂在蛋白提取钟应用的较多.
A．中性去垢剂 又称非离子表面活性剂,对蛋白质的变性作用影响较少,宜于蛋白质或酶提取之用.一般市售中性去垢剂有聚乙二醇类,如PEG200；多元醇类表面活性剂,如山梨醇、司盘类和吐温类；聚氧乙烯脂肪醇醚,如苄泽类、平平加类；聚氧乙烯烷基苯酚醚,如Igepal CO、乳化剂OP、Triton、Pluronic(用作消泡剂、润湿剂、增溶剂)、泡敌.中性去垢剂作用后可通过Sephadex LH-50柱除去；也可直接上DEAE-Sephadex柱层析分离目的蛋白,不必先除去去垢剂.
B．阴离子去垢剂 常见的有十二烷基硫酸钠和十二烷基璜酸钠.前者可促进核蛋白的溶解,将核酸释放出来,并对核酸酶有一定抑制作用,常用于核酸的提取.
C．阳离子去垢剂 如洁尔灭、新洁尔灭、CTAB、CPC、ZEPH、克菌定、消毒净（TMPB）、杜灭芬等,消毒灭菌类居多.
D．天然表面活性剂 又称为生物表面活性剂,包括种类较为广泛,如各种树胶（阿拉伯胶、杏胶、桃胶、果胶）、明胶、皂甙、卵磷脂、豆磷脂、琼脂、海藻酸钠、酪蛋白、胆甾醇、胆酸类、多糖类（如环糊精）等.
E．两性表面活性剂 在碱性水溶液中呈阴离子表面活性剂的性质,起泡性好,去污力也强；在酸性溶液中则呈现阳离子表面活性剂特征,其杀菌性很强.
蛋白质变性剂的作用是破坏蛋白质的次级键,如氢键、盐键和疏水力,引起天然构象的解体；它们并不破坏共价键,如肽键和二硫键,故不涉及一级结构的改变.变性剂有溶解型和沉淀型两类,SDS、尿素和胍盐是有效的溶解型变性剂,而三氯乙酸、甲醇、和氯仿/异戊醇是有效的沉淀变性剂.一般而言,变性剂应用时常大大过量,破坏氢键的变性剂用量至少两倍于氨基酸的克分子数,如1克蛋白质可可结合1.4g.SDS溶于水可达25%,对温度敏感,W/V贮存液最为方便.需要注意的是SDS的钾盐是不溶性的,所以SDS溶液中要避免混入钾盐.尿素极易溶于水,可达10mol/L,在8mol/L以上要注意温度以防止沉淀.尿素在水中缓慢分解形成氨及高度活性的氰酸离子,故要防止高温.三氯乙酸与过氯酸（TCA,PCA）都是极好的沉淀剂,能沉淀蛋白质和核酸,前者应用更为广泛.

㈢ 膜蛋白去掉锚定点一定会分泌到细胞外吗

膜蛋白去掉锚定点一定会分泌到细胞外
生物膜所含的蛋白叫膜蛋白，是生物膜功能的主要承担者。 根据蛋白分离的难易及在膜中分布的位置，膜蛋白基本可分为三大类：外在膜蛋白或称外周膜蛋白、内在膜蛋白或称整合膜蛋白和脂锚定蛋白。
胞内蛋白是在细胞质游离的核糖体上合成的 不需要运输到细胞膜外 只在细胞内起作用如呼吸酶等细胞生命活动必需的酶
细胞中有游离的核糖体和附着在内质网上的核糖体。游离的核糖体就是制造胞内蛋白的，这个不应经过内质网和高尔基体。附着的也可以造胞内蛋白，需要内质网，高尔基体（比如溶酶体的形成，就是由高尔基体以出芽方式产生的囊泡所形成的）。 其实胞内蛋白种类很多，不一样的蛋白形成的方式可能不相同。

㈣ 如何看是否是跨膜蛋白

经过简单离子浓度改变等因素就可以将蛋白质从膜上分离，且不破坏膜结构是外在蛋白。
经过去垢剂才能分离的蛋白质是跨膜蛋白，而且必须破坏膜结构才可以分离。
望采纳。

㈤ 请问膜蛋白的类型有哪些 已解决

膜蛋白是膜功能的主要体现者。
（一）类型根据膜蛋白与脂分子的结合方式，可分为：
1、膜周边蛋白（peripheral protein）：
靠离子键或其它较弱的键与膜表面结合
只要改变溶液的离子强度甚至提高温度就可以从膜上分离下来

与膜的结合非常紧密，只有用去垢剂(detergent是一端亲水一端疏水的两性小分子) 才能从膜上洗涤下来，如离子型去垢剂SDS，非离子型去垢剂Triton-X100。

㈥ 总膜蛋白提取试剂盒的原理是什么

外在膜蛋白为水溶性蛋白，靠离子键或其它较弱的键与膜表面的蛋白质分子或脂分子结合，因此只要改变溶液的离子强度甚至提高温度就可以从膜上分离下来，膜结构并不被破坏。
内在膜蛋白与膜结合非常紧密，是嵌在膜中的，水溶性不好，基本方法就是用不同的离心速度去掉胞质蛋白等，然后用去污剂把蛋白从膜中释放出来。膜蛋白分离纯化的重要步骤是选择适当的增溶用表面活性剂，一般常用的有胆酸盐，CHAPS(一种离子去污剂），Emulgen和Lubrol等表面活性剂。 
有专门的试剂盒效果好一些

㈦ 膜蛋白有几种

生物膜所含的蛋白叫膜蛋白,是生物膜功能的主要承担者.根据蛋白分离的难易及在膜中分布的位置,膜蛋白基本可分为三大类：外在膜蛋白或称外周膜蛋白、内在膜蛋白或称整合膜蛋白和脂锚定蛋白.

㈧ 膜蛋白的功能

1、单纯扩散：

脂溶性物质由膜的高浓度区一侧向膜的低浓度区一侧顺浓度差跨膜的移动过程。顺浓度差，不耗能；无需膜蛋白帮助；最终使转运物质在膜两侧的浓度差消失。

2、易化扩散：

非脂溶性或脂溶性较小的物质在膜蛋白质的帮助下，由膜的高浓度一侧向低浓度一侧转运的过程。

载体转运——小分子亲水物质。蛋白质有结构特异性；饱和现象；竞争性抑制。

3、转运功能

通道转运/门控转运特点：相对特异性；饱和性；有开放、失活、关闭不同状态。

主动转运/泵转运：由离子泵和转运体膜蛋白介导的消耗能量、逆浓度梯度或点位梯度的跨膜转运。分为原发性转运和继发性转运。

(8)除垢剂分离的膜蛋白扩展阅读：

膜蛋白在细胞中扮演着重要的角色：例如被熟知的识别、信号转导、运输等功能，也是用药的理想的靶点，虽动物细胞主要有9种膜脂，而膜蛋白的种类繁多，多数膜蛋白分子数目较少，但却赋予细胞膜非常重要的生物学功能。

根据膜蛋白分离的难易及其与脂分子的结合方式，膜蛋白可分为两大类型：外在膜蛋白、内在膜蛋白。

1、外在膜蛋白为水溶性蛋白，靠离子键或其它较弱的键与膜表面的蛋白质分子或脂分子结合，因此只要改变溶液的离子强度甚至提高温度就可以从膜上分离下来，膜结构并不被破坏。

2、内在膜蛋白与膜结合非常紧密，一般只有用去垢剂(detergent)使其膜解后才可分离出来。

㈨ 十二烷基磺酸钠(SDS)和Triton X-100都是去垢剂，哪一种可用于分离有生物功能的膜蛋白

去垢剂可分为离子型和非离子型两种。十二烷基磺酸钠(SDS)是常用的离子型去垢剂，它不仅可使细胞膜崩溃，并与膜蛋白的疏水部分结合使其分离，而且还破坏膜蛋白内部的非共价键，使蛋白变性，所以不宜用于分离有功能的膜蛋白。Triton X-100是温和性去垢剂，它可以使膜脂溶解，又不使蛋白变性，可分离到有生物功能的膜蛋白。

㈩ 膜蛋白为什么能停留在膜上

（三）膜蛋白
动物细胞主要由9种膜脂，而膜蛋白的种类繁多，多数膜蛋白分子数目较少，但却赋予]细胞膜非常重要的生物学功能。

1、类型

根据膜蛋白分离的难易程度及其与脂分子的结合方式，膜蛋白可以分为两类：膜周边蛋白（peripheral proteins）或称外在膜蛋白(extrinsic proteins)和膜内在蛋白(integral proteins)或称整合膜蛋白。

膜周边蛋白为水溶性蛋白，靠离子键或其它较弱的键与膜表面的蛋白质分子或脂分子结合，因此只要改变溶液的离子强度甚至提高温度就可以从膜上分离下来，膜结构并不被破坏。

膜内在蛋白与膜结合非常紧密，只有用去垢剂使膜崩解后才能分离出来。

2、膜内在蛋白与膜脂结合的方式

膜内在蛋白多数为跨膜蛋白（transmembrane proteins），也有些插入脂双层中，它与膜结合的方式主要有三种：

（1）膜蛋白的跨膜结构域与脂双层分子的疏水核心的相互作用。

（2）跨膜结构域两端携带正电荷的氨基酸残基，如精氨酸、赖氨酸等与磷脂分子带负电的极性头形成离子键，或带负电的氨基酸残基通过Ca2+、Mg2+等阳离子与带负电的磷脂极性头相互作用。

（3）某些膜蛋白在细胞质基质一侧的半胱氨酸的残基上共价结合脂肪酸分子，插入脂双层之间，进一步加强膜蛋白与膜双层的结合力，还有少数蛋白质与糖脂共价结合。