多肽合成树脂
Ⅰ 多肽合成结束后,怎样从树脂上取下肽链
关于多肽合成,纯化等整个工艺,你可以到这个博客里找找看有没有相关博文。http://url。cn/YtIpCL?q=ngvafa
Ⅱ 多肽固相合成法的发明
多肽固相合成方法:Boc多肽合成法和Fmoc多肽合成法
多肽的合成是氨基酸重复添加的过程,通常从C端向N端(氨基端)进行合成。多肽固相合成的原理是将目的肽的第一个氨基酸C端通过共价键与固相载体连接,再以该氨基酸N端为合成起点,经过脱去氨基保护基和过量的已活化的第二个氨基酸进行反应,接长肽链,重复操作,达到理想的合成肽链长度,最后将肽链从树脂上裂解下来,分离纯化,获得目标多肽。
1、Boc多肽合成法
Boc方法是经典的多肽固相合成法,以Boc作为氨基酸α-氨基的保护基,苄醇类作为侧链保护基,Boc的脱除通常采用三氟乙酸(TFA)进行。多肽合成时将已用Boc保护好的N-α-氨基酸共价交联到树脂上,TFA切除Boc保护基,N端用弱碱中和。
肽链的延长通过二环己基碳二亚胺(DCC)活化、偶联进行,最终采用强酸氢氟酸(HF)法或三氟甲磺酸(TFMSA)将合成的目标多肽从树脂上解离。在Boc多肽合成法中,为了便于下一步的多肽合成,反复用酸进行脱保护,一些副反应被带入实验中,例如多肽容易从树脂上切除下来,氨基酸侧链在酸性条件不稳定等。
2、Fmoc多肽合成法
Carpino和Han以Boc多肽合成法为基础发展起来一种多肽固相合成的新方法——Fmoc多肽合成法。
Fmoc多肽合成法以Fmoc作为氨基酸α-氨基的保护基。其优势为在酸性条件下是稳定的,不受TFA等试剂的影响,应用温和的碱处理可脱保护,所以侧链可用易于酸脱除的Boc保护基进行保护。
肽段的最后切除可采用TFA/二氯甲烷(DCM)从树脂上定量完成,避免了采用强酸。同时,与Boc法相比,Fmoc法反应条件温和,副反应少,产率高,并且Fmoc基团本身具有特征性紫外吸收,易于监测控制反应的进行。Fmoc法在多肽固相合成领域应用越来越广泛。
Ⅲ 多肽合成中怎么定量树脂担载量
担载量的取值是要看你要和的肽链长度以及它的合成度来看的,一般的肽,如果是二十个以下就取0.6到0.8,很短的取1都可以,一般不能超过1,二十到三十一般就0.4到0.6,至于三十个以上你还是尽量调低一点
Ⅳ 多肽合成在裂解前要不要收缩
最好收缩,干燥, 以免将杂质带入产品或影响裂解
Ⅳ 什么是树脂取代度不同替代度对于多肽合成时氨基酸连接的影响该怎么选择谢谢!
通常树脂的参数有取代度(Loading),以及目数,以及规格如1%DVB.
取代度(Loading):单位是mmol/g 即每克树脂有多少mmol的官能团.
目数:颗粒大小 常用的是100-200Mesh 数值越大颗粒越细.
1%DVB: 交联剂二乙烯基苯在苯乙烯和二乙烯基苯共聚物的比重.
Ⅵ 多肽合成的介绍
多肽合成是一个固相合成顺序一般从C端(羧基端)向 N端(氨基端)合成。过去内的多肽合容成是在溶液中进行的称为液相合成法。从1963年Merrifield发展成功了固相多肽合成方法以来,经过不断的改进和完善,到今天固相法已成为多肽和蛋白质合成中的一个常用技术,表现出了经典液相合成法无法比拟的优点,从而大大的减轻了每步产品提纯的难度。多肽合成总的来说分成两种:固相合成和液相多肽合成。
Ⅶ 【生物化学】请问我用Fmoc固态合成法合成多肽,树脂加上第一个氨基酸后要测取代值,为什么用A290nm
Fmoc在290有吸收
Ⅷ 多肽合成是怎样形成
基于Fmoc化学合成,先将所要合成的目标多肽的C-端氨基酸的羧基以共价键形式与一个不溶性的高分子树脂相连,然后以这一氨基酸的氨基作为多肽合成的起点,同其 它的氨基酸已经活化的羧基作用形成肽键,不断重复这一过程,即可得到多肽。根据多肽的氨基酸组成不同,多肽后处理方式不同,纯化的方式也有差异
Ⅸ 多肽合成的基本原理
现如今多肽合成的办法首要有两种:即 Fmoc 和 t Boc 。因为 Fmoc 比 tBoc 具有更多的优势,所以让大家比较认可的是 Fmoc 法。而多肽合成是一个重复添加氨基酸的进程,合成方向是从 C 端(羧基端)向 N 端(氨基端)进行;从前多肽合成大多是在液相中进行,而如今大多选用固相合成,然后大大的降低了每步商品提纯的难度;为了防止副反响的发作,合成柱和添加的氨基酸的侧链都是预先被维护的,只要羧基端是游离的,并且在反响之前有必要先用化学试剂活化它。
多肽合成基本原理示意图
具体合成过程如下:
1、去维护:Fmoc 维护的柱子和单体有必要用一种碱性溶剂( piperidine )去除氨基的维护基团。
2、激活和交联:下一个氨基酸的羧基被一种激活剂所激活溶解,激活的单体与游离的氨基在交联剂的作用下交联,构成肽键。
3 、循环:这两步反响重复循环直到整条肽链合成结束。
4 、洗脱和脱维护:依据肽链所含的残基不一样,用不一样的脱树脂溶剂从柱上洗脱下来,其维护基团被一种脱维护剂( TFA )洗脱和脱维护。
多肽是复杂的大分子,因而每条序列在物理和化学特性上都是共同的,有些多肽合成很艰难 ,另有些多肽虽然合成相对简单,但纯化艰难;最常见的疑问是很多肽不溶于水溶液,因而在纯化中,这些疏水肽有必要溶于非水溶剂中或特别的缓冲液,而这些溶剂或缓冲液很也许不适合应用于生物试验体系,因而研究人员不能运用该多肽到达自个的意图,因而下面是关于研究人员规划多肽的一些建议。
怎么下降肽链合成的难度?
1. 削减序列长度
因为肽的长度添加会致使粗产品纯度下降,小于15个残基的肽对比简单得到较高纯度的初产品,当肽链长度添加到20个残基以上时,准确产品的量即是一个首要思考的疑问。在很多试验中,下降残基数低于20 往往能得到非常好的试验成果。
2. 削减疏水性残基数
疏水性残基占显着优势的肽,尤其在距C端7-12个残基的区域,常常导致合成艰难。这一般被认为是因为合成中构成b折叠片,这么会发生不完全配对。用1个或几个极性残基置换 或参加Gly或Pro以翻开肽构造也许会有协助。
3. 削减“艰难”残基