树脂缓冲液

1. 电泳分离四种核苷酸时，通常将缓冲液调到什么ph

① 电泳分离4种核苷酸时应取pH3.5 的缓冲液，在该pH时，这4种单核苷酸之间所带版负电荷差异较大，它权们都向正极移动，但移动的速度不同，依次为：UMP>GMP>AMP>CMP；
② 应取pH8.0，这样可使核苷酸带较多负电荷，利于吸附于阴离子交换树脂柱。虽然pH 11.4时核苷酸带有更多的负电荷，但pH过高对分离不利。
③ 当不考虑树脂的非极性吸附时，根据核苷酸负电荷的多少来决定洗脱速度，则洗脱顺序为CMP>AMP> GMP > UMP，但实际上核苷酸和聚苯乙烯阴离子交换树脂之间存在着非极性吸附，嘌呤碱基的非极性吸附是嘧啶碱基的3倍。静电吸附与非极性吸附共同作用的结果使洗脱顺序为：CMP> AMP > UMP >GMP。

2. Lys Arg Asp Glu Tyr Ala的混合物在高pH条件下加到阴离子交换树脂上，用连续递减pH值缓冲溶液洗脱

洗脱先后顺序：Arg Lys Tyr Ala Glu Asp
先分组：1 Arg Lys是碱性氨基酸 PH=7 正电荷
2 Tyr ALa是中性氨基酸 PH=7 中性为主
3 Glu Asp是酸性氨基酸 PH=7 酸性
由于专是交换属树脂层析，氨基酸的与树脂的亲和力主要取决于他们之间的亲和力，其次是氨基酸与树脂之间的疏水相互作用。由于缓冲液先是碱性，所以氨基酸与树脂的亲和力为：酸性氨基酸》中性氨基酸>碱性氨基酸（阴离子树脂的疏水基团带正电，负电被交换了），洗脱的顺序就是：碱性 中性 酸性
考虑氨基酸与树脂的疏水作用：Arg的R基团是三个亚甲基+一个亚氨基，Lys是四个亚甲基，很明显，Arg的疏水作用要弱，与树脂吸引力不够强，最先被洗下来。其他的两组楼主自己分析R基团的疏水性

3. 在溶菌酶的粗提取实验中,为什么将蛋清缓冲液PH调到4.7后又调到8.0

因为卵清蛋白的等电点是4.7，为了提纯溶菌酶，要将卵清蛋白沉淀，所以要把PH调到4.7，至于8.0，这是溶菌酶的最适PH值。

提取溶菌酶的方法：
树脂预处理：干树脂清水浸泡，使其充分膨胀并除去细小颗粒和较大杂质； 1 mol/L 的HCl浸泡2 h，去离子水洗3次至至近中性；抽滤收集树脂,1 mol/L 的NaOH溶液浸泡2 h，去离子水洗3次至近中性；抽滤收集树脂,加0.15 mol/L、pH 值为6．5的磷酸缓冲液平衡过夜待用。
蛋清制备：将3个新鲜鸡蛋洗净干燥，小端敲一个小洞，大端打一个小孔进气，分离得鸡蛋清，用1 mol/L HCl调节PH到7。过滤前称量烧杯重48.7g，缓慢搅拌用灭菌的两层纱布过滤除去脐带块和碎蛋壳等，蛋清与烧杯总重207.5g，蛋清净重158.8g。用1 mol/L 的HCl 溶液调pH 值至7.0，量蛋清体积为100 ml。在调节PH时蛋清中出现少量白色沉淀，可能为部分蛋白由于局部过酸而变性。
吸附：蛋清在不断搅拌下加入抽滤好的724树脂25g（相当蛋清四分之一体积的树脂），冰水浴中磁力搅拌器缓慢搅拌（使树脂全部悬浮在鸡蛋清中，搅拌不能起泡）吸附2.5 h，4℃静置1.5h。然后3000r/min离心15min分层，收集树脂，回收蛋清（留样A）。
去除杂蛋白：收集树脂用去离子水振荡水洗直至洗液澄清（至无白沫为止），吸管轻吸去洗液，以去除杂蛋白。（每洗1次，离心1次，总共3次）冰浴中用等体积的0.15mol/L、pH =6.5的磷酸缓冲液搅拌洗涤15min，抽滤，重复洗三次，注意防止树脂流失。最后一次抽滤滤除树脂水分至干燥。
洗脱溶菌酶：树脂中加入35ml（等体积）的10％（NH4）2SO4溶液搅拌洗脱30 min，抽滤,使溶菌酶从树脂上洗脱下来，重复两次，合并收集洗脱液（留样），洗脱液过滤后，准确量取体积100ml。（留样B）
盐析:每83mL洗脱液加32g磨细的固体（NH4）2SO4，本实验中总量为38.55g。缓慢加入（NH4）2SO4搅拌待完全溶解后保鲜膜封口，置于4℃冰箱盐析过夜。
透析:待白色沉淀析出，3000r/min离心15 min，收集沉淀，用去离子水将沉淀洗下并全部溶解（4.5ml去离子水），装于透析袋中，于去离子水中透析（冰浴），期间2次更换去离子水，直至用BaCl2检测透析完全。透析装置中加入磁子，于磁力搅拌器中搅拌加快透析速度。
去杂质蛋白：取出透析袋中的透析液，用0.1mol/L HCl调整pH4.6，产生少量白色沉淀（留样D），可能为杂蛋白。3000r/min离心10min，收集上清液（留样C 20ul）。
浓缩：用PEG-20000浓缩上清液至1.5ml（留样E，20ul，加loading buffer,出现黄色（可能为浓缩时透析袋中渗入了PEG-20000）。[5][6]

4. 树脂预处理时，用有机溶剂、酸碱洗完后，用磷酸盐缓冲液平衡时为什么要进行抽滤，有什么用

抽虑是为了提高平衡效率，不抽率，多用缓冲溶液清洗几次，我认为也是可以的，关注：分离材料网

5. 求高人指点，环氧树脂的固化剂哪种韧性最好，低温固化时间1～12小时之内，聚酰胺试过了，因为颜色是暗

你好抄，首先固化剂不决定韧性，不管袭你是酸酐还是胺基都一样，要韧性是要在你的环氧树脂里改性而不是在固化剂里，你的意思就是不要那么脆对吧，加5个点的DBP试试只要不冒油就行，或者稀释剂里加5-10个点的丙二醇碳酸酯成膜都可以变得不易碎。希望能对你有所帮助，另外不是所有固化剂和环氧树脂都通用，酸酐不能和胺基及其他混用，反应原理完全不同。低温固化的种类能选的比较少，要不你就是减少固化剂的量导致不完全交联，形成半凝胶的部份残留环氧树脂可以提供一定的缓冲韧性。

6. 如用阳离子交换树脂分离M,K和D三种氨基酸的混合液,用pH5.5的缓冲液洗脱时,洗脱下来的顺序是

阳离子交换树脂可以吸附阳离子氨基酸在PH5.5的条件下，D带负电荷最多最早被洗脱，K带正电荷最多最晚被洗脱

7. 0.12 M KCl，5 mM 组氨酸缓冲溶液 (pH 6.8)溶液的配制方法谢谢！

这不能配缓冲溶液，缓冲溶液需要共轭酸碱对，仅限弱酸或弱碱，互相抑制对方电离所以才具有缓冲性

8. 用732#阳离子树脂处理水时，氨-氯化铵缓冲溶液的配制

你说的这种软化水的方法，是比较简单的，只要认真负责，一点也不难学。

阳离子树脂回作水的软化答处理，在软化罐中进行，简单的化学反应方程式是这样的：

NaR + Ca+2 ---- Na+1 + CaR (方程式未平衡，+1 +2表示化合价）

当树脂中的钠离子被水中的钙镁离子置换，降低了水的硬度，同时树脂的软化能力降低，到一定程度，就停止使用交换器，用一定浓度的食盐水，将树脂再生还原。

CaR + Na+1 --- NaR + Ca+2

用水将置换出来的钙离子冲洗，阳离子树脂又恢复了软化水的能力。

问题中的氨——氯化铵缓冲液，不是直接用于软化水处理的，而是测定钙镁离子的化验试剂，配制极其简单安全，按照说明配制即可。

9. 利用阳离子交换层析分离下列每一对氨基酸，哪一种氨基酸首先被PH7缓冲液从离子交换柱上洗脱出来。

氨基酸与粒子交复换树脂的制吸附力大小取决于它们之间的电荷引力和疏水作用。第一组中甘氨酸和亮氨酸均为非极性氨基酸，但是相比之下甘氨酸的极性要更强，也就是疏水性更弱，它会先被洗脱。第二组中，丝氨酸是中性条件下不带电荷的极性氨基酸，丙氨酸是非极性氨基酸，所以丝氨酸疏水性差，先被洗脱。